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文档简介
高分辨率的“受激发射显微镜”(Super-resolutionmicroscopy)Imagingchromophoreswithundetectablefluorescencebystimulatedemissionmicroscopy要在衍射极限之外成像(比如说为了观测细胞中的微小结构),研究人员迄今为止必需依赖于用荧光发色团对成像目标进行标记,或依赖于不利用荧光、但灵敏度也要差得多的其他显微镜技术。现在,来自哈佛大学化学与化学生物学系的一个小组开发出了另外一种技术,被称为“受激发射显微镜”,它结合了以前用在其他多光子显微镜中的实验技术。该方法的灵敏度在包括无标记微管成像和用一个“chromogenicreporter”来监测lacZ基因表达的应用中得到展示。该方法的灵敏度比吸收方法高几个数量级,不受样品中其他发色团的干扰,而且适用于三维切片观测。重要的是,所有分子都是“受激发射显微镜”的潜在观测目标,所以它可用来对不发荧光的物质进行成像观测,如血红蛋白,这些物质以前用超高分辨率的显微镜无法观测。(Letterp.1105;News14号黄色;15号绿色,(注意同源染色体的分布);(b,c)12号染色体绿色,14号红色,15号蓝色;(d)染色体域模式图,小鼠淋巴细胞染色体的空间分布(LA.Parada和TMisteli2002),第三节核仁,间期细胞核内呈圆球形的结构,一般12个。功能是转录rRNA和组装核糖体亚单位。蛋白合成旺盛和分裂增殖较快的细胞有较大和较多的核仁,反之核仁很小或缺如。核仁在分裂前期消失,末期又重新出现。,一、核仁形态,纤维中心:是致密纤维包围的低电子密度的圆形结构,主要成分为RNA聚合酶和rDNA。致密纤维组分:呈环形或半月形包围FC,由致密纤维构成,是新合成的RNP。颗粒组分:由直径15-20nm的颗粒构成,是不同加工阶段的RNP。,Nucleolus,(一)结构含40%蛋白、60%RNA,2亚单位构成。分为70S和80S两类。大小亚单位只在合成蛋白时结合在一起,合成终止后解离。多个核糖体结合在一条mRNA上,称多聚核糖体。,二、核糖体ribosome,核糖体的组成,ProteinSynthesis,(二)核糖体组装,rDNA为重复基因,人体细胞中约有200个拷贝,rDNA没有组蛋白核心,是裸露的DNA节段,相邻基因之间为非转录的间隔DNA。,转录时RNA聚合酶沿DNA分子排列,产物排列呈羽毛状。rRNA首先出现在纤维部,而后转向颗粒部。,新合成的45SrRNA形成RNP。甲基化后经RNA酶裂解形成18s、28s、5.8srRNA。成熟的rRNA仅为45srRNA的一半,丢失的大部分是非甲基化和GC含量较高的区域。,5SrRNA定位在常染色体,合成后被转运至核仁区参与大亚基的装配。,第四节核骨架nucleoskeleton,核基质(nuclearmatrix)或称核骨架,为真核细胞核内的网络结构,是指除核被膜、染色质、核纤层及核仁以外的核内网架体系。,(一)核基质的组成,非组蛋白性纤维蛋白,10多种次要蛋白,包括肌动蛋白和波形蛋白,后者构成核骨架的外罩。已知三种支架蛋白(SC、SC、SC),SC是DNA拓朴异构酶。少量RNA(0.5%)和DNA(0.8%,MAR)。少量磷脂(1.6%)和糖类(0.9%)。,(二)核骨架的功能,1.DNA复制:提供DNA聚合酶结合位点。2.RNA复制:提供RNA聚合酶结合位点。3.与染色体构建
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