分子诊断策略与常用技术(ppt 23页).ppt

第12章分子诊断，1。分子诊断的概念、特征和概念：利用现代分子生物学和分子遗传学技术和方法，通过检测基因结构或其表达水平是否正常来诊断人类健康和疾病的方法。传统诊断：表型基因型基因诊断：基因型表型(反向诊断)，特异性强，灵敏度高，早期诊断适应性强。首先，分子诊断的概念和特征用于检测致病基因突变。与疾病相关的遗传标记分析；建立多基因疾病的表型克隆；致病基因表达水平的定量分析已经阐明了疾病表型与基因型之间的关系，分子诊断的前提，4、2、分子诊断策略，直接诊断直接检测致病基因的突变基因突变类型缺失、点突变、重复、插入等。间接诊断以DNA多态性为遗传标记进行连锁分析，以确定受试者是否获得了具有致病性的染色体，从而间接诊断DNAPolymorphism RFLP、VNTR、SNP。DNA多态性群体中每个个体的DNA区域中的等位基因(或片段)以两种或多种形式存在，并且对基因功能没有影响，这被称为DNA多态性。DNA分析中常用的遗传多态性标记有三种：1)RFLP:限制性片段长度多态性，这是第一代多态性标记；(2)重复序列多态性(VNTR):如果STR的重复数在人群中变化，则形成多态性，即第二代多态性标记VNTR；3)单碱基多态性(SNP):发生在基因组中的单核苷酸替代作为第三代多态性标记。2，分子诊断策略，3，常用的分子诊断技术，核酸分子杂交技术，等位基因特异性寡核苷酸探针(ASO)，脱氧核糖核酸限制性片段长度多态性，RLFP)分析，聚合酶链反应-聚合酶链反应脱氧核糖核酸测序，脱氧核糖核酸芯片技术，点突变(CtoT)，5 ，3 ，3 ，5 ，G，探针1，探针2，A，等位基因特异性寡核苷酸探针(ASO)。其原理是，在改变DNA限制性片段长度的DNA序列中发生突变后，获得或失去一个限制性识别位点。在群体中形成的两种或两种以上的限制类型使用特定的限制识别位点进行基因分析、限制片段长度多态性分析(RFLP)、RLFP分析和RFLP分析，具有分辨率高、无需标记、重复性好、简单、快速和直观的优点，主要用于核酸变异分析和比较、微生物分组和分型、癌基因分析和遗传病诊断等。限制性内切酶只能用突变来引起限制性内切酶位点的变化进行筛选，检测效率低。原理是使扩增的DNA片段变性形成单链。由于序列不同，单链构象也不同。中性聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率不同。通过与标准物质进行比较，可以检测出有无变异。该方法检测基因变异，操作简单快速，不需要特殊设备，适合大样本筛选。它已被广泛用于检测各种病原体基因的点突变和缺失突变，基因多态性分析等。聚合酶链反应/单链构象多态性分析(SSCP)，(聚合酶链反应-SSCP)示意图，脱氧核糖核酸测序，脱氧核糖核酸自动测序结果的例子，脱氧核糖核酸芯片技术，第四版。分子诊断、遗传病鉴定、肿瘤感染性疾病、个体疾病易感性、个体鉴定、亲子鉴定、Mst切割位点(CCTNAGG)、5，3、正常基因、法医学中的突变基因、1.15kb、1.35kb、镰状细胞性贫血患者基因组的限制性酶切分析、gag gtggu Aa valaa、0.2 kb、1.15 kb、1.35 kb、正常人、携带突变、患者限制性酶切分析、镰状细胞性贫血患者基因组、 正常 基因探针与正常探针 突变基因探针与异常S稳定杂交，镰状细胞性贫血患者基因组的ASO探针杂交，20，点杂交结果：镰状细胞