薄层色谱法基础PPT课件VIP

薄层色谱(TLC)，目录，前言，两个基本参数，薄层色谱的三个操作，薄层色谱的四个特殊例子和五个应用，3.薄层色谱通常指以吸附剂为固定相的液相色谱。也就是说，固定相在玻璃、金属或塑料的光滑表面上均匀地铺展成一薄层。样本点在薄层的一端。流动相通过毛细管作用流过固定相，以扩散分离的物质。简介，定义：普通薄层色谱使用吸附剂作为固定相，属于吸附色谱的范畴。在柱色谱和纸色谱之后发展起来的方法。4、薄层色谱与液相色谱的比较，特征，5，薄层色谱与柱色谱和纸色谱的比较，(1)快速(几十秒到几十分钟)，(2)高分离效率(多柱)，(3)高灵敏度(小斑点扩散)，它比纸色谱高10-100倍，(4)有各种显色方法(腐蚀性显色剂)，(5)图像易于存储，6，特定位移值(Rf)Rf=从原点到元件点中心的距离/从原点到流动前沿的距离Rf=a/c Rf=b/c，相对Rf值，即相对于某一物质X的Rf值，用Rx表示。定义为：Rx=组分的rf值/物质的Rf值X“相对Rf值”组分A相对于物质B的Rb=A/B，二。基本参数。7，III。薄层色谱的操作、吸附剂的选择、薄层板的制备、显色剂的选择、显色和定位、显色薄层色谱的定量测定。8。(1)用于薄层色谱的吸附剂，常用的薄层色谱吸附剂包括硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。吸附剂的选择：首先，它取决于样品成分的性质，即它们的溶解度、酸碱度、极性以及它们是否与吸附剂反应；其次，有必要考虑吸附剂和载体的可用性和价格。9，10，通过均匀涂覆纸浆状吸附剂(纸浆、纤维素、硅胶、中性氧化物、聚酰胺、多孔玻璃粉、硅烷化键合硅胶等)制备层析板。)在薄层板上(玻璃板、金属板或弹性塑料板)用特殊的涂布机涂布并干燥(在110下活化)。(2)薄层板的制备，(11)，(3)展开剂的选择在薄层色谱中，流动相展开剂主要根据不同的极性进行选择。各种显影剂按其极性分类：烷烃烯烃醚硝基化合物二甲胺酯酮醛硫醇胺酰胺醇酚羧酸。12，选择薄层条件的图，图2中化合物的极性、吸附剂的活性和显影剂的极性之间的关系，Stahl设计的用于选择薄层条件的图(1)是分离的化合物的极性(2)是吸附剂的活性(3)是显影剂的极性。如果这三个因子分别固定在圆周的三分之一，旋转圆盘中心的三角形。如果角度A指向极性物质，角度B指向低活性吸附剂，角度C指向极性显影剂。如果你去甲，乙，丙，你必须做出另一个选择。极性较大的溶剂可以移动薄层上的化合物。极性较小的溶剂会降低极性较大的溶剂的洗脱能力，从而降低Rf值。中等极性溶剂通常在混合极性差异较大的溶剂时发挥作用。向显影剂中加入少量的酸和碱可以浓缩一些极性物质斑点，提高分离度。当使用粘度过高的溶剂时，需要加入溶剂以降低显影剂的粘度并加快显影速度。例如，在环己烷-丙酮-二乙胺-水(10:5:2:5)体系中，水是大极性溶剂，环己烷是小极性溶剂。后者的加入会降低分离物质的Rf值。丙酮在混合整个系统和降低显影剂的粘度中起作用。加入少量二乙胺控制显影剂的酸碱度，使分离的斑点不拖尾，分离清晰。多组分显影剂中各种溶剂的作用。14岁，(3)微环技术。15:将样品溶液点在准备好的薄层上，形成相同大小的点，吸取各种经过初步选择并认为可以用毛细管涂敷的显影剂，将它们加到样品点的中心，让显影剂慢慢流出毛细管进行显影。微环技术1用环己烷显影2用苯显影3用氯仿显影3用微环技术，(4)点样。1.样品溶液通常由挥发性有机溶剂制成，如甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等。最好用与显影剂极性相似的溶剂溶解样品，制备0.5%1%的测试溶液。2.样品的数量与薄层的性能、显影剂的厚度和灵敏度有关。一般来说，样品量至少为几纳克，一般为几克至几十克，制备分离可取样至毫克。