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欢迎各位专家莅临指导,单肺通气诱发肺损伤时兔肺组织线粒体转录因子A表达的变化及乌司他丁的干预效应,研究生：XXXXXX导师：教授二级学院：XXXX人民医院,研究目的,研究背景,目录Contents,我将从以下几个方面向大家介绍我的研究论文。首先是研究背景单击,研究背景ResearchBackground,单肺通气(one-lungventilation，OLV)的应用已有50多年的历史，是指患者经支气管导管仅利用单侧肺(非术侧肺)进行通气的方法。主要目的是提供良好的手术视野，避免患侧肺对健侧肺的污染，减少呼吸运动对手术操作的干扰，随着外科技术的发展，OLV已广泛应用于心胸外科及脊柱手术的麻醉。,GothardJ.Lunginjuryafterthoracicsurgeryandone-lungventilation.CurrOpinAnaesthesioli,2006,19(1):5-10,5060708090100,开胸手术中,1h,2h,3h,长时间单肺通气,萎陷侧肺快速复张,吸入高浓度氧,急性肺损伤,FiO2：%,手术操作,研究背景ResearchBackground,细胞内氧自由基增多可介导IL-1、TNF-等前炎性因子增多，使中性粒细胞募集诱发炎症反应。,中性粒细胞可释放髓过氧化物酶（MPO），MPO主要功能是利用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐（HOCl），并形成具有氧化能力的自由基,单肺通气诱发肺损伤的机制,研究背景ResearchBackground,线粒体是参与细胞能量代谢的重要细胞器，线粒体功能障碍可导致组织缺氧。,细胞内氧自由基增多，首先攻击线粒体基因。,RuchkoM,GorodnyaO,LeDouxSP,etal.MitochondrialDNAdamagetriggersmitochondrialdysfunctionandapoptosisinoxidant-challengedlungendothelialcells.AmJPhysiolLungCellMolPhysiol,2005,288(3):L530-535,线粒体是参与细胞能量代谢的重要细胞器，线粒体功能障碍可导致组织缺氧。细胞内氧自由基增多发生氧化应激反应，主要损伤线粒体基因。,线粒体,研究背景ResearchBackground,线粒体呼吸链功能蛋白,线粒体转录因子A,线粒体转录因子A（mtTFA）是mtDNA转录翻译线粒体结构蛋白和功能蛋白的重要启动子。其高表达可使mtDNA数量增加，对维持mtDNA稳定具有重要意义。,mtDNA是转录翻译线粒体呼吸链功能蛋白的细胞核外重要遗传物质,翻译,FukuohA,KangD.MethodsforassessingbindingofmitochondrialtranscriptionfactorA(TFAM)toDNA.MethodsMolBiol,2009,1760(2):87-101,线粒体DNA是转录翻译线粒体呼吸链功能蛋白的细胞核外重要遗传物质，单击线粒体转录因子A是这一复杂过程的重要启动子之一，其高表达可使mtDNA数量增加，对维持线粒体DNA稳定有重要意义,研究背景ResearchBackground,乌司他丁含有143个氨基酸的糖蛋白，主要通过肾脏代谢,给药后12h可通过尿和粪便排泄。,乌司他丁是分离纯化成年男性尿液得到的蛋白水解酶抑制剂。,InoueK,TakanoH,YanagisawaR,etal.Antioxidativeroleofurinarytrypsininhibitorinacutelunginjuryinducedbylipopolysaccharide.IntJMolMed,2005,16(6):1029-1033,乌司他丁是临床上常用的蛋白水解酶抑制剂，对其结构功能研究较为深入，临床研究发现，乌司他丁具有减轻内毒素、油酸、手术操作、机械通气等引起的肺损伤。,研究背景ResearchBackground,？,研究背景ResearchBackground,研究目的,研究背景,研究目的ResearchObjective,本研究通过建立兔单肺通气致肺损伤模型，拟探讨单肺通气诱发肺损伤时肺组织线粒体转录因子A表达的变化及乌司他丁的干预效应，为临床防治单肺通气诱发急性肺损伤提供理论依据。