高效液相色谱法 (HPLC)

，11高效液相色谱(高效液相色谱)，高效荧光液相色谱图高perssurelyquidchematographyhigh speed eedluidchematograph，它是用来检测荧光化合物的吗？2.荧光薄层的扩散能力？部署速度有变化吗？3.推导出容量因数和特定换档值之间的关系？4.什么是超压薄层色谱？5.薄层色谱扫描仪的工作原理。高效液相色谱是在经典液相柱色谱的基础上，在色谱理论的指导下发展起来的。特别是气相色谱已迅速成为一种仪器分析方法，社会需要分离和分析难以挥发的复杂样品，推动了高效液相色谱的发展。近年来，它以6-8%的增长率发展，每年发表的论文数量超过了总产出。2000年，仪器的销售是世界上第一次。表11.1三种不同形式的液相色谱的特征。高效液相色谱与经典液相色谱的主要区别在于高效固定相、输液设备和连续检测。从速度理论出发，得到塔板方程：涡流扩散、流型效应和滞止流动相中的慢速传质都与dp有关，较小的dp有利于提高塔效率。高效固定相的重要特征是微粒。固定相传质缓慢与df有关，降低df有利于提高柱效率。键合相色谱可以有效降低df，进一步提高柱效。传统液相色谱填料的缺陷填料通常粒径大、范围宽、不规则、难以均匀填充、扩散和传质阻力大、谱带宽。它有致命的弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。高效液相色谱填料(高效固定相)颗粒细小，直径范围窄，能承受高压。”。传质阻力小，分离效率高。早期高效液相色谱的固定相是通过包衣制备的，df很大，和气相色谱一样，会大大降低色谱柱的柱效。现代高效液相色谱填料采用键合固定相，固定相膜很薄，大大提高了柱效率。(高效固定相带来了哪些新问题？高效填料的使用带来了两个新问题：柱的流动阻力大大增加，用于输液的高压泵的表面能非常大。目前，经典液相色谱主要采用专业的柱装技术进行制备，离线或间断检测进行分析。高效液相色谱的特点是高效色谱柱、高压注入设备和高灵敏度检测器，从而实现了与气相色谱相当的高效、高速、高灵敏度、准确定量和分离分析性能。”。特别是与计算机技术相结合，高效液相色谱已经成为一种高度自动化和智能化的现代分析仪器。历史上出现过不同名称的高效液相色谱：高压液相色谱和高效液相色谱。简而言之，高效液相色谱比传统液相色谱使用更方便，对操作者的依赖性更小。高效液相色谱的高重现性和连续定量检测使定性和定量分析结果具有更高的准确度和精密度。经典液晶的特点：简单方便，包装一次性使用。高效液相色谱的基本设备、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和、和.高效液相色谱框图，流动相高压泵注射器色谱柱检测器积分器流速控制阀门注射温度效应，旋转六通阀A)取样位置(负载)b)注射位置(注射)。嘿。嘿。嘿。一般来说，色谱和电泳仪器的仪器流程基本相同。从构成仪器的功能块来看，它可分为六大系统：流动相供应和输送系统、取样系统、sep色谱检测器色谱数据处理，流路系统(分析单元):高压和低压流路，电路系统(控制单元):信号传输和处理，色谱检测器(流出物的连续检测)，它实际上是一种能量转换装置，将流动相中组分含量的变化转换成可测量的电信号(通常是电压)，然后输入记录器。从原理上分析，任何分析和鉴定方法都可以是色谱检测器。理想的检测器应具有高灵敏度、大线性范围和对所有待测元件的相同响应。一般检测器分为：热、光、电、电化学。检测器通用性能检测器：热导、微分折射、电导溶质性能检测器：氢焰、紫外、荧光通用检测器和选择性检测器浓度检测器和质量检测器。检测器的线性、灵敏度和柱外效应直接影响色谱定量分析的准确度、精密度和重现性。探测器的线性范围大多数制造商声称他们的探测器在一定的浓度范围内是线性的。