抗菌药物敏感试验完整PPT课件

，1，抗菌药物敏感性概述抗菌药物敏感性检查方法全国“细菌耐药性监测网”简介，2，敏感性和耐受性的概念，本质上取决于细菌对某种抗菌素敏感或耐药性，抗菌药物的治疗浓度和MIC的关系。通过一般剂量的抗菌素可以达到的血液浓度，3，血液浓度与MIC的关系，敏感性，中介耐药性，耐药性，上限，下限，4，抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系：MIC低于治疗浓度时“敏感”(Sensitive，S)，建议。如果MIC大于治疗浓度，则“抵抗”；如果MIC介于治疗浓度的最小-最大之间，则中度耐药性(Intermediate，I)或中度敏感性、敏感性和耐药性的概念。5、6，敏感性，治疗浓度上限为表中的r，治疗浓度下限为表中的s，耐药性，介入耐药性，治疗浓度，CLSI标准，MIC，第7，1节，抗菌药敏试验方法，氧和兼性厌氧菌，8，稀释法肉汤稀释法(试管稀释法)琼脂稀释法(板稀释法)纸张扩散法(宗法)E-实验复合药敏试验，氧和兼性厌氧细菌敏试验法。9，稀释法的特征，定量药敏试验，MIC，MBC。方法比较冗长，手工一般不做常规实验，常用于调查罕见的耐药性。用微量稀释法检测MIC的自动微生物识别药敏分析系统。10，2，纸扩散法(Kirby-Bauer方法)，原则：将装有抗菌药物的纸贴在装有测试菌的琼脂板上。抗菌剂扩散到琼脂四面，形成减少的梯度浓度。药物敏感的细菌在纸张周围一定距离内抑制生长，形成抑菌圈。抑菌圈的大小反映了测试细菌对药物的敏感程度。两者有正相关。11，抑菌圈边缘的药物浓度和MIC，12，抑菌圈的大小和MIC:两者都有负相关。换句话说，抑菌圈越大，MIC越小。13，纸方法药敏试验抑菌圈直径及结果解释标准。14，操作方法：1。M-H琼脂平板准备，厚度4mm。制造0.5迈浊导管浊度的细菌液(16 24小时，45个菌落培养)。细菌均匀地涂在板上。(15分钟完成接种)4 .M-H琼脂表面贴上灭菌的标准抗生素纸5。35 16 24小时后孵化。6.测量抗菌环直径，并根据CLSI标准报告，细菌对这种抗生素敏感、抗药性，而且是媒介。15，操作方法：1。将直径90mm的板倒入约56 的恒温无菌M-H琼脂中，使厚度为4mm。16，2。用灭菌在16 24小时培养的血液板上挑出45个群体。17，3。将菌放入灭菌生理盐水中，校准浊度大于0.5迈浊度的细菌液。1.5108CFU/ml，18，4。用无菌棉签浸泡在细菌悬浮液中，将棉签轻轻压在试管墙上，挤出过多的菌液。棉棒在三个方向均匀地擦拭琼脂表面(每次旋转60 )，均匀地分散菌液，然后沿着平板内边缘涂抹一周。19，5。盖上扁平的盖子，放入培养箱内孵化，310分钟后贴上标准抗生素纸。20，6。使用无菌镊子或纸分配器将抗菌纸粘贴到M-H琼脂的表面。纸粘贴后不能移动；每张抗菌纸的中心距离必须大于24mm，纸张必须在平板内部边缘大于15mm。21，7。35 16 24小时后孵化。8 .采取抗菌环直径，按照CLSI标准，细菌对抗生素敏感、耐药性，并报告介质。22、纸张扩散法质量控制，培养基：M-H板厚度，4mm细菌悬浮液：0.5 mi标准细菌浓度药敏纸质量每张抗菌纸中心距离大于24mm，纸张必须在板内边缘大于15mm。9厘米的平板上有6个培养时间质量控制菌株，抑菌圈直径？，。23、24，根据抑菌圈的直径，根据CLSI标准做出敏感、耐药性、中介的判断。“定性”结果。CLSI推荐的最简单的药敏试验。，纸张扩散法的特征，25，3，e试验法(浓度梯度法)，原则：e试验片是5mm50mm无孔试剂载体，一侧固定着一系列预准备浓度持续呈指数增长的抗菌剂，另一侧有差别刻度。抗菌剂的斜率可以复盖15-20倍稀释浓度的宽度。在细菌接种的琼脂平板上放置e检验培养后，观察其周围，可以清楚地看到椭圆形的抑菌源。圆的边缘和测试条交叉部分的尺度浓度是抗菌药物抑制细菌的MIC。根据CLSI标准判断敏感、耐药性、中介。