简而言之，取样量取决于分离的目的。3.最好的取样方法是直径为3-5毫米的点。常用的取样方法有：a普通取样法、b径向取样法、c条取样法、d线性针孔取样法、e凹槽取样法、径向展开法与普通展开法的区别、4。取样容器，定容毛细管微量进样器取样装置，(5)扩散，1。水蒸气的影响，2。溶剂蒸汽的影响，3。扩展槽，4。传播方法，5。几种新的传播技术。展开操作，21，1。水蒸气的影响：在吸附薄层色谱的开发过程中，必须严格控制开发罐内空气和水蒸气的相对湿度，微量的水也会对色谱分离结果产生较大的影响。硅胶薄层板吸收水蒸气非常快。厚度为0.25毫米、2020厘米的薄层板在50%的相对湿度下大约3分钟内失去一半的活性，而吸收的水在15分钟内达到最大值。因此，样品施加的速度和空气相对湿度的大小会影响分离和再现性。适当的相对湿度范围也取决于溶质和溶剂的极性。溶剂蒸气的作用，“边缘效应”:Stahl发现，对于相同的生物碱，当以氯仿-甲醇(95: 5)为展开剂开发麦角生物碱时，薄层板中间的Rf值小于边缘的Rf值，这称为“边缘效应”。膨胀箱可以通过用显影剂蒸汽饱和然后膨胀来消除。图5非饱和膨胀罐中薄层板上的“边缘效应”。3.膨胀罐，普通膨胀罐的双底膨胀罐的卧式膨胀罐。24，4。膨胀方式，(1)近水平膨胀：将取样后的薄层板的下端浸入0.5厘米的显影剂中，并抬高薄层的上端，使薄层与水平面成5-10角。(2)向上展开：将取样的薄层放入装有显影剂的直立展开罐中，显影剂通过毛细作用从薄层的下端上升到前缘。(3)向下展开(4)双向展开，25，26，几种新的部署技术，(1)程序蒸汽编程，VP，(2)辐射色谱，(3)热板色谱，(4)多重开发，(5)程序多重开发，PMD，(6)逐步开发，(7)逐步开发，(27，6)部署操作。1.密封展开罐的目的是用显影剂蒸汽使展开罐饱和，并保持显影剂的组成不变。2.膨胀罐的饱和为了避免“边缘效应”，有时需要用显影剂蒸汽使薄层板饱和。3.与常规薄层的最大铺展距离为20厘米；有效薄层的最大跨度为10厘米。4.扩展温度。28，涂抹距离对结果的影响，甘菊油的硅胶HPTLC分离，a)3厘米，b)5厘米，c)7厘米，d)9厘米。(6)薄层色谱定性检测。薄层层析显影后，将薄层从层析筒中取出，用铅笔或小针在显影剂的前缘位置做标记，然后进行显色，确定每个斑点的位置、Rf值和显色，从而判断样品中含有哪些成分。有色物质展开后呈现明显的色点，易于判断。无色物质可以通过物理检测、化学检测、酶和生物检测以及放射性来开发2.碘元素碘的最大特点是与物质的反应通常是可逆的。当化合物放置在空气中后，碘将升华并挥发，这可以返回到部件的原始状态，并有利于薄层的进一步处理。3.水可用作硅胶薄层的无损显色剂。当许多疏水化合物形成时，薄层板上喷水，在光的观察下，半透明薄层板上出现白色不透明斑点。化学检测是指在薄层上使用一种或多种化学试剂与被检测物质发生反应，生成用于定位的有色化合物。这种试剂叫做显影剂。着色剂一般分为两类，即一般着色剂和特殊着色剂。(1)浓硫酸或50%硫酸溶液：大多数有机物质，喷洒该显影剂后或加热至110-120后几分钟后立即出现褐色至黑色斑点。(2)酸碱指示剂溶液：例如，0.3%溴甲酚绿甲醇溶液，在绿色背景上显示黄色斑点，表示脂肪族羧酸。常用的显色剂有：5%磷钼酸乙醇、碱性高锰酸钾溶液、硝酸银-氢氧化铵试剂、荧光显色剂等。特殊显色剂是指能显某一种或几种官能团或化合物的试剂。例如，喷洒2% 2，4-二硝基苯肼乙醇溶液，并在120加热。10分钟，醛酮在黄橙色背景上显示红色或橙色斑点。 33，3的原位化学衍生化已成为色谱分析综合技术中的重要手段之一，特别是在痕量组分的检测中。在薄层色谱中，有些化合物是无色的，没有紫外吸收和荧光，同时也找不到合适的显色剂，或者具有相似性质的化合物共存，难以分离。