事实上，检测器的线性方程可以表示为：y=AC，并且只有在三个数量级的浓度范围内满足0.981.02的线性响应的检测器是线性的。灵敏度色谱分析有三种不同的灵敏度表达式，即检测器本身的灵敏度、整个色谱系统的浓度灵敏度和质量灵敏度。对于定量分析，色谱系统的灵敏度很重要，因为它还包括色谱柱和仪器其他部分的影响。检测器的灵敏度(CD)实际上是指检测极限，即通常指相当于两倍噪声信号的溶质浓度。然而，色谱系统的最小检测限应该是样品浓度的两倍，对应于最大样品体积为柱外效应的10%的噪声峰高度。色谱分析中最重要的是色谱系统的质量灵敏度。最小可测值为：m=2个电荷耦合器件，c为柱效应的标准偏差。或m=6.25e (1 k)，e为柱外效应的标准偏差。检测器的颜色区域加宽对于毛细管气相色谱和高效液相色谱，检测器的颜色区域加宽是柱外效应的主要来源。通用仪器制造商在设计时已经将检测器的颜色区域减少到最小。色谱数据处理模拟信号通过模数转换器转换成数字信号，然后色谱软件用于处理和给出色谱图等信息。数据处理原理：峰值检测、数据采集、基线校正和重叠峰值的分离、手动校正的自动处理以及峰值检测峰值的检测和鉴别基于基线信号水平的预设“阈值”,超过该阈值就可以开始峰值检测。一般来说，区分峰信号的变化有以下两种方法：根据信号斜率的变化检测信号，根据积分面积检测峰信号，计算保留时间和峰面积，色谱分析中基线校正和重叠峰分离，基线漂移和色谱峰分离不完全是经常遇到的问题。通常采用谷-谷规则或预设基线漂移值参数来解决问题，色谱定量计算的自动定性定量分析是将各种计算公式编译成应用软件并存储到计算机中，通过键盘选择所需的方法。当定量计算时，微处理器通常通过保留该值来识别峰值。然而，由于各种因素的影响，保留值会在重复分析中发生变化。以下两种方法可用于确定保留值的变化范围。“时间窗”法：trt为整个色谱图中每个峰的保留值设置相同的间隔“时间窗”,指定色谱图中每个峰保留时间的变化范围。该方法设置简单，但不便于识别保留时间非常接近的相邻峰。“时间带”:tr (1a%)为待识别的每个定量峰设置了保留时间的相对变化范围。这种设置很麻烦，但它可以色谱数据处理器与色谱工作站的区别、色谱数据处理系统/机器、集成器功能：色谱数据处理的模数转换接口、色谱工作站功能：色谱数据处理控制仪器参数的模数转换和数模转换接口、色谱智能和专家系统的引入、色谱智能是新一代色谱仪的发展方向，其特点是取代部分人工智能，选择分析方法和确定最佳色谱条件，有条件地开展部分组分定性工作。这项工作不仅需要计算机技术，更重要的是要加强色谱的基础理论研究，完善色谱操作技术，特别是要制备稳定的色谱柱，从而规范操作，实现人工智能色谱。色谱专家系统是色谱智能的重要组成部分。它从人工智能和数值计算方法出发，应包括以下几个部分：(1)分离方式和塔系的选择；预处理方法和检测器的选择；(3)分离条件的优化；(4)在线色谱峰的定性和定量分析；(5)色谱硬件诊断。色谱柱(固定相和填料)是色谱仪的核心，其核心是高质量的固定相(填料)。色谱分离的首要工作是选择性能良好的色谱柱，即在一定的分离条件下，分离效率高、分析时间短的色谱柱。色谱柱的选择应考虑：固定相类型的选择主要取决于样品分离方式；柱填料的结构主要是指颗粒的形状、大小、均匀性、比表面积、平均孔径和孔容。色谱柱规格是指色谱柱的品牌/制造商，包括内径、色谱柱长度和填料粒度。色谱柱的结构由柱管、填料、密封圈、过滤板、柱头等组成。应特别注意柱头的规格和无死体积连接的特点。柱规格制备柱分析柱微柱高效液相色谱毛细管高效液相色谱快速柱：高性能短柱，如4.630 mm，3 MODS柱，整体柱，整体柱是一种连续床固定相，通过有机或无机聚合方法在色谱柱中进行原位聚合。它具有制备简单、重现性好、孔隙率高等优点，可实现快速高效分离。