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文档简介
,基因工程基本操作的四个步骤,1.获取目的基因,2.构建基因表达载体,3.将目的基因导入受体细胞,4.目的基因的检测与鉴定,1.2基因工程原理及基本操作程序,一、目的基因的获取,现代获取方法,1.从基因文库中获取目的基因2.化学方法人工合成(基因比较小,序列已知)3.利用PCR技术扩增目的基因,将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库.,基因文库,基因组文库,部分基因文库(如:cDNA文库),基因文库,1.从基因文库中获取目的基因,如何从基因文库中得到所需要的基因?,依据:目的基因的有关信息,如:根据基因的核苷酸序列基因的功能在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性。,根据已知蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。,蛋白质的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,结构基因的核苷酸序列,推测,推测,目的基因,化学合成,2.人工合成,人工合成目的基因的先决条件:目的基因的核苷酸序列是已知,质粒,DNA分子,限制酶处理,两个切口获得目的基因,DNA连接酶,重组DNA分子(重组质粒),同一种,一个切口两个黏性末端,二、基因表达载体的构建核心,基因工程的基本操作程序,目的基因的获取,基因表达载体的构建,将目的基因导入受体细胞,目的基因的检测与鉴定,1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成,复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因,农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、Ca2+处理法,DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原抗体杂交技术,分子检测外的个体水平鉴定,1限制酶可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶BamH、EcoR、Hind及Bgl的辨识序列及每一种限制酶的特定切割部位。,其中哪两种限制酶切割出来的DNA片段末端可以互补结合,其末端互补序列是()ABamH和EcoR;末端互补序列:AATTBBamH和Hind;末端互补序列:GATCCBamH和Bgl;末端互补序列:GATCDEcoR和Hind;末端互补序列:AATT,经BamH处理后
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