食品中微生物标准检验与分析技术

第五章食品中微生物的标准检验和分析技术、食品卫生检验和管理、第五章食品中微生物的标准检验和分析技术、第一节菌落总数的检验和分析、第一部分菌落总数的介绍、在一定条件下(如培养基组成、培养温度和时间、酸碱度、需氧特性等)处理和培养1毫升(或1克)食品样品后形成的菌落总数。)。在国家标准规定的培养条件下获得的结果仅包括在营养琼脂上生长发育的一组嗜温好氧细菌或兼性厌氧菌的菌落总数。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，食品污染程度的标志，食品保质期的预测，卫生意义，2。检验方法和菌落计数的测定：一般情况下，将待测样品制成10倍增量的不同稀释液，然后取出每种稀释液1毫升，放入灭菌盘中，与营养琼脂培养基混合。在一定温度下，培养一定时间(通常为48小时)后，记录每个平板中形成的菌落数，并根据稀释倍数计算每克(或每毫升)原始样品中包含的菌落总数。基本操作一般包括：稀释样品-倒入平板-培养48小时-计数报告。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，第三节检验程序，GB/T4789.2-2003，第五节食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，第四节操作步骤，(1)准备的第一台设备(清洗、干燥、包装和灭菌)包括规格、名称和数量1，500毫升广口瓶1，2，500毫升三角瓶1，3，250毫升三角瓶2， 4，18180毫米试管3，5，1毫升移液管5，6，90毫米直径板10套7，250毫升量筒1，8，玻璃珠：约5毫米直径9，剪刀1不锈钢勺1，第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节总菌落数的检验和分析，样品：袋装鲜奶1。 操作方法用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。称取25毫升试样，放入装有适量玻璃珠的灭菌瓶中，然后慢慢加入225毫升温热的灭菌生理盐水，摇匀，即1:10稀释液。用1毫升无菌移液管吸取1毫升1: 10的稀释液，沿管壁慢慢注入装有9毫升无菌生理盐水或其他稀释液的试管中。摇动试管，混合均匀，制成1: 100的稀释液。再取1毫升无菌吸管，按上述操作顺序进行10次递增稀释，每次递增稀释用1毫升无菌吸管。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，(2)样品处理和稀释，第五节食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，(2)样品处理和稀释，1。操作方法根据标准要求或污染估计，选择2-3种合适的稀释液，在10倍递增稀释的同时，用吸管吸取稀释液，将1毫升稀释液转移到灭菌板上，每次稀释制作2个平板。将冷却至46的平板计数琼脂培养基倒入平板约15毫升，旋转平板并混合均匀。同时，将营养琼脂培养基倒入含有1毫升稀释剂(无样品)的灭菌平板中作为空白对照。琼脂凝固后，将平板翻转并在361培养箱中培养482小时。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，(2)样品处理和稀释，(4)菌落计数。1.应选择菌落数在30至300之间的平板进行计数(序列号标准要求25至250个菌落)。如果两个稀释度都在30和300之间，则两者的比例应根据国家标准方法的要求确定。比率小于或等于2，取平均值。如果比值大于2，则应选择较小的数值(有些法规不考虑比值，2。如果所有稀释度不在计数区间内，并且如果所有稀释度大于300，最高稀释度的平均菌落数应乘以稀释倍数并报告。如果它们都小于30，则稀释度最低的菌落的平均数量通过乘以稀释倍数来报告。如果菌落数大于300或小于30，但不在30和300之间，应通过将最接近300或30的平均菌落数乘以稀释系数来报告。如果所有稀释液中没有菌落生长，则应报告为低于最低稀释倍数的1倍。(4)菌落计数，第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第一节菌落总数的检验和分析，3。不同稀释水平的菌落计数应与稀释倍数成反比，即稀释倍数越高，菌落计数越少，稀释倍数越低，菌落计数越多。如果存在相反的现象，则应将其视为检验中的错误，不应将其作为样本计数报告的依据。4、当平板上有链状菌落生长时，如果在链状菌落之间没有明显的边界生长，则应将其用作菌落计。如果有来自不同来源的几条链，每条链都应被视为一个菌落，并且在链上生长的每一个菌落都不应被单独计数。如果有板状菌落生长，该板一般不适合使用。如果板状菌落少于板的一半，而另一半均匀分布，板的一半中的菌落数可以乘以2来表示整个板中的菌落数。(4)菌落计数，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第1节菌落总数，(4)菌落计数，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第1节菌落总数，和第5节。