土壤有效磷测定

土壤速效磷的测定(0.5M碳酸氢钠法) （一）方法原理： 用PH8.5的0.5M碳酸氢钠溶液，于温度25左右提取分离土壤速效磷。取一定量的提取液,控制显色中的硫酸的浓度为0.4N，钼酸铵的浓度为0.1%，以氯化亚锡为还原剂，使形成“磷钼兰”溶液。用比色计测定其兰色强度，然后于标准曲线上查找其相应的浓度，从而计算土壤中的速效磷的含量。 （二）试剂配制： （1）0.5MNaHCO3：称取化学纯NaHCO3 420.0克放入血清瓶中。加8000ml水溶解后，定容10000ml，摇匀，一般情况下，这样配制的溶液可得PH8.5。应用酚酞指示剂检查：取溶解后的溶液2ml于试管中，加入1滴酚酞应为微红色，否则用0.5N NaOH逐滴加入，边加边摇动血清瓶。调节至PH8.5，在定容10000ml，摇匀。 （2）硫酸钼酸铵试剂： a.贮存液：称化学纯钼酸铵50.0克于800ml水中，微热溶解。另取化学纯浓硫酸（比重1.84）903ml，分次徐徐加入盛有2000ml水的3000ml三角瓶，并不断用玻棒搅拌，冷却后备用。 将钼酸铵溶液徐徐加入硫酸溶液中，并不断搅拌，稀至5000ml（用容量瓶稀释多次定容），摇匀，此溶液贮于紧塞的细口瓶中，放在暗处保存，其钼酸铵浓度为1%，硫酸浓度为6.5N。 b.使用液：使用时视其用量，将贮存液准确稀释5倍（即1份体积贮存液加4份体积水），摇匀，即可使用。 （3）10%HCL溶液：取分析纯浓盐酸（比重1.19）239ml，加入500ml水中，以水稀释定容至1000ml，摇勺。 （4）氯化亚锡溶液：称取1.00克氯化亚锡（二级）溶于40ml10%HCL中。此试剂每天新鲜配制。 （5）标准磷溶液：准确称取经45烘干6小时分析纯KH2PO4 4.3936克于小烧杯中，用少量水溶解后，将溶液毫无损失地溶解洗入1000ml量瓶中，加入2ml浓硫酸，稀释至刻度，摇匀，即为1000PPm/ml标准磷溶液。再准确吸取此液25.00ml于500ml量瓶中，用0.5M NaHCO3稀释至刻度，摇匀，即为50PPm磷的标准溶液。将50PPm磷的标准溶液用0.5M NaHCO3溶液准确稀释至50倍，即为1PPm磷的工作曲线标准磷溶液。每次使用前必需摇匀（不要长期保存）。 （三）操作步骤： 1.制备待测液:称取过20目筛的风干土样2.50克于200ml左右塑料瓶中，用快速自动加液管加0.5M NaHCO3 50.00ml，盖紧瓶塞，放在251恒温室或保温箱内，保温振荡30分钟，立即用干燥过滤器保温过滤，滤液承接于60ml塑料杯内。 2.显色：分别用快速移液管吸取滤液5.00ml于20180mm试管中，再加硫酸钼酸铵使用液5.00ml，轻轻摇动，以驱除CO2（防止试液溅出），最后充分摇匀，加氯化亚锡溶液1滴，再摇匀，当室温在20左右显色1015分钟，否则应延长至2025分钟。 3.比色：取一对经检查消光值相等的直径1cm比色皿，一制装蒸馏水做空白，另一支在测定时先倒入显色液冲洗后，装入显色液，于光电比色计上，用红色（或680nm波长）滤光板测定其消光值（E）。根据E值在标准工作曲线上查出其相应浓度PPm（P）。 4.标准磷液的工作曲线的绘制： 用快速移液管准确按下表，用6只20180mm试管配制系列标准液后，进行显色测定： 标准系列溶液浓度（PPm） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.5M NaHCO3毫升数 5 4 3 2 1 0 1PPm/ml标准磷液毫升数 0 1 2 3 4 5 分别加入硫酸钼酸铵使用液5.00ml，充分摇匀，出去CO2，再逐个加入氯化亚锡溶液1滴，摇匀，与待测液一样的条件显色后进行比色测定，以消光值E值为纵坐标，浓度为横坐标作一直线，在操作正确的条件下，方格坐标纸上相应的点，应该连成一条直线。 （四）注意事项： 1.要求每天做一次工作曲线。当更换操作人员、试剂、光电比色剂的硒光电池，灯泡和电源时，都应重作工作曲线。每批样品做12个参比土样，以检验分析结果可靠程度。 2.土样中有机质含量大于5%以上或者滤液颜色太深，可加无磷活性炭一小勺，以消除腐殖质带来颜色的干扰，一般情况下，没有必要加入。 无磷活性炭的制作：先用10%盐酸将活性炭浸泡过夜，次日用平板磁漏斗抽气过滤，用水洗去盐酸后，再用0.5M NaHCO3溶液浸泡一夜后过滤，以0.5M NaHCO3溶液洗3-4次，再用水洗去碳酸氢钠，并检查到无磷（PO43-）反应为止（用钼兰法检验），烘干备用。 3.显色时间应视具体温度而定，一般为10-20分钟，最好根据当时温度条件进行显色稳定时间的试验。 4.提取和过滤的温度对有效磷的含量有较大影响，据原法作者指出：用碳酸氢钠法测定时的温度在20-30，土壤有效磷含量在5-40PPm（P）时，温度每相差 1测定结果平均相差0.4