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文档简介

.,1,实验一血清免疫球蛋白IgG的提取,.,2,目的,掌握血清免疫球蛋白IgG提取原理；熟悉血清免疫球蛋白IgG提取操作过程和方法,.,3,原理,IgG是血清中主要的免疫球蛋白，占全部抗体含量的7075，在临床免疫学检验技术中常用到的第二抗体就是通过用纯化人IgG作抗原免疫动物而来分离纯化IgG的技术有多种，通常采用综合技术，其中盐析沉淀法常用于IgG的粗制品的提取,.,4,原理,蛋白质颗粒在水溶液中亲水胶体蛋白质颗粒在盐溶液中既不含水膜又不带电荷的不稳定颗粒,.,5,蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，血清免疫球蛋白主要为球蛋白，它在一定浓度中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。,原理,.,6,材料,样本正常人血清试剂生理盐水、饱和硫酸铵溶液、透析缓冲液主要器材离心机冰箱透析袋紫外分光光度计等,.,7,操作步骤,1.25ML血清1.25ML生理盐水滴加饱和硫酸铵溶液2.5ML,弃去上清液（含清蛋白）,沉淀溶于生理盐水,使体积达1.25ML滴加饱和硫酸铵溶液0.625ML,弃去上清液（、球蛋白）,沉淀（球蛋白及少量球蛋白）,上清液（球蛋白）,沉淀为球蛋白,室温静置30min,离心4000rpm,10min,重复一遍,紫外分光光的计测定蛋白含量,沉淀放入透析袋，充分透析，去除NH4+,室温静置30min,离心4000rpm,10min,.,8,注意事项,蛋白质的浓度、盐的浓度、PH值、温度对盐析的效果有影响饱和硫酸铵溶液的滴加方式盐析后放置时间、离心操作的速度、时间透析袋的使用,.,9,方法评价,硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质变性，操作简单，为盐析中常用的中性盐硫酸铵中含有氮，会干扰蛋白质的测定，且溶液的缓冲能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要获得纯化的免疫球蛋白，必须经过凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析进一步提纯,.,10,结果判断,效价可用免疫双扩散试验判断特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察,.,11,
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