第6章-化妆品卫生化学检验3

化妆品检验与安全性评价,安康营养与食品卫生学教研室healthtsmc,化妆品检验,第六章化妆品卫生化学检验,第一节概述第二节重金属的检验第三节防晒剂的检验第四节防腐剂的检验第五节美白祛斑成分的检验第六节发用化妆品禁用及限用物质检验第七节化妆品香精中香料成分的检验第八节化妆品中其他禁限用物质的检验,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,发用化妆品是用来清洁、营养、保护和美化人们头发的化妆品。它包括洗、护、生、染、烫发化妆品、脱毛化妆品、剃须化妆品等。发用化妆品禁用及限用物质检验常出现在染发、烫发、育发类化妆品中。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,染发类化妆品根据历史记载,古代的埃及人、罗马人、日耳曼人、中国人和印度人很早已开始染发。大约在4000年前,埃及第三王朝时有人已用散沫花(Henna)的热水提取物将头发染成桔红色。天然植物散沫花染料,至今仍用于染发。罗马人用醋酸铅掩盖灰发,方法是用浸醋的铅梳子梳理头发,使其变黑。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,染发类化妆品1856年泊金(Perkin)首先发现合成出了苯胺紫染料,为进一步合成苯胺系染料和氧化染发剂原料奠定了基础。1883年法国巴黎梦内脱(Monnet)公司首创对苯二胺类氧化染发剂,并取得了专利,从此奠定了氧化染发剂的技术基础。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,染发类化妆品1907年法国欧莱雅公司创立,最初生产天然无毒染发剂,至1925年又相继推出了各种颜色的氧化染发剂。1950年国际市场上出现了染发霜,1963年推出了染发香波。90年代染发摩丝问世,使染发化妆品花色品种日臻完善。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,染发类化妆品的分类暂时性染发剂半永久性染发剂永久性染发剂（应用最广泛）漂白剂,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,永久性染发剂的原料分类金属盐类植物性合成氧化型染料（染色效果最好）合成氧化型染料通常不使用染料，其功效原料主要是染料中间体、耦合剂和氧化剂。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,我国于2005年8月颁布在染发类化妆品中暂时允许使用的染发原料有96种。然而不少专家从一开始就警告说,各类染发剂均可能存在严重的健康隐患。如果频繁染发,久而久之则会对身体产生极大的危害,不仅会使头发脱落,而且还可能导致各种疾病的发生,如皮肤过敏、皮肤癌、恶性肿瘤等。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验化妆品卫生规范以95乙醇和水（11）提取化妆品中p-苯二胺等8种染料组分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，以峰高或峰面积定量。GC、GC-MS、HPLC-MS等方法,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验样品预处理取样品约0.5g置于已加入1亚硫酸钠溶液（VC）1.0mL的25mL具塞比色管中，加乙醇（1+1）至25mL，超声提取15min，离心（5000r/min，5min），经0.45m滤膜过滤，滤液作为待测样液。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验色谱参考条件色谱柱：C18柱，2504.6mm，10m；流动相：将三乙醇胺10mL加至980mL水中，加入磷酸使溶液pH为7.7，加水至1L。取此溶液950mL与乙腈50mL混合组成含5乙腈的磷酸缓冲溶液；流速：2.0mL/min；柱温：20；检测器：二极管阵列检测器（UV检测器），波长280nm。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,一、染发剂中氧化型染料的检验,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验烫发类和脱毛类多用碱性条件下具有较强的还原作用高毒性限用物质,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验化妆品卫生规范离子色谱法化学滴定法还可以用：单扫描示波极谱法，HPLC法。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（离子色谱法）以水溶解提取化妆品中的巯基乙酸，经离子交换柱将巯基乙酸根与无机离子分开，电导检测器测定即时的电导值，以保留时间定性，峰面积定量。