第十八章支原体PPT课件

.第1，18章支原体、衣原体、立克次体，第一个支原体是细胞壁缺乏、形态上高的多态性，是通过杀菌过滤器在无生命培养基上生长和繁殖的最小原核细胞型微生物。因为制造有树枝的灯丝，所以被称为支原体。2，支原体科等离子体和尿素2属。引起人的疾病的主要原因是支原体、支原体hominis、支原体hyopneumoniae、ureaplasma urealyticum。此外，支原体经常污染细胞培养，给实验室病毒分离、单克隆抗体制造等带来一些困难。3，1，支原体，感染在世界范围内分布，主要侵犯呼吸道，通过诱导运动，通过粘膜上皮细胞纤毛屏障，主要附着因子是胰蛋白酶敏感表面蛋白的一种pl蛋白。4，是青少年急性呼吸道感染的主要病原体，表现为上呼吸道感染综合症，占非细菌性肺炎的三分之一以上。过去被认为是温和的病原体，现在认为可能引起心肌炎、心包炎、免疫溶血性贫血、肾炎等严重的双侧肺炎或其他系统的肺外并发症。5，微生物特性，1 .形态和结构像酒瓶，没有细胞壁，只有细胞膜。G-易着色，Giemsa染色为浅紫色。细胞膜含有很多胆固醇含量。P1蛋白在所有肺炎2株中通用，是主要特异性免疫原性和血清学诊断的主要抗原。6，2。抗原结构来自细胞膜，细胞膜外蛋白是主要抗原，通常通过生长抑制试验(GIT)和代谢抑制试验(MIT)确认。GIT将吸出特定抗血清的滤纸精制纸放入经过支原体接种的固体培养基中，通过培养抑制支原体生长。在含有抗血清菌的培养基上接种支原体的MIT，如果抗体与支原体型相匹配，这种支原体会抑制葡萄糖不能分解。这两种方法可以将支原体分为几种血清类型。7，3。培养特性为2分割生殖，繁殖缓慢；成长需要胆固醇。反复出现能快速溶解哺乳动物红细胞的“产卵”之类的群体。4.肺炎支原体生化反应根据葡萄糖、精氨酸水解和尿素的使用情况，与其他支原体确认。8，5。阻力，1。对热的抵抗力一般类似于细菌。耐冷-70 或液氮可以长期保存，4 放置也不超过3天。2.支原体对干燥敏感，干燥的标本很难分离支原体。细胞壁青霉素不敏感。9，检查程序，1 .肺炎支原体采集有黏附细胞，咽拭子标本好。采访后要立即接种。2.PCR方法快速、灵敏、特异性，目前一些临床实验室用特定引物通过这项技术在患者痰中检测肺炎支原体DNA。没有细胞壁的电子显微镜很容易与细菌识别。10，4。以分离培养、牛心消化液为标准，添加小牛血清20%和新鲜酵母提取物制成的液体或固体培养基。添加青霉素可以阻止杂菌的生长。早期分离生长缓慢，含有5% C02的培养，10天煎蛋卷群殖民地。可以发酵葡萄糖生产酸，不能利用精氨酸和尿素还原米蓝。分离培养阳性率不高，对临床诊断没有什么意义，但对流行病学调查有很大的意义。11，5。抗体检测，(1)ELISA:这是敏感、特异、快速、经济、检测IgG和IgG抗体，用于当前诊断的可靠方法。分子量190kDa P1蛋白检测，3h可完成测试，特异性高，敏感性104 cfu/ l标本。12，(2)补体结合(CF)检查，实验从氯仿甲醇中提取的糖脂抗原。双血清检查，效价为4倍以上的老年人或单血清效价 l: 128人，80%的人最近出现支原体肺炎感染。13，(3)间接血凝检查，操作简单，灵敏度略高于补体结合检查，感染发病后7天内阳性，10-30天达到最高点，12-26周逐步减少。本检查与补体结合检查相似，主要测量lgM抗体，并与生殖器支原体进行交叉反应。14，(4)冷凝集测试是非特异性测试。患者血清和o型Rh阴性红细胞在4 进行凝集检查。33%-肺炎支原体感染者76%为阳性(效价 1: 64)。效价越高，或者双重血清提高了4倍以上，因此支原体近期感染的可能性较高。15，2，解脲原体也称为解脲原体，1954年，舍帕德首先从非淋菌性尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分离出来，其分解元素的特性为解脲原体从分类学上属于支原体。是人类泌尿生殖系统中最常见的寄生菌之一，近年来与多种疾病相关，引起了国内外相关学者的广泛关注。16，1。居住在泌尿生殖系统，性接触和母婴传播的传染途径。致病机制与侵袭性酶有关。吸附后磷脂酶解细胞膜的磷脂生成，脲酶分解尿素生成氨，影响宿主细胞生物合成。牙齿产生蛋白酶，牙齿损伤局部预防感染作用，对粘合性和致病性有好处。17，2。非淋菌性尿道炎(NGU)、引起上行链路感染的前列腺炎或附睾炎；阴道炎和宫颈炎会导致流产。