制备工艺：硅胶整体柱，如色石性能RP-C18、硅质棒和前处理；默克公司；有机聚合物整体柱，例如双分离的CIM(对流相互作用)和其他聚合物整体柱应用：高效液相色谱(高效液相色谱)、毛细管电色谱(CEC)、微柱液相色谱(-高效液相色谱)、固相萃取和其他系统，已经成功地应用于生命科学、药理学、环境科学和其他领域的分离和分析。什么是无死体积柱头连接？无限直径效应(无限直径柱)？(1)基质材料(1)无机基质：硅胶、氧化铝、氧化锆、二氧化钛等。(2)交联聚合物：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯等。(3)复合材料：聚合物的无机基质复合层(2)形状：球形和不规则形，硅胶和二氧化硅仍然是最广泛使用的液相色谱柱填料。此外，还有聚合物多孔微球、高度疏水表面上的多孔碳、无机金属氧化物等。这种键合将使固定相具有热稳定性好、不易吸水和耐有机溶剂的优点。在70和pH 2 8的范围内能正常工作。它被广泛使用。甲硅烷基化(硅氧硅碳)键合固定相的制备反应如下：(最常见的类型！)，3)粒径和分布范围4)孔径和耐压性普通硅胶的孔径为60-125埃，而大孔硅胶的孔径为300-1000埃。硅胶填料的产品差异主要取决于：颗粒基质制备工艺的差异；(2)基质间反应的差异(2)按特征分类硅胶：极性吸附剂键合固定相(为什么键合？)，采用硅胶表面键合技术对硅胶颗粒表面进行改性硅烷化，使硅胶表面具有不同的官能团，以满足不同的分离要求。目前，78%的色谱填料是键合的(C18占反相色谱的72%)，硅胶约占10%。a .基质：200-300m2/g硅胶；聚苯乙烯和聚乙烯醇胶等聚合物。嘿。键合相类型，烷基：C1、C2、C3、C4、C6、C8、C12、C16、C18、C22等反相柱；苯基：C6H5-，含-相互作用；氰基：-(CH2)3-氰基，带有给电子和氢键的羟基；正常相位或反相位都是可以接受的。氨基：-(CH2)3-NH2，弱阴离子键合相，可用于糖分析。其他极性键合相包括：二醇锂二醇；硝基核白细胞介素-2；二甲胺核il-nme2等。c .粘合层(单层和聚合物)。色谱柱性能测试：应规定色谱条件和检测物质。1.理论托盘高度2。峰值不对称系数：应小于或等于1.23。相对保留值和分配比的重现性：精密度应优于5%和10%。4.柱阻力系数：=0.1Pt0dp2(109L2)，多孔填料500-10005。降低托盘高度，流动相和流动相(洗脱液和洗脱液)是影响液相色谱分离的非常重要的实验因素。改变流动相的性质和组成将改变溶质组分的保留值、分离选择性和柱效率。在实际工作中，大范围的流动相是液相色谱的显著特征。流动相的选择和优化是大多数液相色谱分析的主要研究工作。在合理的时间内，所用的流动相应能充分分离样品成分。高效液相色谱流动相溶剂的理化性质(部分)、合适的选择性溶剂、液相色谱溶剂的选择范围、液相色谱流动相溶剂的选择步骤：选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等。选择合适洗脱强度的溶剂：简单样品，2k5；对于复杂样品，0.5k20改变溶剂的选择性，使分离的组分具有较高的值。所有溶剂，具有适当物理性质的溶剂，具有适当保留值的溶剂，流动相溶剂的选择，考虑到溶剂的实际要求：实际操作中选择的流动相可以保证色谱系统的分离过程可以重复；溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性要求；溶剂不应干扰检测器的操作；在制备和分离过程中，溶剂应易于去除，且不影响分离组分的回收。1.对色谱系统的适应性：溶剂应具有一定的化学稳定性，不与固定相和样品成分发生反应。2.溶剂纯度(包括毒性和价格)高效液相色谱等级：色谱洗脱液，波长透射系数等级：主要成分和杂质含量。3.溶剂的粘度应小：一般在(0.4-0.5)毫帕左右，最大不超过2毫帕。高粘度、缓慢的流动和传质以及降低的柱效率；同时，柱压增加。4.与检测器匹配：紫外检测要求mp具有低背景