结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义.ppt

干扰素释放试验(IGRAs )的临床应用，南京医科大学第二附属医院呼吸科沉红，1 .结核病诊断现状，2.TB-IGRA产品介绍，3.TB-IGRA的临床应用，4.TB-IGRA的测定方法和结果解释，3 .结核病现状，结核病(tuberculosis )为结核分枝杆菌(tuberculosis ) 肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。 在全身各器官都能看到。 肺外结核占总发病率的10%-20%，死亡率占总结核死亡率的14.1%-17.6%。 全世界约有三分之一的人感染，2014年全球结核病报告在2013年有900万新发病例，显示有150万人死亡。 我国是结核病多发地区，发病人数居世界第二位，目前有600万活动性肺结核，且患者人数逐年增加，居全国甲乙类传染病之首。电子显微镜下结核菌worldhealthorganization.globaltuberculosisconstrail : epidemiology、strategy、financing : who report 2011 (who/htm/TB/2011 ) . genesiva:who 2011年，2010年新发生了880万名结核病患者，其中59%为亚洲，26%为非洲，发病者前5名，India (2.0million2.5 million ) (26 % ) China (0.9million1.2 ) south Africa (0.40 million0.59 million ) Indonesia (0.37 million0.54 million ) Pakistan (0.33 million0.48 millon )、38%， 结核的现状和危害-传播范围广泛的worldhealthorganization.multidrugandinextvelydrug-resistant Bt (m/XDR-TB ) :2010 globalreportonsurveillanceandesport 2010.3 .是全球27个国家MDR-TB流行严重的国家之一，中国特别严重，HIV感染和艾滋病破坏机体免疫系统，加剧结核病的发病，HIV患者中有1/3患结核菌感染率增加贫困，移民等细菌学涂膜率低，2/3TB患者菌阴性，原因、 结核发病机制，结核分枝杆菌(MTB )，暴露，感染，9%，复发，注：感染后有无发病与机体敏感性有关，5-10%，HIV10%，活动性结核：发病状态潜在结核感染(LTBI ) :宿主感染结核后，处于尚未发病的特殊状态，未根治， 结核病免疫主要是细胞免疫，et al.theimmunologyoftuberculoisis : frombenchobeside.resi rgy，2010，1533，433-450， 11、时间长48周的检测率低50%、涂阴检测率低22%-38%的肺外结核较难，结核检测方法比较结核诊断、x线、分子诊断、涂膜镜检查细菌培养、特异性差误诊肺炎、肺癌外结核较难，操作复杂的技术中，高涂阴检查难34%的肺外结核较难， NTM检查率为20%的肺外结核困难，假阳/假阴多则无法区分(涂阴45%/35%)WHO无效，抗体检查，提出TST (结核菌素皮试)，bcg接种者无法区分NTM48-72小时复诊，接触史临床症状病原/病理，12，TB-IGRA Tuberculosis 在Interferon (干扰素) Gamma()Release (释放) Assay (测定)原理：感染者体内感染结核菌(TB )抗原的效果t细胞，在体外受到相同抗原的刺激(APC辅助下)时，会分泌大量的IFN-(细胞因子)。 通过IFN-的检测判断结核感染情况。1 .结核病诊断现状、2.TB-IGRA介绍、3.TB-IGRA临床应用、4.TB-IGRA测定方法和结果说明、TB-IGRA方法介绍、ELISA、elispot、流式细胞术、IGRAsIFN-greleaseassay、体外刺激： RD1抗原、 原理：在生物体内被结核菌抗原致敏的效果t细胞，在体外受到同样抗原的刺激(APC辅助下)，会分泌大量的IFN-(细胞因子)。 