食源性病原菌实验室检验的质量.ppt

食源性病原菌实验室检验的质量控制,分为室内质量控制和室间质量评价两个组成部分一、室内质量控制（一）检验人员的培养1.定期进行新理论、新技术和新方法的业务学习。2.定期进行理论考核和操作技能考核。3.编写作业指导书。,（二）仪器设备的功能监测、维修及保养1.恒温孵箱、水浴箱和冰箱：了解其性能，每天记录温度，定期清理消毒，冰箱定期化霜。恒温孵箱、水浴箱定期检定。2.灭菌器械的效果检测：化学指示剂胶带嗜热脂肪芽胞杆菌指示菌片枯草杆菌芽胞3.二氧化碳培养箱：注意CO2含量的监控。,4.厌氧箱或厌氧罐：进行厌氧环境监控。美兰指示条，刃天青指示剂5.微生物鉴定仪：a.及时更新系统操作软件。b.定期对仪器的探测部位进行清洁。c.对每批号的鉴定卡、条和板用标准菌株进行测定，并核对每个反应结果。,（三）消耗性材料的质量控制1.培养基：定期用质控菌株测试其效果和检测灭菌效果。a.基础培养基：要求细菌生长良好，并表现其典型的特征。b.选择性培养基：要求被抑制的细菌不生长或生长较弱而被选择生长的细菌生长良好。c.生化反应培养基：要求用标准阳性和阴性菌株进行质量控制。,培养基名称菌株名称预期结果,普通琼脂大肠埃希菌生长表皮葡萄球菌生长血琼脂平板乙型溶血性链球菌生长、乙型溶血甲型溶血性链球菌生长、甲型溶血伊红美蓝琼脂大肠埃希菌生长、发酵乳糖鼠伤寒沙门菌生长、不发酵乳糖金黄色葡萄球菌不生长SS琼脂大肠埃希菌生长不良鼠伤寒沙门菌生长金黄色葡萄球菌不生长尿素培养基普通变形杆菌阳性（红色）志贺菌阴性（不变色）,2.试剂：注意有效期和贮存条件，用阳性和阴性菌株进行监控。血浆凝固酶金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌氧化酶试剂铜绿假单胞菌、大肠埃希菌靛基质试剂大肠埃希菌、产气肠杆菌,3.诊断血清：注意有效期和效价，用标准菌株测试其敏感性和特异性。4.染色液：用阳性和阴性菌株进行监控。5.玻璃器具：注意残留消毒剂对细菌的影响及保存条件和时间。,（四）实验室环境的控制1.防尘源性污染措施：定期进行实验室的熏蒸消毒，工作前后消毒液喷雾降尘，擦拭工作台面。2.防人源性污染措施：换鞋、带口罩、帽子、手套，穿隔离衣。3.防实验动物和实验材料自身的污染：注意无菌操作，要防止动物体表和体内正常存在的微生物污染样本，干扰病原微生物的检出。,二、室间质量评价实验室间比对及能力验证试验的目的及意义：1.参控实验室工作人员在分离、鉴定模拟样本致病菌过程中发现所存在的问题，以及发现鉴定未知菌株中所用的培养基和试剂存在的问题。有利于操作程序、方法的标准化和培养基、诊断试剂的统一和商品化。,2.对参控实验室检验人员，通过对未知菌株的分离、鉴定，起到了培养和训练作用，促进和提高参控实验室理论水平和技术水平。3.帮助检查参控实验室室内质控中存在的问题，进一步搞好室内质控及实验室管理。,实验室间比对及能力验证试验注意事项1.尽量使收到的质控菌株存活接种增菌和分离培养基的同时，增加一支牛肉汤作复苏(增菌)培养基，4小时转种增菌液及分离平板，培养18小时再分离一次，以保证尽管是具有少数质倥菌株存活，也有可能将其分离出来。,2.坚持正确的鉴定程序。3.正确使用自制或商品的培养基和制剂。4.同时用标准菌株做阳性和阴性对照。5.认真书写检验报告，及时总结分析，发现存在的问题。,2005年全省疾控系统微生物实验室间比对及能力验证试验两个冻干细菌检样(各两支)ILC3-012检验项目：肠道致病菌分离鉴定检验依据：传染病诊断标准及相关法规汇编2003版GB/T4789.14-2003蜡样芽胞杆菌检验,1.复苏：牛肉汤364小时2.增菌牛肉汤、肠道增菌液、SC增菌液、TTB增菌液、GN增菌液、氯化钠结晶紫增菌液、碱胨水、7.5%氯化钠肉汤、葡萄糖肉汤、PSB、LB1增菌液LB2增菌液,3.分离划线接种：血平板、MYP平板、EMB平板、SS平板、BS平板、麦康凯平板、嗜盐选择性平板、TCBS平板、四号平板、改良Y平板、MMA平板挑取可疑菌落染色镜检：G-无芽胞短杆菌和G+芽胞杆菌,4.进一步鉴定试验自SS、BS、EMB、麦康凯平板分别挑取40个、20个、20个、20个可疑菌落转种TSI斜面，反应结果为-/+，H2S-。转种普通琼脂斜面、血平板及做血清学分型、生化试验和噬菌体裂解试验。G-无芽胞短杆菌分别为福氏2a志贺菌、宋内氏相志贺菌和宋内氏相志贺菌。挑取血平板、MYP平板上进行纯培养后进一步生化试验及用碱复红染色镜检，G+芽胞杆菌为蜡样芽胞杆菌。,5.鉴定结果检出:福氏2a志贺菌宋内氏相志贺菌宋内氏相志贺菌蜡样芽胞杆菌,ILC4-012检验项目：食品中致病菌检验检验依据：GB/T4789.131-2003食品卫生微生物学检验1.复苏：牛肉汤364小时2.增菌仅在牛肉汤、葡萄糖肉汤见大量颗粒状沉淀生长。,3.分离培养血平板：针尖大小、-溶血环菌落。同时用甲型和乙型溶血性链球菌标准菌株做监控。染色镜检：G+球菌，呈单个或短链状排列。4.进一步鉴定试验链激酶试验和杆菌肽敏感试验。同时用标准菌株做对照。5.鉴定结果检出乙型溶血性链球菌,2004年中国实验室国家认可委员会(CNAL)的食品微生物学能力验证4份样品均为鱼粉PTSampleA和PTSampleB副溶血性弧菌的定性检测PTSampleC和PTSampleD菌落总数,检验结果：PTSampleA检出副溶血性弧菌、溶藻弧菌和梅氏弧菌PTSampleB未检出副溶血性弧菌，检出拟态弧菌PTSampleC菌落总数：4.4x105CFU/mlPTSampleD菌落总数：4.7x105CFU/ml,2005年国家实验室认可微生物盲样检测方式：保存半固体检验项目：食