细胞培养实验报告

动物细胞培养首先，测试的目的。1、掌握无菌操作技术。2.掌握原代和传代细胞培养。3.主细胞冷冻复苏技术。4.了解培养成纤维细胞的形态。第二，测试原则。将动物体组织从体内取出，用各种酶(常用的胰蛋白酶)、螯合剂(常用的乙二胺四乙酸)或机械方法处理，分散成单细胞，并在适当的培养基中培养，使细胞存活、生长和繁殖。这个过程被称为初级文化。培养瓶生长成致密单层后，细胞基本饱和。为了使细胞能够同时继续生长和扩大细胞数量，必须进行传代(再培养)。继代培养也是保存细胞种类的一种方法。同时，利用培养细胞进行各种实验也是一个必要的过程。悬浮细胞可以直接分成瓶，而贴壁细胞只有在消化后才能分成瓶。稳定细胞系或具有迁移特性的细胞系的长期保存一方面可以用作细胞研究的实验材料，另一方面可以用作细胞产品的生产材料。目前，广泛使用的细胞保存方法是冷冻保存。细胞冷冻保存的原理是缓慢冷冻和快速融化，这是为了防止细胞因冷冻过程中产生的冰晶而破裂。三、实验设备和药物。设备：孕鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液管、眼用剪刀、镊子、酒精灯、离心机、水浴罐、倒置显微镜、CO2培养箱、洁净工作台、离心管、高压灭菌罐、试管架等。药物：小牛血清、DMEM合成培养基、抗生素、二甲基亚砜冷冻剂、胰酶、PBS缓冲液等。四、实验操作。1、消毒灭菌。实验所需的工具(如枪头、培养皿、眼用剪刀、镊子和每个人的实验服等。)以集中方式消毒和干燥。为实验准备75%的酒精。2.培养基的制备。分别取10毫升小牛血清和90毫升DMEM合成培养基，将两种培养基混合在一起，然后加入1毫升抗生素，吹匀，得到细胞培养基。3.初级文化。(1)准备。将实验中使用的所有工具和药物放在超净的工作台上进行紫外线消毒灭菌。实验开始前，带上乳胶手套，用酒精给对手消毒。怀孕的老鼠在酒精中被杀死，子宫内的胚胎组织被切除。(2)剪切和消化。胚胎组织被放在一个平板上，用眼线钳将组织切片，切片越多越好。将切割的组织块置于离心管中，用约200升胰酶消化。它也可以放在37度的恒温器中消化。(3)细胞分离。消化一段时间后，如果离心管中的溶液出现明显浑浊，可以用吸管吸出少量消化液，在镜子下观察。如果组织已经分散成细胞群或单个细胞，应加入与胰酶相同量的培养液以终止消化。离心管在离心机中离心，弃去上清液以获得分散的细胞。(4)细胞转移和培养。将制备好的培养液加入到含有分散细胞的离心管中，吹制混合均匀，用移液管将培养液转移到细胞培养瓶中。置于36.5恒温的CO2箱中培养，轻轻松开瓶口。4.亚文化。(1)倒置显微镜下观察细胞形态。在倒置显微镜下观察培养细胞的生长和密度，根据细胞密度确定传代的稀释倍数。(2)收集原代培养细胞。从培养瓶中吸出旧的培养液，并用PBS冲洗两次。然后向烧瓶中加入200升胰酶进行消化。消化一段时间后，用等量的制备培养液终止消化。然后离心收集原代培养细胞。(3)传代细胞的培养。向离心管中加入约7-8毫升培养液，吹并混合均匀。将培养液转移至培养瓶中，并将其置于37度恒温CO2培养箱中进行培养。培养1-2天后，在显微镜下观察细胞形态。5.细胞冷冻保存。(1)收集细胞。从培养瓶中吸出旧的培养液，并用PBS冲洗两次。然后向烧瓶中加入200升胰酶进行消化。消化一段时间后，用等量的制备培养液终止消化。然后离心收集细胞。(2)冷冻。向离心管中加入一定量的培养液和10%-20%的二甲基亚砜冷冻液，吹炼，混合，转移到冷冻管中。首先将冷冻管放在4度冰箱中10分钟，然后放在-70度冰箱中冷冻过夜。(3)恢复。取出冷冻细胞后，立即放入40度的水浴中快速融化。进一步观察熔化的细胞。V.实验结果。通道细胞传代后细胞第一次发生变化。原代细胞第一次原代培养第4天的细胞冷冻保存的复苏细胞六、实验分析和讨论。从这个实验的图片可以看出，实验已经成功完成，细胞基本没有被污染。无菌操作在操作过程中必须得到高度重视，这是决定试验成功的关键因素。在原代培养过程中，必须将小鼠胚