血清(浆)脂类及脂蛋白测定PPT课件

.,1,血清（浆）脂类及脂蛋白测定,董雷鸣,.,2,血脂的组成：,甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯)磷脂胆固醇和胆固醇酯非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等,.,3,血脂的运输形式脂蛋白,1、定义：指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。,.,4,磷脂胆固醇载脂蛋白,甘油三酯胆固醇酯,2、结构：,脂蛋白微粒,表面,核心,.,5,.,6,3、分类,(1)按密度不同,HDLLDLIDLVLDLCM,.,7,(2)按电泳时区带的泳动位置不同,-LP前-LP-LPCM,.,8,临床血脂测定的常见项目：,.,9,实验51：,磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,.,10,提取HDL测定胆固醇,实验原理：,.,11,超速离心法层析法电泳法沉淀法,提取HDL的方法：,.,12,沉淀法原理：,.,13,硫酸葡聚糖-Mg2+肝素-Mn2+磷钨酸-Mg2+,多阴离子（polyanion）化合物,.,14,过氧化物酶,胆固醇+O2胆甾烯酮+H2O2,H2O2+酚+4-氨基安替比林亚胺醌+H2O,胆固醇测定（酶法）：,.,15,试剂：,沉淀剂酶试剂参考血清（TC测定用的定值血清）,.,16,操作步骤：,取血清和沉淀剂各200l，充分混匀，置室温放置10min后，2500r/min，15min，吸取上清液按表进行操作。,1、提取HDL,.,17,混匀，37水浴15min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。,2、测定胆固醇,.,18,计算：,参考值：,HDL-C(mmol/L),测定管吸光度,标准管吸光度,=,定值血清胆固醇浓度,5.17,0.92.0mmol/L,2,.,19,注意事项：,1、血清标本要及时测定（在室温条件下，各型脂蛋白之间会发生脂质交换）；（游离的胆固醇会不断酯化）。2、离心过程中防止温度过高（室温1525），离心后放置时间不能过长。（温度过高使沉淀不完全）。,.,20,临床意义：,具有抗动脉粥样硬化作用，是冠心病的保护因素。,.,21,.,22,磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯（TG）,实验49：,.,23,甘油三酯(TG)的结构：,.,24,甘油三酯测定的方法：,化学法酶法,.,25,化学法,（KOH）,（过碘酸）,皂化,氧化,抽提甘油甲醛显色,.,26,甘油三酯,甘油,甲醛,变色酸,紫红色,.,27,甘油三酯,3-磷酸甘油+ADP,+ATP,O2、H2O+,磷酸二羟丙酮+H2O2,甘油+脂肪酸,+酚、4-氨基安替比,亚胺醌+H2O,LPL,GK,GPO,POD,酶法（磷酸甘油氧化酶法）,.,28,试剂：,酶试剂,2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液,.,29,操作：,37水浴10min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。,.,30,计算：,TG(mmol/L),测定管吸光度,标准管吸光度,=,标准液浓度,参考值：,0.561.70mmol/L,2.26mmol/L,.,31,临床意义：,增高:与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。,降低:营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。,.,32,注意事项：,标本：标本要求是餐后12-14h的空腹血液（血清TG易受饮食影响）。标本存放不宜超过3天（避免TG水解而释放出甘油）。试剂：酶试剂应4避光保存，出现红色不可再用。,.,33,免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B,实验53：,.,34,抗原,抗原抗体复合物,抗体,+,ApoA1A