因为具有人的精子膜和共同抗原，会对精子造成免疫损伤，导致不孕。18，微生物特性，1 .形态结构可以从液体培养基中通过球形、直径约50-300nm、单或双排列的微孔滤膜；G-但是颜色不容易，金萨染色是紫色蓝色。没有细胞壁的细胞膜由三层组成。内层和外层由蛋白质组成，中间层是脂质，含有核糖体和两条DNA。DNA的g 10 c含量为26.9 29.8 mol%。19，2。培养特性，营养要求高，需要提供胆固醇和酵母，常用的基础培养基是右心消化液。37 生长不好，22 生长不好，42 生长不好，最佳pH为5.5 6.5。据说是在95% N2和5% C02气体环境下培养2天，形成小群体，如“产卵”，可扩大200倍观察的t种。除胆固醇外，还需要尿素，尿素酶水解尿素，不分解葡萄糖和精氨酸。20，3。有抗原结构，脂肪多糖和脲酶，蛋白质抗原，16个血清型分为a，b组，其中4型疾病发生频率高。a组分别包含16kD和17kD多肽。b组仅包含17kD多肽。13血清型仅包含16kD多肽，通过确认16kD和17kD多肽的单克隆抗性，区分血清群特异性标记。21，4。抵抗力因为没有细胞壁，所以对渗透特别敏感，容易被脂质溶解剂、洗涤剂、酒精、特定抗体和补体溶解。对热的抵抗力下降。在4 生存约2周，在-70 生存2 3年。对青霉素等作用于细胞壁的抗生素不敏感，对影响细胞质蛋白合成的抗生素敏感。也就是说，对强力霉素、红霉素、霉素、螺旋霉素、氯霉素、麦迪霉素、链霉素、地拉霉素、庆大霉素等敏感。22，微生物检查，1 .从标本采集用灭菌瓶诊断为非淋菌性尿道炎患者中尿症、慢性前列腺炎按摩后前列腺液、原因不明的不孕患者的精液、阴道炎及宫颈炎患者的炎症分泌物、羊水和血液等。尿液标本以无菌方法接种10ml，离心沉淀物。23，2。有标本直接检查，(1)核酸检查16个血清型460bp DNA片段。通过PCR产品的核酸杂交及序列分析，可以对多种支原体识别进行分类。该法灵敏度高、稳定、快速、简便，将成为临床快速诊断的重要实验手段。DNA探针技术对测量50-100 pg的DNA很敏感。24，(2)ELISA不仅测定血清型别，还测定Ig的类型(IgM，IgG)。比较敏感，特别，有诊断意义。(3)免疫斑点试验(IDT)抗原提取物和培养物检测。该方法敏感、特殊，没有特殊仪器，容易宣传，可用作临床感染者病原体检查的特异性诊断方法。25，3。分离鉴定，将标本o.1 0.2ml培养在pH6.0中，包含接种酚红和尿素的液体培养37 ，由黄变红子培养。质子在尿素、0.05molHEPES缓冲液、具有MgS04的固体培养基中种植，菌落易于识别为黑褐色，在95% N2 5% C02或微厌氧环境中作为二次培养，用低倍率镜观察群体形态。26，可以通过形态和生化反应等进行初步确认。只分解尿素，不分解葡萄糖和精氨酸。用特定抗血清作为MIT和GIT进一步确认。27，3，支原体，可附着在宿主细胞损伤和死亡的淋巴细胞和单核球菌内，进行大量复制。能促进HIV的克隆和疾病发展是艾滋病的辅助致病因素。28，棒状，一端有尖头结构。高营养要求，群体像长得慢的卵，第一代10天以上，发酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素，液体培养基生长时没有明显的浑浊或沉淀。对红霉素、四环素、林可霉素敏感，但对青霉素不敏感。29，微生物检查，1 .标本收集以艾滋病患者或艾滋病感染者为对象。咽拭子。2.SP-4培养基分离培养，37温箱培养，每天观察颜色变化，如果从红色变成黄色，不透明沉淀，培养“可疑阳性，用滤膜过滤。据说，如果滤液栽培继续进行，培养基颜色再从红色变成黄色，就成为“第一代培养阳性”。30，3。确认，生化反应(1)培养菌接种于含有1%葡萄糖的SP-4培养基(发酵葡萄糖测试)。如果可以分解，培养基的颜色就会从红色变成黄色。(2)培养物在含有精胺寺庙(不含葡萄糖)的SP-4培养基(水解精氨酸试验)中水解时，pH值会增加。(3)培养物接种于仅含尿素的SP-4培养基(降解元素试验)，观察pH的变化。31，取代谢抑制试验(MIT)，104 cfu/ml阳性培养菌，2个3ml改良SP-4培养基中1个以适量Mpe标准血清为试管，另1个以抗血清为对照，37 培养。试管颜色保持不变(抑制生长)，对照组颜色从红色变为黄色(支原体生长)。