当计数板中的菌落数量太大(即所有稀释度大于300)但分布均匀时，可以计数板的一半或1/4。将其乘以相应的稀释倍数作为平板的菌落数。5.报告菌落数。按照国家标准方法，当菌落数为1100时，按实际数上报。如果大于100，则报告前两个有效数字，第三个数字通过舍入计算。以下表为例，(4)菌落计数，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第1章菌落总数，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第1章菌落总数，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2章大肠菌群，指一群能分解乳糖产生酸和气体的革兰氏阴性无芽孢杆菌，需氧和兼性厌氧菌，在37培养24小时。作为粪便污染指标，具有广泛的卫生学意义。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节大肠菌群的检验和分析，第二节大肠菌群的检验和分析，检测步骤，1。样品稀释，MPN:表示食品中大肠菌群的数量是每100毫升或每克样品最接近的值，一般采用9管法。普通样品25毫升(g)225毫升生理盐水=1: 10，从该10-1样品中抽取10毫升，则其中所含样品为1毫升(g)。接种到3个双饲乳糖发酵管中。如果从该10-1中提取1毫升，其中包含的样品为0.1毫升(g)。接种到3个单料乳糖发酵管中。表142-143。如果从10-1=1: 100取1毫升9毫升生理盐水，从10-2取1毫升，其中所含样品为0.01毫升(g)。接种到3个单料乳糖发酵管中。第五章食品微生物检验分析技术标准，第二节大肠菌群检验分析，2。乳糖发酵试验，(1)培养基的单料乳糖胆盐发酵管：蛋白胨2%猪胆汁盐(或牛胆汁盐)0.5%乳糖1%，1.6%溴甲酚紫液精液0.06毫升pH7.4。制备方法：将蛋白胨、胆汁盐和乳糖溶于水中，调节酸碱度，加入指示剂，分装每管10毫升，放入小倒置管，在115高压灭菌15分钟。双乳糖胆盐发酵管中除蒸馏水外的双组分。第五章食品微生物标准检验和分析技术，第二节检验和分析分解乳糖产生酸和气体的大肠菌群，看小倒管中的气体。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节大肠菌群的检验和分析，杜氏发酵管产气，1产气和2非产气，第五节食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节大肠菌群的检验和分析，第三节食品中微生物的鉴定和分离培养，第五节食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节大肠菌群的检验和分析，4项验证试验， (1)革兰氏染色：阴性和短杆菌(2)乳糖再发酵：产酸和产气，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节大肠菌群的检验和分析，粪大肠菌群的检验，稀释乳糖发酵试验(发酵曙红亚甲基蓝培养基)结果的验证和评估，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节大肠菌群的检验和分析，大肠菌群发酵液(大肠菌群发酵液)。 第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节大肠菌群的检验和分析，第一个半天设备准备，设备准备和灭菌，如下：1250毫升三角瓶，118180毫米试管，2 3个乳糖发酵管(带黑帽或棉塞，校准试管，内有小倒置管)15 4，250毫升量筒15，1毫升移液管2 6，10毫升移液管2 7，6套板， 第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节大肠菌群的检验和分析，第2节半天样品处理和初级发酵，第1节样品处理2，样品稀释和乳糖胆盐发酵试验3，在35-37摄氏度下培养18-26小时，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节大肠菌群的检验和分析， 第二节曙红蓝培养基的分离和培养接种大肠菌群(粪大肠菌群)，第一节曙红蓝培养基的分离和培养，第二节曙红蓝培养基(大肠菌群)的分离和培养，第五节食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节大肠菌群的检验和分析，曙红Y是酸性染料，有色部分是阴离子(E-)和有色部分是阳离子(M)。 细菌细胞的主要成分是蛋白质。因为蛋白质是两性电解质，在酸性环境中正电荷增加，容易与曙红结合，在碱性环境中负电荷增加，容易与亚甲蓝结合。然而，由细菌发酵的乳糖是产酸的。亚甲蓝并非完全无效，通常在典型的大肠杆菌中发现(乳糖发酵非常迅速)。曙红被染成粉红色后，亚甲蓝可以继续将其染成带有金属光泽的紫黑色菌落。在验证测试的第三天，1。乳糖再发酵试验2。从阳性EC肉汤中分离EMB。3.