通过IFN-的检测判断结核感染情况。2种TBB-igra比较、高孟秋、刘菲、纪滨英等. 2种-干扰素释放分析结核临床诊断的比较研究.中华结核与呼吸杂志，2012，35 (10 ):762-765，TBB-igra产品特性， 高灵敏度检出率在85%以上的高特异性RD1区编码的ESAT-6和CFP-10这一特异性抗原具有较强的Thl细胞免疫原性，且在制备BCG苗的所有菌株和环境中几乎不存在，不受BCG苗和非分枝杆菌的影响，国内外相关研究、 TB-IGRA是一种快速简便、值得推广的测定方法：张华、黄圣文罗振元.结核分枝杆菌r干扰素体外释放定量试验诊断结核的临床应用.中华医学院感染学杂志2009年第19卷第14期，国内外相关研究，1 .结核病诊断现状，2.TB-IGRA介绍，3.TB-IGRA的临床应用， 4.TB-IGRA的测定方法和结果说明，临床应用实例，肺结核辅助诊断：某医院呼吸科患者男性临床症状：发热1周，咳嗽检查结果： TB-IgG(-)，TB-IGRA()T-N值为21.5pg/ml，结果分析： TB-IgG灵敏度低，易漏检。 临床诊断：肺结核备注： 2011年，WHO建议不使用结核抗体检测结核感染，临床应用实例：肺外结核诊断：某医院感染科，女，75岁临床症状：发热几天，胸痛，干咳检查结果： x线胸腔积液图像，积液涂片(-)，积液培养(-)，TB-IGRAT-N350pg/ml， 积液单球增多，血沉快结果分析：肺外结核诊断、涂片和培养阳性率极低，结合TB-IGRA ()，其他非特异性辅助指标可明确诊断肺外结核。 临床诊断：结核性胸膜炎，临床应用实例，肺炎与肺结核鉴别诊断：某医院呼吸内科，男，59岁临床症状：肺部有胸水，高热发热，初步鉴定肺炎，抗生素治疗1周无效，强烈怀疑结核。 检查结果：痰涂片(-)、结核抗体(-)、TB-IGRA(-)结果分析：传统结核检测率为20%-40%，灵敏度低。 IGRA检测率在90%以上，阴性排除的意义高于涂膜和抗体。 患者连续用药三周，病情好转。 临床诊断：肺炎，23，MTB及其他杆菌感染鉴别诊断：某医院呼吸内科患者，男性临床症状：发热、咳嗽、痰、呼吸困难、乏力、多汗、关节痛检查结果：痰涂片(-)菌培(-)肺部x线可见肺结节，胸腔积液诊断过程：我院诊断为结核，治疗不佳，患者入院行IGRAs(-)试管凝集实验结果痰涂片和菌培检出率低，阴性不重视，仅x片和症状诊断结核治疗。 治疗失效后，患者转院，检测IGRAs阴性，考虑排除结核，患者是牧民，诊断布氏杆菌病。 诉讼败诉后，我院首次开始重视IGRAs检查。 最终确诊：布氏杆菌病，临床应用实例，MTB和NTM鉴别诊断：某医院感染科患者，男性临床症状：发热1周，咳嗽，少量痰检结果： 2次痰涂片(-)，2次TB-IGRA(-)，肺部x线无异常，后经菌培养鉴定为菌培()，结果：痰涂片不能区分非结核分枝杆菌，假阳性临床诊断：鸟型分枝杆菌感染、临床应用实例、NTM (非结核分枝杆菌)比例增高，2000年全国流通分离的抗酸杆菌菌株中，NTM菌株占11.1%，其中90%为非结核分枝杆菌肺病。 NTM肺疾病的临床表现与结核病相似，既有全身中毒症状，也有局部损害表现。 但症状和体征无特异性，20%-50%的患者无明显症状，除非进行菌型鉴定，临床表现很难与肺结核病区别开来。 PPD试验：弱阳性较多，但不能鉴别MTB和NTM感染。 细菌学检查：常规痰涂膜不能鉴别MTB和NTM。培养特性：在固体培养基中，NTM菌落始终光滑，部分菌落产生色素，生长快，可在含有pnb (对硝基苯甲酸)和TCH (噻吩羧酸肼)的选择性培养基中生长，但结核分枝杆菌只能在TCH选择性培养基中生长。 