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文档简介
植物组织中可溶性蛋白的测定,植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶色变黄，蛋白质含量减少（可溶性蛋白）,课上笔记,三个指标蛋白质含量考马斯亮蓝新叶2份老叶2份，一次次加转移到1.5毫升显色反应做2次，合计4次（调零磷酸+考马斯亮蓝MDA含量沉重，磨好，反求诸己,实验原理,可溶性蛋白测定：缓冲液提取后可溶性蛋白溶于上清液中，蛋白质提取液与考马斯亮蓝G-250反应呈蓝色。在595nm处有最大吸收峰。,实验步骤,制备匀浆48小时前预处理:称取叶片三份,每份1g（最好打圆孔），30度恒温箱放置。No1:water20ml(control);No2:10ppmBA20ml;indarknessat302d.No3:10ppmABA20ml提取称叶龄差异明显的叶片各1.00g，加入5ml磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以10000g离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为蛋白提取液。显色反应取0.1ml加入5ml考马斯亮蓝，595nm比色；,可溶性蛋白质含量的计算,可溶性蛋白含量(g/g.FW)=标准曲线上查得的蛋白质量（g）提取液体积5/0.1示意如下：,MDA含量计算公式,L为比色杯厚度(cm),蔗糖对MBA-TBA反应有干扰，可用下式消除：MDA(M)=6.45(A532-A600)-0.56A450Equ.2,
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