课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2).ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌分离和计数,1、理解筛选分解尿素细菌的原理,2、知道统计土壤样品中细菌数的方法,学习目标,枞阳三中毛松柏,课题背景,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。,土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶,自主学习（8min）(课本P21-26页)1.实验室中微生物筛选的原理是什么？（2分）2.P22页左边的培养基配方中碳源和氮源分别是什么？这种培养基对微生物是否具有选择作用？（3分）3.什么是选择培养基？有何实际用处？（3分）4.如何确定分离的菌种能够分解尿素？（2分）5.用稀释涂布平板法统计的菌落数为什么比实际活菌数目低？（2分）,小组讨论（5min）,实例Taq细菌的发现,启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。,原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,一、筛选菌株,结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。,2、实验室中微生物的筛选原理：,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。,选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO47H2O,2.1g,NaH2PO4,1.4g,KH2PO4,3、本课题使用的培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？,固体培养基,碳源：氮源：,选择培养基,葡萄糖、尿素,尿素,六、课外延伸：尿素分解菌的检验,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,1、显微镜直接计数：,利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,二、统计菌落数目：,不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；个体小的细菌在显微镜下难以观察；,缺点：,2.间接计数法（活菌计数法）（1）常用方法：,当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。,（2）原理：,稀释涂布平板法。,每克样品中的菌落数(CV)M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。,情境分析1,两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：1.A同学涂布了一个平板，统计的菌落数为230；2.B同学涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为两位同学的实验需要改进吗？如果需要如何改进？,注意事项为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,土壤中分解尿素的细菌分离和计数,课时2实验设计1、设计原则：重复原则、对照原则2、实验操作流程,情境分析2,阅读课本22-23页材料，分析A同学的结果与其他同学不同，可能的原因有哪些？帮助A同学排除上述可能影响实验结果的因素。,一是由于土样不同；,二是由于培养基污染或操作失误。,A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。,小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,结果预测：如果结果长出菌落，说明培养基受到污染。,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,三、设置对照：,分离土壤中分解尿素的细菌实验需设置两组对照：1、检验培养基灭菌是否合格：需将未接种的培养基在相同的条件下培养。2、判断选择培养基是否具有筛选作用：需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上的菌落数。,四、实验的具体操作（一）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。（二）制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,（三）样品的稀释,（四）取样涂布,实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,（五）微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：3037培养12d放线菌：2528培养57d霉菌：2528的温度下培养34d。,微生物的培养与观察,五、结果分析与评价1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。2.提示：选择每个平板上长有30300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。,本课题知识小结:,1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌C.接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质2.使用选择培养基的目的是（）A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素,当堂训练,A,C,D,4.下列说法不正确的是（）A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的