该方法巯基乙酸的检出限5.8ng，定量下限20ng。按本法取样0.5g，则检出浓度为46g/g，最低定量浓度为0.15mg/g。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（离子色谱法）样品预处理准确称取样品0.5g于100mL具塞比色管中，加水至刻度，膏状样品用旋涡振荡器振摇均匀，超声波清洗器提取20min，加入三氯甲烷2mL，轻轻振荡，静置。浑浊样品，取适量样品在14000rpm转速下高速离心15min，取上清液过0.25m滤膜（0.22）后作待测样液。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（离子色谱法）色谱参考条件色谱柱：AS11-HC（250mmor50mm），柱填料为强碱性离子交换树脂，烷醇季铵作功能基；抑制器：ASRS-ULTRA；淋洗液：25mmol/LNaOH+1%甲醇混合液；淋洗液流速：0.85mL/min；抑制模式：外接水1.0mL/min，自动抑制电流50mA；氮气流速（压力）：5psi；柱温：室温；进样量：25L；检测器：抑制型电导检测器。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（离子色谱法）,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（碘量法）含有巯基乙酸及其盐类和酯类的化妆品经预处理后，用碘标准溶液滴定定量。反应方程式如下：,本方法巯基乙酸的检出限为0.46mg。取2g样品时，最低检出浓度为0.023%（w/w）。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（碘量法）样品预处理准确称取约2g样品于锥形瓶中，加盐酸20mL及水50mL，缓慢加热至沸腾，冷却后加三氯甲烷5mL，用电磁搅拌器搅拌5min后作为待测液备用。对于有机物干扰少的烫发类产品，可以加酸及水后直接测定。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（碘量法）样品测定加入淀粉溶液2mL作指示剂，用碘标准溶液滴定待测溶液，至溶液颜色突变或呈现的蓝色在1min内不消失即为终点。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（碘量法）,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,二、巯基乙酸的检验（碘量法）注意：巯基丙酸、半胱氨酸等含自由巯基的化合物对化学滴定法有干扰，应在前处理中除去。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,三、氯芥的检测有毒、生物烷化剂常用氯芥盐酸盐广谱抗肿瘤药物刺激毛根，促进毛发生长化妆品卫生规范当中为禁用物质,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,三、氯芥的检测化妆品卫生规范规定了测定化妆品中氮芥的气相色谱法。化妆品中的氮芥在碱性条件下用三氯甲烷萃取，用具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪测定。以保留时间定性，以峰高或峰面积定量。,化妆品检验,气相色谱复习,气相色谱法（gaschromatography,GC）是以气体为流动相的色谱法。当气化的被测物质随载气进入色谱柱时，基于被测物质在气相和固定相之间吸附-解吸附（气-固色谱）或分配（气-液色谱）差异进行分离。,气固色谱：利用不同物质在固体吸附剂上的物理吸附-解吸能力不同实现物质的分离。气液色谱：利用待测物在载气和固定在惰性固体表面的液体固定相之间的分配原理实现分离。,化妆品检验,气相色谱复习,优点：,分离能力强：理论板数103106灵敏度高：10-1110-13g选择性高：可分离对映体等难分离物质快速：一次分析可在几秒几十分钟完成可用于无发色团组分分析,缺点：,1.只适用于热稳定性好、易气化的物质分析2.分析非挥发性物质时需衍生化3.由于进样量少，定量进样有一定困难,化妆品检验,气相色谱复习,化妆品检验,气相色谱复习,化妆品检验,气相色谱复习,载气（Carriergas）,N2:最常用的气相色谱载气；热导率低，用于热导检测时的灵敏度低H2:热导率高，使用热导检测器时常用该载气。易燃，需注意安全He:热导率高，常用于GC-MS,化妆品检验,气相色谱复习,色谱柱,填充柱:玻璃或不锈钢材质内径24mm,长0.54m固定相颗粒：60/80目或80/100目常用载气流速：2060mL/min柱效：8001000/m常规药物分析时常用,化妆品检验,气相色谱复习,毛细管柱石英材质,外涂聚酰亚胺保护层.