PCR引物流程设计详解_第1页
PCR引物流程设计详解_第2页
PCR引物流程设计详解_第3页
PCR引物流程设计详解_第4页
PCR引物流程设计详解_第5页
已阅读5页，还剩12页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

PCR引物设计流程详解本文目的：复制出IL-4基因片段一、 查找基因序列1、 进入NCBI主页，下拉选框选择Nucleotide，在搜索栏输入要查找的目的基因，即IL-4，点击搜索2 、在搜索结果选择灵长类（Homo sapiens）2、 在灵长类IL-4基因中选择需要的mRNA序列3、 查看基因的相关信息外显子区域CDs区域4、 点击FASTA格式，并将序列保存到文档二、 使用primer premier 5.0设计引物1、 建立新文件，将所得的序列复制进输入框内2、 点击搜索按钮，搜索引物3、 设置引物设计参数（因为在之前查找基因序列的时候获知，外显子区域分别为：1-200、201-248、249-425、426-618，又知在引物设计时引物位置最好跨越一个内含子，PCR产物长度通常为100-150bp，故设定上游引物位置为201-248，下游引物位置为249-425，产物长度为100-150bp）4、确认条件后，显示搜索结果4、 双击选中得分最高的引物查看引物情况（上图为上游引物情况，下图为下游引物情况）5、 将设计的上下游引物复制出来，保存到文档中三、 使用oligo 6.0对设计的引物进行评价1、 建立新文件，将从cnki上获得的cDNA复制进输入框，并点击accept接收2、 接收后显示出该序列的相关信息3、 点击edit按钮录入用primer设计的上游引物，每一次输入新数据后都需要点击accept按钮接收4、 同理，录入下游引物5、 分析上下游引物二聚体形成情况6、 分析上下游引物发卡形成情况7、 分析上下游引物GC%8、 检测上下游引物与PCR模板其它位置错配情况9、 分析PCR整体情况四、 引物特异性检验（primer blast）1、 进入NCBI主页，并选择blast2、 选择primer blast3、 在输入框内输入模板序列和上下游引物，并设定对比数据库，点击get primer进行对比4、 查看blast结果Blast 结果显示，尽管IL
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 事务文书

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论