,研究目的,研究背景,U组,O组,D组,动物选择及分组,根据文献，单肺通气模型动物种类：,本实验选用国内外研究单肺通气最常用的动物：新西兰大白兔,根据文献，单肺通气动物模型有以下几种，本实验选用国内外研究单肺通气最常用的动物：新西兰大白兔。单击选择健康雄性大白兔24只，单击采用随机数字表法，随机分为3组：双肺通气组、单肺通气组、乌司他丁干预组。单击,D组双肺通气3h，O组和U组左肺通气2h后再双肺通气1h。通气参数双肺通气时VT为24ml、单肺通气VT为12ml、FiO2100%，通气频率40次/min，I:E为1:2。,通气结束后开胸，取双侧肺尖部组织。,模型建立与标本采集,D组及O组在通气即刻静脉注射等量生理盐水。,U组通气即刻静脉注射乌司他丁50kU/kg,这是我们按照文献方法自制的双枪气管插管单击D组、O组通气即刻静注生理盐水，U组静注乌司他丁50KU/kg单击D组双肺通气3h，O组和U组左肺通气2h后再双肺通气1h。通气参数设为双肺通气时潮气量为24ml、单肺通气为12ml、吸入氧浓度100%，通气频率40次每分，吸呼比为1:2单击,液氮,检测方法,取肺尖部组织装入冻存管，液氮冻存24h后转80冰箱保存,于通气开始即刻（T0）、通气1h（T1）、通气2h（T2）、通气结束即刻（T3）采集动脉血,取肺尖部组织置入44%多聚甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋、切片,这是我们的观察指标及检测方法。,化学比色法检测肺组织SOD活性和MDA含量,Westernblot法检测兔肺组织mtTFA表达,免疫组化法检测兔肺组织mtTFA表达,血气分析动脉血氧分压，计算氧合指数,HE染色观察肺组织病理学损伤评分,观察指标及,研究目的,研究背景,各组兔肺组织病理学改变以及肺损伤评分,各组兔一般情况比较,各时间点氧合指数比较,各组兔肺组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量,各组兔肺组织中mtTFA的含量,结果分五部分，首先是各组兔一般情况比较单击,各组兔一般情况比较,D组、O组及U组兔体重分别为（2.20.6）kg、（2.40.8）kg及（2.40.5）kg，各组兔体重差异无统计学意义（P0.05）。,D组、O组及U组兔通气过程心率为（21110）次/min、（2098）次/min及（2088）次/min，平均动脉压为（444）mmHg、（406）mmHg及（394）mmHg，各组兔心率、平均动脉压差异无统计学意义（P0.05）。,各组兔体重及通气过程心率平均动脉压差异无统计学意义。,ComparewithD,各时间点氧合指数比较,ComparewithT0,ComparewithT0,各组兔肺组织SOD活性和MDA含量的比较,ComparewithD,ComparewithD,Comparewithleftlung,Comparewithleftlung,ComparewithO,ComparewithO,O组右侧,U组右侧,各组肺组织病理学结果,D组右侧,O组左侧,D组左侧,U组左侧,D组双侧肺组织肺泡结构基本完整，肺泡腔内无明显渗出、出血、间质增厚、炎性细胞浸润；O组左侧肺组织肺泡结构破坏，肺泡腔内少量渗出物，少量出血，间质轻度增厚，炎性细胞浸润较少。O组右侧肺组织大部分肺泡结构消失，肺泡腔内有渗出较多，出血多，间质明显增厚，炎性细胞较多；U组左右侧肺组织比O组左右侧肺组织损伤程度轻。将上述图片进行根据病理损伤评分，得出数据显示：长时间单肺通气肺组织mtTFA表达下调。2、乌司他丁具有减轻单肺通气损伤，与上调肺组织mtTFA表达有关,1、长时间单肺通气肺组织病理学损伤评分升高。2、与单肺通气组比较，乌司他丁组肺组织病理学损伤评分下降。,comparewithlunginjuryscoresingroups,结果表明：与D组相比，O组肺组织mtTFA表达降低；与O组肺组织相比较，U组肺组织mtTFA表达升高,O组右侧,U组右侧,D组右侧,O组左侧,D组左侧,U组左侧,免疫组化法测定各组肺组织mtTFA表达,DLDROLORULUR,Westernblot法检测各组肺组织mtTFA表达,mtTFA表达,GAPDH,结果表明：与D组相比，O组肺组织mtTFA表达降低；与O组左侧肺组织相比，O组右侧肺组织mtTFA表达降低；与O组肺组织相比较，U组肺组织mtTFA表达升高。