此时，适当的化学反应可以考虑在原位产生紫外吸收、荧光、显色，或者使性质大为不同以利于分离。34，4生物自动描记法，也称为生物自动描记法，是一种通过生物测定来检测具有生物效应的物质(例如薄层上的抗生素)的方法。基于被检测物质的生物活性，将薄层板与已经用适当的微生物培养的琼脂表面接触，并放置在具有适当温度的培养箱中。一段时间后，观察抑菌点，抑制有抗生素斑点的培养基中微生物的生长，抑菌点出现在整个琼脂平板上，抑菌点可以定位抗生素成分。酶检测法实际上是一种酶抑制技术，用于通过薄层色谱法检测某些有机磷农药。放射自显影是一种用含放射性同位素的化合物显示薄层位置的方法。具体方法是使薄层上的同位素辐射穿过照相底片，显影后因银粒子而显现潜像。在一定的剂量范围内，放射性物质的斑点使底片的暗度与斑点中放射性物质的浓度成正比，从而不仅定位而且定量。(7)薄层色谱定量测定。通过薄层分离获得的斑点中的化合物可以在显影后进一步定量。测定方法可分为两类：一类是洗脱测定法，即用适当的溶剂洗脱待测斑点中的成分，然后用适当的方法进行定量；另一种是直接测定法。色谱分离后，用肉眼直接观察比较或用仪器扫描斑点来测定含量。1洗脱测定方法，1斑点位置2斑点洗脱：用收集器吸附斑点位置，然后用洗脱溶剂洗脱。3测定(1)紫外分光光度法：将洗脱液调节至一定体积，并在该化合物的最大吸收波长下测量。同时，样品点相应位置的薄层吸附剂也被取下作为空白对照。(2)比色法：灵敏度高、特异性好的比色反应是最常用的测定方法2面积测量法开发后色谱图上的斑点面积与化合物含量一致。3仪器测定法，3仪器测定法，用密度计或薄层扫描仪进行扫描定量，这种方法已成为薄层色谱定量的主要方法。1.用特定波长的单色光束扫描由吸收测定法产生的薄层，记录吸光度的变化，得到扫描曲线。样品含量可以通过将样品扫描曲线上的峰高或峰面积与标准样品进行比较来获得。2.通过荧光测定法或适当处理后产生的荧光化合物的荧光强度可以被测量和量化。3.荧光猝灭法通过荧光衰减程度来测量斑点中化合物的含量，而吸收测定法根据不同的光测定方法可分为三类：透射反射法、透射-反射法和透射扫描反射法来扫描L光源。单色仪；p薄层板；s点；光电探测器。42，仪器测定法的两个重要参数，扫描波长：(1)单波长扫描：用一种波长的光扫描薄层。(2)双波长扫描：用两种不同波长的光束连续扫描待测点，并记录这两种波长之间吸光度的差异。扫描轨迹：直线扫描、锯齿扫描、圆形扫描、复合斑点吸收光谱、单波长和双波长扫描曲线对比、四种特殊薄层、1。高效薄层色谱法。棒状薄层色谱)3。超薄层色谱法(hptlc)，45，1。高效薄层色谱法是在普通薄层的基础上发展起来的一种更灵敏、更精细的薄层技术。高效薄层是用小颗粒吸附剂制备的均匀薄层。分离效率比普通薄层高三倍，检测灵敏度提高，分析时间缩短。由于吸附剂颗粒小，流动相发展缓慢，易于平衡，在高效薄层色谱中，传质的阻滞效应往往可以忽略。显影后斑点的大小主要由化合物分子的扩散系数决定。只要化合物在显影后不走在溶剂的前面，它就是小而圆的斑点。棒状薄层色谱(薄层色谱)包括在薄层棒上点样。在点样和扩散之后，分离的色谱棒通过合适的机械传动装置水平穿过检测氢火焰的中心，导致化合物燃烧和破裂，形成离子碎片和自由电子。然后电极收集它们并产生与化合物数量成比例的电流信号来测量每种物质的含量。超薄层色谱是2002年在德国第24届国际色谱研讨会上首次提出的。整个硅胶板由四氯烷基硅(键合铅)制成，不含颗粒吸附剂。厚度为10米，大孔孔径为1-2米，中孔孔径为3-4纳米。UTLC取代了没有载体的玻璃板。开发范围为1 3厘米，缩短了分析时间，节省了开发人员。具有较高的分离效率和选择性。它可用于分离药物、酚类、增塑剂、类固醇等。5.应用实例：棒薄层色谱/氢火焰离子化检测器复杂混合峰光谱提取方法的研究及新