内径0.100.53mm，常用规格0.10、0.25、0.32、0.53mm.常用类型：涂壁毛细管(WCOT)载体涂层毛细管(SCOT)交联毛细管（用于GC-MS）载气流速：12mL/min应用分流/不分流进样,化妆品检验,气相色谱复习,三、检测方法,浓度型检测器:TCD,ECD质量型检测器:FID,FPD,NPD,化妆品检验,气相色谱复习,FPD对含S和P化合物具有选择性响应热离子检测器(TID）也称NPD对含N和P化合物具有选择性响应ECD对含电负性基团（卤素、硝基、过氧化物）具有选择性响应(10-15g/s)质谱检测器(MSD)傅里叶变换红外检测器（FTIR）,化妆品检验,气相色谱复习,气相色谱使用经验控制柱温柱温是影响分离的最重要条件。柱温降低，分离度提高，但峰宽增加，分析时间加长。等温:在分析过程中柱温保持不变.程序升温(temperatureprogramming):在一个分析周期中，柱温按照一定程序改变，以利于性质差异大的组分达到合适的分离度。该法适用于复杂组分（如宽沸程样品、极性差异大的样品）分析。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,三、氯芥的检测样品预处理取样品约5g置于25mL分液漏斗中，加入水5mL，混匀。用盐酸溶液调节pH至2以下（去除脂溶性成分干扰），加入三氯甲烷5mL，振摇30s后静置分层（必要时离心），弃去有机相。再用氢氧化钠溶液调节水相至中性，加入碳酸钠约50mg，用三氯甲烷5mL提取，振摇30s后静置分层（必要时离心），将有机相放入刻度试管中，补加三氯甲烷至5mL，加入适量无水硫酸钠干燥，待测定。氮芥标准使用溶液测定前须按上述步骤同样处理。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,三、氯芥的检测色谱参考条件色谱柱：DB-225毛细管柱（0.25mm30m）温度：进样口温度170C，检测口温度200C，柱温，50C（1min），8/min升至160C（10min）气体流量：高纯氮气60mL/min，高纯氢气50mL/min，压缩空气500mL/min；分流比：1：50。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,三、氯芥的检测,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,四、斑蝥素的检测斑蝥素具有生物活性，刺激毛根，促进毛发生长，同时也是抗癌、治疗皮癣、止痒和改善局部皮肤营养的药物。毒性较大、化妆品卫生规范规定育发类化妆品含量不得大于1%，其余化妆品中不得检出。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,四、斑蝥素的检测化妆品卫生规范规定了测定化妆品中斑蝥素的气相色谱法化妆品中的斑蝥素用三氯甲烷萃取，用具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪测定。以保留时间定性，以峰高或峰面积定量。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,四、斑蝥素的检测样品预处理称取样品5g置于25mL分液漏斗中，加入水5mL混匀。加三氯甲烷5mL振摇30s后静置分层（必要时离心），将有机相放入刻度试管中，补加三氯甲烷至5mL，加入适量无水硫酸钠干燥，待测定。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,四、斑蝥素的检测色谱参考条件色谱柱：DB-5毛细管柱（0.25mm30m）。温度：进样口温度230C，检测口温度250C，柱温，60C（1min），10/min升至230C（10min）；气体流量：高纯氮气60mL/min，高纯氢气50mL/min，压缩空气500mL/min；分流比：150。,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,四、斑蝥素的检测,化妆品检验,第六节发用化妆品禁用及限用物质检验,四、斑蝥素的检测方法说明：1.斑蝥素有毒、有强腐蚀性，小心！2.氯仿萃取容易乳化，必要时氯化钠破乳，或者用无水硫酸钠吸收样品的水分，进行液-固萃取。,化妆品检验,第七节化妆品香精中香料成分的检测,有香味的物质有40多万种香料的分类：按照来源：天然的、人工合成的天然香料：植物性、动物性合成香料：萜类香料、芳香族化合物、脂肪族化合物、含氮含硫化合物。相关标准：化妆品卫生规范日用香精GB/T22731-2008,化妆品检验,第七节化妆品香精中香料成分的检测,对于采集所得的香气成分浓缩物的再分离、鉴定，通常用色谱法，它包括气相色谱和高效液相色谱，其中尤以气相色谱法最为常用，最早利用填充柱色谱来分离香味成分，但因分离能力所限已改用毛细管柱，大幅度提高了香料分析的技术水平。另外能耐400以上高温的毛细管柱出现，可用来分析更高沸点的成分。