256188016，26，无菌生长区，细菌生长区，27，椭圆细菌生长抑制区，256188016，抗菌浓度(MICug/ml)，28，29，30，Etest方法的特性，优点连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好(相关系数0.9)。可测量的MIC。操作简单，影响因素少，稳定性高。缺点：e测试条更贵。不适用于生长缓慢的孢子菌。31、用于病原体尚未确定的急性重症的经验治疗，扩大病原体治疗的复盖范围，对多种细菌混合感染引起的特定耐药菌发挥协同抗菌作用，减少或推迟治疗中细菌耐药性的发生预防药物达到毒性。第四，组合药敏试验，组合药的重要性，32，提高效果：两种抗生素的结合效果大于它们单独使用时的效果之和；20%到25%的附加效果：与两种抗生素相结合的效果相同。60% 70%无关：两种抗生素结合的效果相当于其中具有强大效果的抗生素的效果；拮抗作用：两种抗生素结合时的效果小于他们单独使用时的效果之和。10% 15%，两种药物的结合效果，33，两种抗菌素的工作部位不同：-内酰胺抗生素(抑制细菌细胞壁合成)和氨基糖苷类抗生素(干扰细菌代谢)。改善效果：细菌细胞巴什肽(减少细胞通透性)和氨基糖苷酶(阻碍细菌代谢的药物)的药物增加了。拮抗作用：减少药物进入细菌细胞。抗菌剂协同作用的原理，34，棋盘稀释法利用肉汤稀释法的原理，根据两种药物的MIC，将两种药物的不同浓度组合设计成板材。抗菌浓度指数(fractioninitoryconcentration，fic)，结合药敏试验方法，35，筛板稀释法，MIC测定试验菌的同类抗菌剂。药物的最大浓度稀释为MIC的两倍。在方阵的纵向和横向列中稀释这两种药物，以便在每个管子(孔)中获得两种不同浓度的药物混合液。接种细菌量为5105 cuf/ml，35 孵化18h后观察结果。计算部分抗菌浓度(FIC)指数。36，抗菌浓度指数(fic)，fic=，A药物结合时mic，A药物单一测试MIC，B药物结合时MIC，B药物单一测试MIC，fic？0.5 1是附加效果。1-2是无关紧要的。2由于拮抗作用，37，A约：321684，B约：142，增长，增长，增长，增长，增长，增长稀释法：MIC，MBC的准确测量有点麻烦，试管方法通常不作为常规试验使用。微生物自动分析系统使用微稀释法的原理。e测试：可以测量MIC。39，第二节结核分枝杆菌的药敏试验(了解)，首次分离的结核分枝杆菌进行药敏试验，有助于合理用药和药敏试验。另外，经过三个月的正式治疗，标本分离培养仍是阳性患者，或有传染性的严重疾病(如传染性肺结核或结核性脑膜炎)。来自高耐药流行地区的患者都需要接受体外药敏试验。40，4种方法，比例辐射同位素法绝对密度计内存率法，直接法：直接使用照片阳性体液标本。需要充分消化5种细菌的间接方法：分离纯培养菌后的二次培养细菌。，41，无药，约2，约3，约1，Middlebrook7H10琼脂培养3周，间接比例法(WHO推荐)，敏感性：含药物结核杆菌生长或菌落数？不含药物的对照组菌落数为50150，4格板，42，未分枝杆菌快速药敏试验法，4000倍。43，培养72h观察结果，INH敏感性，RFP耐受性，阳性对照组，阴性对照组。44，3节厌氧菌测试(了解)，厌氧菌感染大部分是内源性感染，厌氧菌药敏稳定，一般不做体外药敏试验。以下情况应考虑药敏试验：明显由厌氧菌引起的严重感染；经确认的厌氧感染，经验药物治疗不起作用；需要长期使用的厌氧感染。45，基本原理和方法与好氧细菌相同，但培养基、工作环境和培养条件等必须根据厌氧细菌的特定要求发生变化。培养基为布氏血琼脂再补充剂5g/ml血红素，5%脱纤维量，1g/mlVitK。厌氧孵化条件质量控制菌株是弱细菌ATCC25285。厌氧细菌体外药敏试验，46、药敏试验结果的临床价值，影响抗菌药物临床疗效的诸多因素，约70%的药敏试验结果，因此，细菌培养及药敏试验报告应仅用于临床用药参考，并应根据患者药物治疗反应及临床状态及时调节药物。医学检查的灵魂是与临床的沟通。47、探索新的药敏试验方法，采用流式细胞术检测抗生素最小抗菌浓度，快速测定分枝杆菌药物最小抗菌浓度。