与免疫组化法测定mtTFA结果一致。,D组O组U组,左肺右肺,TheexpressionleveloflungtissuemtTFAwasmeasuredbywesternblotindifferentgroups.,研究目的,研究背景,研究表明，氧合指数300mmHg(1mmHg=0.133kPa)时即可认为发生肺损伤。O组、U组通气结束时氧合指数300mmHg，提示氧饱和下降，出现轻微的低氧血症。光镜下单肺通气后肺组织大部分肺泡结构消失，肺泡腔内有渗出，出血多，间质增厚，炎性细胞大量聚集。综合肺组织病理学结果及血气分析结果，O组、U组通气结束时氧合指数300mmHg，氧饱和下降，出现轻微的低氧血症，提示兔单肺通气诱发肺损伤模型制备成功。,乌司他丁减轻肺损伤机制,肺损伤时肺组织脂质过氧化反应及与mtTFA关系,单肺通气致肺损伤的机制,单肺通气诱发肺损伤模型的制备,讨论Discussion,动脉血氧合指数比较：O组、U组通气结束时氧合指数300mmHg，提示氧饱和下降，出现轻微的低氧血症。肺组织病理学损伤评分：光镜下单肺通气后肺组织大部分肺泡结构消失，肺泡腔内渗出，出血多，间质增厚明显，炎性细胞聚集。,研究表明，氧合指数300mmHg(1mmHg=0.133kPa)时即可认为发生肺损伤。本研究结果表明：O组、U组通气结束时氧合指数3分为重度损伤本研究结果表明，光镜下单肺通气后肺组织大部分肺泡结构消失，肺泡腔内渗出，出血多，间质增厚明显，炎性细胞聚集。,单肺通气诱发肺损伤模型的建立,讨论Discussion,研究表明，氧合指数3分为重度损伤光镜下单肺通气后肺组织大部分肺泡结构消失，肺泡腔内有渗出，出血多，间质增厚，炎性细胞大量聚集。综合肺组织病理学结果及血气分析结果，O组、U组通气结束时氧合指数300mmHg，氧饱和下降，出现轻微的低氧血症，提示兔单肺通气诱发肺损伤模型制备成功。,单肺通气诱发肺损伤模型制备成功,单肺通气诱发肺损伤机制,单肺通气诱发非通气侧肺损伤比通气侧严重,单肺通气转为双肺通气时，产生的界面切力和肺水滞留，是引起非通气侧肺组织受到牵张而损伤严重的重要原因。,肺快速复张时，可造成膨胀和不张肺组织的交界处产生:界面切力,肺水滞留,讨论Discussion,单肺通气诱发肺损伤机制,本研究结果表明，与D组比较，O组肺组织SOD活性下降，MDA含量增加，提示单肺通气致肺损伤时兔肺组织发生氧化应激反应。,其机制可能为：炎性起始的中性粒细胞募集，释放MPO,MPO,介导,释放,TNF-,IL-1,中性粒细胞募集,髓过氧化物酶,讨论Discussion,MPO,MPO,MPO,MPO,MPO,MPO,细胞超微结构模拟示意图,线粒体转录因子A（mtTFA）,线粒体环状DNA（mtDNA）,O2-,线粒体超微结构模拟示意图,组蛋白,研究表明,乌司他丁,乌司他丁是分离纯化成年男性尿液得到的蛋白水解酶抑制剂。,覃建明.乌司他丁的药理作用及临床应用进展J.中国医药导报,2008,(11):19-20,谭朝华,徐军美,杨昭云,杨东林,吕志平.乌司他丁对急性肺损伤兔炎性细胞因子及氧自由基的影响.中国医师杂志,2004,(10):1360-1362.,讨论Discussion,乌司他丁对线粒体的保护作用,本研究结果显示，与O组比较，U组肺组织肺损伤评分降低，SOD活性升高，MDA含量降低，mtTFA表达升高，提示乌司他丁具有肺保护作用，其机制与mtTFA有关。,讨论Discussion,研究目的,研究背景,结论Conclusion,1、单肺通气2h恢复双肺通气1h可导致肺组织病理性损伤，非通气侧比通气侧肺组织损伤严重。,2、长时间单肺通气肺组织发生氧化应激反应造成肺损伤，其机制与mtTFA表达下调有关。,3、乌司他丁具有减轻单肺通气诱发肺损伤作用，其机制与mtTFA表达上调有关。,谢谢！,致谢在本课题完成之际，谨向曾经帮助过我的各位老师、同学、亲人、朋友表示衷心的感谢！本课题的研究与论文的书写是在我的导师的悉心指导和严格要求下完成的。她严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，不断激励着我，她乐观向上的生活态度，平和善良的为人之道，深深感动着我。感谢导师这三年来在生活上及学业上对我的帮助，不仅授我以文，而且教我做人，给我以终生受益无穷之道。感谢河北医科大学研究生学院的全体老师，