实验十二 水中细菌总数和大肠杆菌检测PPT学习课件.ppt

实验12水中细菌和大肠杆菌总数的测定，1。一个实验目的，1。掌握细菌总数的测定方法，2。掌握大肠菌群的鉴定和计数方法。巩固无菌操作技术。1.确定细菌总数的原则是将营养琼脂倒入平板中，测量被测物体单位重量或体积(g或ml)中含有的活细菌数，以确定细菌的污染程度。大肠杆菌的2个实验原理，3，2个鉴定原理，大肠杆菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该细菌主要来源于人和动物的粪便，因此它被用作粪便污染指标来评价食品的卫生质量并推断食品中肠道致病菌污染的可能性。样品中的大肠菌群以样品中大肠菌群最大可能数量(MPN)的100毫升(g)表示。4、细菌学检查程序样品总细菌大肠菌群水样稀释或未稀释水样稀释或未稀释第一步-初步发酵试验倒平板培养(乳糖发酵)3724小时3724小时菌落计数第二步-平板分离培养(平均报告)(转移鉴定培养基)3724小时革兰氏染色镜检第三步-乳糖发酵试验报告结果，实验设备1，恒温培养箱(361)，恒温水浴锅(461)，天平，灭菌培养皿和试管。2.培养基和试剂：乳糖胆盐发酵管、曙红亚甲蓝琼脂平板(EMB)、牛肉膏蛋白胨培养基、6、1。用1毫升无菌吸管吸取1毫升样品，加入9毫升无菌生理盐水制成样品(自来水、饮用水、饮料等)。)稀释成110、1100、11000等的几种稀释液。样品的稀释度(下水道水、牛奶)应该适当高。2.将1: 100、1: 10和1毫升的原始样品分别加入无菌盘中，并为每次稀释制作一个平板。注：先加入低浓度样品，然后加入高浓度样品3。将45冷却的营养琼脂倒入平皿中，摇匀，置于37下24小时。四、实验步骤测定细菌总数，七、板分四部分(见图)找出相同稀释度的平均菌落数，如：A1 A2 A33、4、菌落数：8、1)选择板菌落数2)选择稀释度3)报告菌落数 100采用两个有效数，以下数值四舍五入(也可以用10表示)，不能计数也不能计数(注明菌落计数报告：9，稀释度选择：1。应选择平均菌落数在30至300之间的稀释度。乘以稀释倍数报告2。如果有两种稀释度，并且菌落生长数量在30和300之间，则应根据两者的比例来确定。如果比率小于2，则应报告平均数。如果比率大于2，则报告较小的数字。3.如果菌落的平均数量超过300，应通过用稀释倍数乘以稀释度最高的菌落的平均数量来报告。如果所有稀释度的菌落平均数小于30，应通过用稀释倍数乘以稀释度最低的菌落平均数来报告。5.如果所有稀释度的平均菌落数不在30和300之间，并且其中一些大于300或小于30，则最接近30或300的平均菌落数应乘以稀释倍数。6.如果所有稀释度的菌落数不可计数，则不能用最高稀释倍数报告。稀释度选择和细菌总数报告的方法稀释剂和菌落数不能为10-110-210-311、36516420-16、40016，000或1.610422、760295461.637、75038，000或3.810432、89027602.227、10027，000或2.71044650513-513，000510，000或5.1105527115-270270或2.71026不可数30512-30，50031，000或3.11047不可数10-3不可数、稀释倍数、平均值、菌落数、病例数、两个稀释度、菌落数比率、细菌总数(a /g或a /ml)、报告方法最高稀释平均菌落计数x最高稀释倍数4，300306，无法计数报告无法计数，取最接近的x稀释倍数(如果有两次稀释)，检查大肠菌群胆汁盐乳糖发酵管曙红亚甲蓝平板大肠菌群纯培养乳糖再发酵管(-)乳糖再发酵管(),14,1，样品稀释无菌地将1毫升样品放入装有9毫升灭菌生理盐水或其他稀释剂的灭菌玻璃瓶中，并充分摇动或研磨使其达到1: 10的均匀稀释。 (2)用1毫升无菌吸管吸取1毫升1: 10稀释液，注入装有9毫升生理盐水或其他稀释液的试管中，摇动试管并充分混合制成1: 100稀释液。(3)再取1毫升无菌吸管，按照上述操作进行10倍稀释。(4)根据食品卫生要求或对检测样品的污染程度进行估计，选择三种稀释液，每种稀释液接种3管，每管接种1毫升。乳糖发酵试验将待测样品接种到乳糖胆盐发酵管中。如果接种量超过1毫升，使用双乳糖胆盐发酵管。1毫升或更少，带有一个乳糖发酵管。每种稀释液接种3管，放入温度为36和1的温度箱中培养24小时。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产生气体，可报告为大肠杆菌阴性。如果有，按照以下程序进行。分离培养将产气发酵管转移到曙红亚甲蓝琼脂平板上，置于36和1的温度箱中18-24小时，取出后观察菌落形态，进行革兰氏染色和确证试验。4.确认试验在上述平板上进行，选择1-2个疑似大肠杆菌菌落进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管。细菌在36和1的温度箱中培养24小时，观察产气情况。如果乳糖管产生气体，革兰氏染色阴性且无芽孢杆菌，则报告为大肠杆菌阳性。5.根据确认大肠杆菌阳性的试管数量，该报告查阅了MPN指数表，并报告了每100毫升(g)食物中大肠杆菌的MPN值。表1大肠菌群最可能数量的关键(MPN)，表18，表19，大肠菌群的测定，菌落特征的选择：黑色紫色，有光泽或有光泽的菌落；红色和粉色菌落。抑制剂：胆盐、亮绿、十二烷基硫酸钠。产酸判断：紫色培养液变黄，产气判断：发酵管中有小气泡。如果气泡在轻轻接触试管后沿着管壁漂浮，应考虑可能产生的气体，并需要进一步测试。饮用水、牛奶、冷饮和食品卫生标准细菌指数大肠菌群总细菌数饮用水100/毫升3/升灭菌牛奶 30，000/毫升40/100毫升瓶装苏打水、果味水和果汁饮料，品种100/毫升5/100毫升，实验报告，(1)，实验结果制表和计算(2)，问题1，如何判断分离的微生物是否为大肠菌群？2.为什么接