被抗血清抑制的管道是MIT阳性，这种培养体是Mpe，根据抗血清的种类进行Mpe打字。32，PCR，Mpe集型PCR(nPCR)，目标基因为Mpe的16SrRNA基因特异性片段。Mpe-nPCR的最终放大长度为410bp，如果按照套件文档操作，则可以使用更灵敏、更特殊、更快的Mpe检测方法放大特定的MpeDNA。33，抗体检查，外国学者从HIV感染者用ELISA检查测定了多种Mpe抗体。其中无症状者的阳性率为20%，艾滋病者为40%，阴性为0.3%。34，第二个衣原体(衣原体)是原核细胞型微生物，能通过特殊的细胞内胚、独特的发育周期和细菌过滤器。属于广泛的细菌范畴。衣原体、衣原体、肺炎、衣原体、家畜衣原体和衣原体。35，1，沙眼感染还会引起生殖泌尿系统感染、性病淋巴肉芽肿和其他器官疾病。近年来，沙眼衣原体感染率和危害性超过了淋球菌，居居性病榜首，受到了医疗界的关注。沙眼衣原体有三种生物变种：沙眼生物变种、性病淋巴肉芽肿生物变种(LGV)和大鼠生物变种。36，1。沙眼亚种，(1)沙眼：通过眼睛-手-眼途径直接或间接密切接触传染。由a、b、Ba和c血清型引起。结膜引起局部炎症。卵泡增生。后来疤痕和角膜血管出现，影响了视力。37，(2)包涵体结膜炎：b，Ba，d，Da等血清型是原因。婴儿通过产道感染引起滤泡结膜炎，角膜血管没有出现。(3)泌尿生殖系统感染：D-K血清型。性接触传播引起的非淋菌性泌尿生殖系统感染(50%-60%)。很容易发展成持续感染或无症状携带者。38，2。性病淋巴肉芽肿，l血清型引起的性病淋巴肉芽肿。侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿。3.老鼠生物变种在老鼠之间传染，不侵害人，与老鼠肺炎有关。，39，微生物特性，1 .发育周期具有衣原体形式的染色和特殊的发育周期。原体是具有细胞外存在形态、卵原、细胞壁和亚核的成熟衣原体，具有很高的传染性，吸附在易感细胞特异性受体上，增加网状的形成。网状母体或启动子、原型、异分裂增殖为繁殖型，无传染性。感染24小时后浓缩形成原体，最终细胞破裂感染其他细胞，每个发育周期大约需要48-72h。40，抗原结构，复合，属，种，类型及其他特定抗原。(1)特定抗原：细胞壁LPS是用于血清诊断的特定补体结合抗原。(2)物种特异性抗原：位于主外膜蛋白(MOMP)，可通过补体结合检查和中和检查检测。(3)类型特异性抗原：也位于变形。使用单克隆抗体作为微型免疫荧光检测，可以识别18种类型的沙眼。41，培养特性，沙眼衣原体专业活体细胞寄生，6-8d鸡胚卵黄囊和各种继代肋骨培养。包涵体和原体及尸体颗粒一般在培养48-72h后细胞内发现。近年来，广泛用于培养衣原体的细胞系是HeLa-299和McCoy。42，阻力，衣原体感染物质失去能量约48小时，即566分钟。-70 可保存数年，冷冻干燥可保存30年以上的活性。O.1%甲醛或O.5%煤酸溶液24h杀死沙眼衣原体，2%只需要5min。红霉素、四环素、磷霉素或青霉素对衣原体有抑制作用。43，沙眼及包涵体结膜炎患者，结膜圆顶敷棉签或刮结膜。性病淋巴肉芽肿：淋巴结脓肿和优选直肠棉棒或活检材料检查。通过光显微镜观察包涵体，可以诊断出典型的包涵体，尤其是结膜、尿道、宫颈上皮细胞内，对衣原体感染有参考作用。44，免疫学方法，1)免疫荧光检查：用荧光抗体检测上皮细胞衣原体抗原。衣原体LPS抗体标记，所有衣原体反应；抗MOMP抗体类型，类型特异性。1小时内诊断和拆卸。(2)酶免疫检查：在几小时内检查衣原体可溶性抗原，适合大量样本同时检测。45，核酸检测，1)核酸杂交：使用标记为125I的衣原体rDNA探针检测宫颈标本的敏感度和特异性，与培养相比较，分别为82.8%和99.4%。2)PCR:具有高灵敏度和特异性。一般根据沙眼衣原体7.5kb质粒、MOMP序列和16SrRNA基因序列设计引物。46，分离培养，标本棉棒，含抗生素稀释剂10%-20%悬浮液。分离的细胞有McCoy、HeLa-229细胞等。放入5% CO2并培养。第一代分离培养72-96h系或盲。90%的症状患者标本第一代可以看到包涵体，但无症状患者在阳性前转移。灵敏度为80%-90%，特异性为100%，是目前最确定的诊断方法，是评价研究室诊断方法的标准。47，鸡胚胎文化，细菌污染临床标本加上适当的抗生素(如链霉素、庆大霉素、泽霉素等)肉汤，在常温下起L