,化妆品检验,第七节化妆品香精中香料成分的检测,香料检测方法气相色谱检测器主要采用氢火焰离子化检测器，火焰光度检测器和火焰热离子检测器。电子捕获检测器ECD可用于食品中杂环香料成分的检测。色谱质谱联用使质谱在香料成分研究领域的应用大大增加。只需很短时间就可以把一个复杂的混合物分析完毕。,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,一、糖皮质激素二、性激素三、抗生素（食品理化检验第八章）四、二恶烷（空气理化检验）五、-羟基酸六、甲醇（食品理化检验）,HPLC-MS,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,一、糖皮质激素HPLC-MSGB/T24800.2-2009正己烷分散、乙腈提取亚铁氰化钾和醋酸锌沉淀大分子排除干扰SPE净化色谱条件：C18柱流动相：水/乙腈，加入1%甲酸MS条件：正离子模式、MRM监测。,化妆品检验,UPLC-MS分析技术概述,色谱分析技术,超高效液相色谱系统(UltraPeerformanceLC),化妆品检验,UPLC-MS分析技术概述,化妆品检验,三重四级杆质谱简单介绍,以AB5500为例,化妆品检验,质谱复习,仪器种类,有机质谱与无机质谱。无机质谱按照离子源分类：火花源质谱仪、离子探针质谱仪、激光探针质谱仪、辉光放电质谱仪、电感耦合等离子体质谱仪有机质谱按质量分析器分类：磁质谱，四级杆质谱，飞行时间质谱，离子阱质谱，离子回旋共振质谱。有机质谱按离子源分类：MALDI,ESI,EI,CI,FAB按联用方式分内：GC-MS，LC-MS，CE-MS，MS/MS,化妆品检验,质谱复习,三重四级杆质谱仪,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,碰撞池,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,化妆品检验,质谱复习,AB5500,TSQ的功能,全扫描，fullscan母离子扫描，parentionscan子离子扫描，productionscan中性丢失扫描，neutrallossscan单离子监测，singleIonmonitoring多反应监测，multi-reactionmonitoringorselectedreactionmonitoring,各种检测方式示意图,MRM原理,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测总量不超过6%，pH不得小于3.5。化妆品卫生规范规定了测定洗、护发类及护肤类化妆品中-羟基酸的高效液相色谱法、离子色谱法和气相色谱法。,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（HPLC法）以水提取化妆品中乙醇酸等5种-羟基酸组分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间定性，峰面积定量。,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（HPLC法）样品预处理准确称取样品约1g于10mL具塞比色管中，水浴去除挥发性有机溶剂，加水至10mL，超声提取20min，取适量样品在10000rpm下高速离心15min，取上清液过0.45m的滤膜后作为待测溶液。,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（HPLC法）色谱参考条件：色谱柱：C8柱，250mm4.6mm，10m；流动相：0.1mol/L的磷酸二氢铵溶液，用磷酸调pH值为2.45；流速：0.8mL/min；柱温：室温；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为214nm；,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（HPLC法）,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（HPLC法）,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（离子色谱法）以水提取化妆品中乙醇酸等5种-羟基酸组分，离子色谱柱分离各组分，电导检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量,化妆品检验,第八节化妆品中其他禁限用物质的检测,五、-羟基酸检测（离子色谱法）样品预处理准确称取样品约0.5g于50mL具塞比色管中，加水至刻度，旋涡振荡器振摇均匀，超声波清洗器提取20min，取适量样品在19000rpm下高速离心10min，取上清液过0.25m滤膜,作为待测样液。,化妆品检验,