如何计算显微镜下视野面积

doi: 10. 3969 ? j. issn. 1007 ?8096. 2009. 01. 036 ? 读者 ? 作者 ? 编者 ? ? ? 编者按:在我们日常病理诊断工作中, 某些肿瘤的诊断及组织学分级( 如乳腺叶状肿瘤、 乳腺浸 润性癌、 子宫平滑肌瘤等) 常需要确定 10个高倍视野下的核分裂数, 但由于人们使用的显微镜及目 镜视场数不同, 所以得出的 10 个高倍视野下的核分裂数也就不同, 影响到病理诊断的规范化。 WH0( 2003) 乳腺组织学分类推荐的浸润性乳腺癌分级系统明确指出, 核分裂计数取决于视野面积。 我们建议规范高倍视野下的核分裂计数, 在显示核分裂计数时应注明视野面积。故特请张淼丽高 级工程师介绍如何计算显微镜下的视野面积。 如何计算显微镜下视野面积 张淼丽?( 奥林巴斯( 北京) 销售服务公司 技术指导部) ? ? 在显微镜下进行病理读片, 是病理医师工作中的重要内 容之一。显微镜观察和记录的结果是临床诊断的科学依据。 正确标准的使用显微镜, 观察和记录读片结果才具有科学 性。众所周知, 显微镜的成像首先是由物镜对标本放大成 像, 然后由目镜一次放大被人们肉眼观察到。所能呈现图像 的视野大小是由目镜的视场数决定的。需要说明的是, 本篇 所阐述的观察和记录, 仅限于通过目镜的显微镜观察和记 录。不经目镜观察的其他光路采集记录图像, 如 CCD、 数码 相机、 由软件操作采集图像等另述。 显微镜目镜的视场数(field number, FN) 不同, 镜下能看 到的视野大小就不同, 不同的面积区域对镜下阳性率计数有 影响, 我们应该了解目镜视数与视场面积的关系。视场数小 能看到的视场面积就小, 反之, 视场数大则能看见的视场面 积就大。 1? 目镜视场数的标识 显微镜设计和生产具有国际化标准, 在显微镜的目镜上 都会标识视场数, 如奥林巴斯 BX50 型显微镜, 目镜视场数 22(22 数值前的英文和数字标识是目镜分类名和倍率) 。 2? 实际视场和计算公式 在标本平面上, 显微镜能够观察到的区域( 圆形区域) 叫 做实际视场, 也称视野。用以下公式计算可得知面积大小。 实际视场= 视场数 视场数物镜的倍率( 中间倍率) 一般显微镜产品, 都有其标准配置。如奥林巴斯显微镜 BX51, 标准配置视场数 22 的目镜, 如果使用 40 物镜观察, 其视场面积计算如下: 实际视场( 直径 d) = 22( 视野数) /40X( 物镜倍率) = 0?55mm 实际视场(面积 s): ?r2= ?1 ?4d2 = 3?14 1/ 4(0?55) 2= 0?2375(mm2) ! 0 ?24 那么, 我们可以确定当前观察用显微镜的视场面积是 0?24mm2。 需要说明, 虽然各显微镜生产厂家不同型号的显微镜有 其标准配置, 但是, 我们只需要识别显微镜目镜上的标识就 可以知道显微镜的视场面积。 3? 物镜倍率 物镜是用于显微镜成像的重要光学部件。生物显微镜 常用物镜倍率有 4 、 10 、 20 、 40 和100 。病理学计数 常用的高倍物镜是指 40 。 4? 中间倍率 直接通过目镜观察无需考虑中间倍率。 中间倍率是指加在光路中的 CCD 接口、 摄影目镜以及 CCD 元件等的倍率。因为现在使用的显微镜大都是无限远 成像系统, 附加有荧光观察、 本差观察、 微分干涉观察等, 元 件不会改变倍率, 不需要考虑。 5? 常用目镜下的视场面积 最常用目镜视场数是 22。各显微镜制造商相继设计生 产有视场数是 25 的宽视场目镜, 视场数是 26?5 的超宽视场 目镜。也有视场数是 18、 20 的较小视场数的目镜。笔者将 常用目镜分别在高倍(40 )物镜下观察时, 计算其面积如表 1所示, 方便显微镜使用者参考。 表 1? 常用视场数目镜在 40 物镜下视场面积 目镜视场数 ( FN) 1820222526?5 40 物镜