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文档简介

主要目的：测定物质还原性谷胱甘肽（GSH）的含量。主要原理：参照GSH检测分析试剂盒说明书，5,5二硫代双（2硝基苯甲酸）能和谷胱甘肽（GSH）反应产生2硝基5巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），由于2硝基5巯基苯甲酸是一黄色产物，通过测定其在412 nm处的最大吸收可确定样品中谷胱甘肽的含量用纯化的谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘肽（GSH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。用酶标仪在412 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。实验室签章一、 试剂谷还原性胱甘肽（GSH）测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、 仪器设备96孔酶标板UV-Vis可见多功能酶标仪旋涡混匀器离心机移液枪及其相应量程枪头3、 实验方法根据试剂盒说明书具体操作步骤如下:1. 上清液的制备：取稀释后的血清或组织匀浆液0.5 mL，加试剂一应用液2 mL 混匀，4000 rpm离心10分钟，取上清液1 mL进行显色反应。2. 显色反应：空白管中加入1 mL试剂一，标准管加入20mol/LGSH标准液1 mL，测定管加入上步骤得到的上清液1 mL，然后各管中分别加入1.25 mL试剂二、0.25ml试剂三、0.05 mL试剂四。3. 混匀，室温静置5分钟后，在412 nm处将酶标板空板进行扫描，准确吸取 0.2 mL各管反应液加入到新的96孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（OD值）。4. 血清中GSH含量计算公式GSH含量（mg/L）标准品浓度（2010-3mmol/L）GSH分子量（307）样本测试前稀释倍数组织中GSH含量公式GSH含量（mg/gprot）标准品浓度（2010-3mmol/L）GSH分子量（307）样本测试前稀释倍数待测组织匀浆液蛋白浓度（gprot/L）参考文献Lapshina E A, Sudnikovich E J, Maksimchik J Z, et al. Antioxidative enzyme and glutathione S-transferase activities in diabetic rats exposed to long-term AS
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