在使用抗TNF药物前查明结核病的意义为06.16.2011，26，发病率/100.000患者/年，DixonWGetal.AnnRheumDis2010； 69:522-528 .tubecachetal.arthritis 605365884-1894，发病率/100.000患者/年，潜伏性感染监测，某中学高三小学结核爆发，初期病例，1例(7班)，6月初，第一次疫情，5例(7班)，8-9月，第二次疫情九月， 对、先生的采血进行IGRA检查，IGRA阳性者进行预防性服药、疫情控制，自行入院，全年级老师和学生的胸透预防性服药、全年级老师和学生的PPD试验、疫情发展阶段、结核病例和分布、疫情、疫情初动处理定量测定小型结核流行的调查和控制、潜在感染、抗结核治疗监测干扰素的释放强度，可以持续监测、辅助评价抗结核疗效，Kobashi等人利用IGRA跟踪50例结核患者的治疗：治疗开始后， 结核患者中IGRA的敏感性和反应强度有明显降低的趋势，如上所述，TB-IGRA :特异性高，灵敏度高，体外、全血定量检测的应用方向：辅助肺结核的诊断，辅助肺外结核的诊断，诊断潜在性感染的监测，抗结核治疗的追踪，TBB-igra的临床应用， 总结TBB-igra的应用，辅助肺结核诊断，特别是细菌学检查阴性肺结核诊断： TBB-igra从细胞水平检测结核感染，检测率高，可检测早期感染，实现早期诊断早期治疗。 肺外结核辅助诊断： TB-IGRA抽静脉血检查，克服了肺外结核患者痰样未发现结核菌、病灶部取样困难的问题。 呼吸道疾病与结核鉴别诊断：发热、咳嗽、咳痰2周咯血胸痛等症状疑似结核，胸片/CT不能明确诊断者抗炎治疗疗效差者的结核筛查，阴性结果可排除较多结核。 2周以上不明原因发热患者结核感染的调查：其中20%是结核所致，大部分是肺外结核。 高危人群结核感染筛查：如生物制剂/免疫抑制剂、大剂量激素患者、HIV患者、糖尿病患者、血液病和癌症化疗前患者进行结核筛查，防止陈旧性结核、潜伏性结核爆发和近期结核感染。 随访抗结核疗效并定期监测潜在结核： TB-IGRA结果为定量值，活动结核患者经治疗阳性强度降低，进而变为阴性的潜伏感染患者阳性强度显着上升，有发展为活动结核的风险。 流程调查显示，85%90%的新诊断活动性肺结核是由潜在性结核演变而来的。 已有25个国家发布了IGRAs应用指南：美国、加拿大、英国、巴西、法国、西班牙、意大利、德国、澳大利亚、葡萄牙、爱尔兰、瑞士、丹麦、挪威、芬兰、捷克、斯洛伐克、波兰、保加利亚奥地利、韩国、日本、中国、潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断(美国CDC、英国NICE中国)诊断为疑似结核，阴性结果排除感染(中国)所有人中PDP试验(美国CDC、日本厚生省) 取而代之的是在接受抗TNF-a治疗前必须在IGRA进行结核杆菌感染的筛查，PDP筛查不再使用(瑞士卫生局和肺科协会)的两个国际组织WHO、ECDC也发表了应用指南。 万泰TB-IGRA试剂是中华人民共和国出入境检验检疫行业标准-结核分枝杆菌-干扰素体外检验方法中唯一提及的结核病检验试剂。1、结核病诊断现状、2.TB-IGRA产品介绍、3.TB-IGRA临床应用、4.TB-IGRA测定方法和结果说明、万泰TB-IGRA、北京万泰生物药业株式会社、国家传染病诊断试剂和疫苗工程研究中心、厦门大学、研发6年、 2012年4月取得SFDA认证的国食药监测器(准)字2012第3400557号，TB-IGRA检查方法，阴性对照管n，阳性对照管p，检查管t，培养液无刺激原，培养液刺激抗原，培养液PHA，TB特异性刺激抗原(RD1区： ESAT-6，CFP-10 )，刺激非特异性刺激抗原(PHA )，评价-IFN上升水平评价-IFN背景水平，评价t淋巴细胞活性，结果发现，、ELISA定量分析，t :试验培养管(t )含量值n :背景对照培养管(n )含量值p :阳性对含量值、TB-IGRA结果判定、全自动酶无平台系统、TB-IGRA注意事项血管采集建议使用BD或GreinerBio-One肝素采集血管，内毒素最少、对结果影响最小的采血至分注4小时以下混血激烈/避免溶血等患者情况免疫系统异常患者的检测效果受到限制，活动和潜在的无症状阳性处理依据下一个治疗和患者意愿防治不确定结果的原因免疫系统异常患者免疫力下降和干扰素底部过高，无法判断，TBB-igra的临床参