典型EMB菌落的革兰氏染色镜检，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节大肠菌群的检验和分析，革兰氏染色：阴性和短杆菌，观察结果和第4天设备的消毒和清洗，1。观察乳糖发酵管结果，2。观察EMB培养结果和革兰氏染色镜检3。设备消毒和清洁。查表报告结果和写实验报告。第五章食品微生物标准检验分析技术，第二节大肠菌群检验分析，第五节食品微生物标准检验分析技术，第二节沙门氏菌检验分析。沙门氏菌是一大群革兰氏阴性杆菌，寄生在人和动物的肠道内，具有相似的生化反应和抗原结构。它们统称为沙门氏菌。首先，沙门氏菌的生物学特性，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节沙门氏菌的检验和分析，猪霍乱沙门氏菌是在1885年霍乱流行时从猪霍乱沙门氏菌中分离出来的，因此被命名为沙门氏菌。有些沙门氏菌对人类有特殊的致病性，有些仅对动物有致病性，有些对人类和动物都有致病性。沙门氏菌病是指由各种类型的鲑鱼引起的各种形式的人类、牲畜和野生动物1、沙门氏菌简介，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节沙门氏菌的检验和分析，沙门氏菌是具有公共卫生意义的人畜共患疾病之一，沙门氏菌属肠杆菌科，革兰氏阴性肠杆菌科。引起肠胃炎、伤寒和副伤寒的细菌。除了感染人类，它们还能感染许多动物，包括哺乳动物、鸟类、爬行动物、鱼类、两栖动物和昆虫。已经发现了近1000个物种(或菌株)。根据其抗原成分，沙门氏菌可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌群。其中，甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌和鼠伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌和猪霍乱杆菌、丁型伤寒杆菌和肠炎杆菌主要与人类疾病有关。1、沙门氏菌介绍，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节沙门氏菌的检验和分析，形态学，染色G-杆菌0.6-1.0 m 2-4 m全身鞭毛，菌毛。沙门氏菌的形状和大小，第5章食品中微生物的标准检验和分析技术，第2节沙门氏菌的检验和分析，生化反应，无乳糖分解(亚利桑那菌除外)，葡萄糖分解产生酸和气体(伤寒沙门氏菌不产生酸和气体)。它们中的大多数产生H2S，不产生靛蓝基质，不液化明胶，不分解尿素，不产生乙酰甲基甲醇，它们中的大多数可以使用柠檬酸盐，可以将硝酸盐还原成亚硝酸盐，并且不在氰化钾培养基上生长。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术第二节沙门氏菌的检验和分析沙门氏菌病目前至少有67 O抗原和2000多种血清型，由它们引起的疾病称为沙门氏菌病。肠道热是伤寒和副伤寒疾病的统称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。急性肠炎(食物中毒)是最常见的沙门氏菌感染。主要由鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱、肠炎杆菌等引起。败血症-通常由猪霍乱、副伤寒、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎杆菌等引起。第五章食品微生物标准检验和分析技术，第二节沙门氏菌检验和分析，第三节沙门氏菌检验，中华人民共和国国家标准，GB/T4789.4-2003，微生物检验，第五节食品微生物标准检验和分析技术，第二节沙门氏菌检验和分析，TSI(不含A/AH2S-结果)，靛蓝基质，尿素，KCN，赖氨酸，沙门氏菌血清学试验，H2S靛尿-kcn-lai，H2S靛尿-kcn-lai /-，不含各种结果沙门氏菌、沙门氏菌、非沙门氏菌的血清学试验，沙门氏菌的检验和分析第二部分，预富集：25g(加工食品)225 ml缓冲蛋白胨37度培养4小时(干鸡蛋18-24小时)。 富集：移去10毫升，接种到100毫升的富集液中。氯化镁孔雀石绿(MM)或四硫酸钠亮绿(TTB)，亚硒酸胱氨酸(SC)。(1)预富集和富集，(2)分离培养，最适生长温度为35 37，最适pH值为6.8 7.8。选择性琼脂平板：BS培养基(亚硫酸铋琼脂)、DHL琼脂、HE(海克顿肠琼脂培养基)或WS琼脂和SS琼脂。第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节沙门氏菌的检验和分析，第二节沙门氏菌的检验和分析，第五节食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节沙门氏菌的检验和分析，(3)五项生化试验，1，三糖铁琼脂试验2，靛蓝基质试验(吲哚试验)3，脲酶试验4，氰化钾试验(KCN)5，赖氨酸脱羧酶试验，第五章食品中微生物的标准检验和分析技术，第二节沙门氏菌的检验和分析，1。三糖铁(TSI)试验。肠杆菌科是革兰