多糖研究进展.ppt

多糖提取分离纯化研究进展,多糖(polysaccharide)，多聚糖的简称，常由一百个以上甚至几千个单糖基通过糖苷键连接而成的，其性质已大不同于单糖，如甜味和强的还原性已经消失，广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中(贮藏生物能：淀粉、糖原和支持结构：纤维素、几丁质)，是构成生命的四大基本物质之一，与生命功能的维持密切相关。,1988年牛津大学德威克教授在当年的生化年评中撰写了“糖生物学”综述，这标志了糖生物学这一新的分支学科的诞生。糖生物学(glycobiology)是研究聚糖及其衍生物的结构，化学，生物合成及生物功能的科学。也有人沿袭“基因组学”和“蛋白质组学”的概念把这们学科叫做“糖原组学”或“糖组学”（Glycomics）。生命科学研究中的新热点。,近年来，大量研究表明多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血、抗肿瘤等作用。随着多糖的制备、结构、合成、药理学及临床学研究的不断深入，多糖药物将具有更广阔的前景。,多糖的提取,多糖的生物活性倍受关注，但不少多糖的提取方法和工艺尚未成熟，各种方法的开发、比较、分析是研究工作的焦点之一。目前多糖提取方法主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法等。,首先要根据多糖的存在形式及提取部位不同，决定在提取之前是否做预处理：提取时需注意对一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在用水提取前，应先加入甲醇或1：1的乙醇乙醚混合溶液或石油醚进行脱脂，而对含色素较高的根、茎、叶、果实类，需进行脱色处理。,溶剂提取法,溶剂提取法一般遵循相似相溶原则，应选择水、醇等极性强的溶剂。水提醇沉是现在提取多糖应用最多的一种方法。但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等溶于水的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难。,酸提取法,有些多糖，含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖，适合用稀酸提取。可用乙酸或盐酸使溶液成酸性再加乙醇，使多糖沉淀析出。由于H+的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起糖苷键断裂，因此，只在一些特定的多糖提取中占有优势。,酶提取法,反应在低能量水平进行，且在温和条件下分解组织，加速释放多糖。常用的提取酶有蛋白酶、纤维素酶、果胶酶。酶提法杂质易于去除，缩短提取周期，条件温和，目标产物活性高，产物大多无毒，极大程度提高了多糖的提取率。一般作为辅助手段。,多数分离手段均可用于或有助于多糖的提取。多糖的提取分离纯化方法在不断更新，在选取方法时，应当关注目标多糖的性质、特点，综合比较进行实验，才能选取最佳的方法和工艺。,多糖除杂质,1.蛋白质的去除：采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中常含有较多的蛋白质，除蛋白的方法传统上有Sevage法、三氯乙酸法、酶解法、三氟三氯乙烷法等。Sevage法：原理：蛋白在有机溶剂中易变性。将氯仿按多糖水溶液的1/5体积加入，然后用1/5氯仿体积的正丁醇混合后剧烈振摇2030min成乳化液，蛋白质变性成胶状，离心后除去水层和溶剂层交界处的变性蛋白。,三氯乙酸：浓度越大,去蛋白质效果越好,但当三氯乙酸浓度超过10%时,脱蛋白的效果变化不大,三氯乙酸浓度越大,对多糖的影响也越大,可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用,使多糖降解,而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度的增大而增强。酶解：辅助。三氟三氯乙烷：蛋白强变性剂。沸点低，易挥发，不宜大量使用。,多糖色素的去除,多糖提取过程中，会有色素物质产生（氧化或其他），影响多糖的色谱分析和性质测定。色素一般是酚型化合物，大多呈负性离子，不能用吸附去除。DEAE-纤维柱（DEAE-SepharoseFastFlow）是最常用的方法，不仅可以达到脱色的目的，而且可以进行多糖的分离。,氧化脱色：用于多糖与色素结合的情况。（余华）：海带多糖中，H2O2氧化脱色较吸附脱色好，但温度不宜过高，应在低温下进行，否则其氧化性易引起多糖的降解。,银耳多糖,多糖的