48，细菌耐药发生过程：细菌获得与耐药性相关的基因编码耐药相关蛋白质，对某种抗生素产生耐药性，基因：537表：书533页灵敏度，49，35章第3节细菌耐药性检查。50、生化技术检测酶的等电点(等电聚焦电泳)头孢菌素噻吩滤纸碘淀粉测定分析酶的底物谱和抑制剂谱纸方法及稀释方法，1、-内酰胺酶检测，临床意义：ESBL克雷伯氏菌生产和大肠杆菌，1，耐药性表型检查，51，G-细菌检测头孢菌素滤纸方法，免疫接种头孢菌素噻吩(头孢菌素生产)滤纸中选择试验菌(商业化)，10分钟内从浅黄色变成粉红色，头孢菌素的-lactam环在酶中临床意义：产生这种酶的细菌对头孢菌素等抗生素具有耐药性。52，G细菌产生的青霉素酶检测-碘淀粉测定，将试验细菌混合在青霉素溶液中震动30分钟。添加淀粉液，然后添加碘，溶液变蓝，继续摇晃。10分钟内蓝色失踪者是产酶菌株。青霉素酶、青霉素、青霉素噻唑酸、碘、碘淀粉复合物变成无色，大部分由黄色葡萄球菌制成，对青霉素g产生耐药性。53，超广谱-lactamase扩展-spectyume-Lactamase，ESBLESBLs，青霉素，头孢菌素，氨均可水解。Imipenese不能水解。例如，大多数imipenem可以被-内酰胺酶抑制剂(如克拉维酸、三唑巴坦、舒巴坦)抑制。如果是ESBL阳性，青霉素和头孢菌素和氨报告耐药性，不考虑体外药敏结果。54，ESBLs的常见生产菌株，最常见的是enter obacteriaceae(Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae)。其次是Enterobacter cloacae、Serratia marcescens、frood柠檬酸盐、铜绿假单胞菌、淋球菌等。55，ESBLs的临床意义，目前对ESBLs产生菌最有效的抗生素是卡培尼西林(泰成)，其次是含有头孢西丁和酶抑制剂的合成剂，氨基糖苷酶部分有效。如果临床上发现ESBLs菌株，会在患者和医院之间，以及由不同菌株传播，所以要充分注意。，56，纸1体：培养基：Muller-Hinton琼脂药物敏感纸接种：按照标准纸扩散法孵化：35大气环境，16-18小时结果：cefpodoxime (10ug/切片)，57，57，徽章：Muller-Hinton琼脂药物敏感纸浓度：cefotaxime 30ug，cefotaxime/clar非酸30ug/10ug ceftazidime 30ug，ceft ataxime，ESBLs的气质ESBLs的抑制剂，(1)。纸张验证测试：58，混合克拉维酸药纸，克拉非酸纸片直径，直径差5毫米：esbl，59，筛选测试：选择cefpodoxime、cefotaxime、amine、cefotaxime或cefotaxime至少2种，用标准肉汤稀释法稀释1g/ml，被测试菌可在上述各管中生长(，60，确认试验：标准肉汤稀释法测定MIC的方法，cefotaxime单独稀释(0.25 64g/ml)和cefotaxime(稀释范围相同)加克拉维酸(每个管道4g/ml)Ceftazidime必须单独稀释(0.25 128 g/ml)和ceftazidime加克拉维酸(每个管4g/ml)一起测试，结果克拉维酸和克拉维酸的MIC差异8倍(3稀释度)，(2)液体稀释法，61，2，用细菌耐药基因检测、基因检测法检测细菌耐药优缺点的抗生素耐药性的基因检测法，应用。62，基因检查细菌耐药性的优点：可以早期诱导临床医生的治疗药物。分子遗传学方法可以大大节省时间，减轻实验室的生物风险，无需从临床标本中立即出发培养菌株。中介水平或常规药敏结果有助于查明模糊的结果。分子生物学方法被认为是“黄金标准”。在对细菌耐药性的传染病追踪研究中，耐药性基因检测比抗生素敏感性方法更准确。发现新的耐药基因。63，检测抗生素耐药性缺点的基因检测方法：样品中细菌数量少，敏感性明显下降。对试验的每种抗菌药物，应设计一次检测一种耐药机制的适当分子检测方法。还有很多耐药机制不能进行分子检查。耐药性基因检测也可能存在假阳性问题。检查耐药性基因后，目前缺乏