DNA粗提取与提纯ppt课件

第四章遗传分子基础，4.2DNA提取和鉴定，1 .了解DNA的理化性质，粗略提取DNA，了解DNA识别原理。2.尝试从植物或动物组织中粗提取和确认DNA。培养实事求是的科学态度和探索精神。1 .DNA的粗提取材料选择、想法和识别原理是什么？2.DNA和蛋白质的性质有什么不同？粉碎动物细胞和植物细胞的方法有什么不同？4.如何根据DNA在NaCl溶液中的溶解度控制溶解和析出？5.DNA粗提取和识别步骤是什么？认真阅读教案，思考以下问题：NaCl、1。DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的_ _ _ _ _ _ _ _溶液中具有不同的溶解度，利用这个特性可以选择适当的盐浓度，充分溶解DNA，使杂质沉淀，反之达到分离的目的。此外，DNA不溶于_ _ _ _ _ _ _ _溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。利用这个原理，你可以把DNA从蛋白质中进一步分离出来。2.蛋白酶可以水解_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，但不影响_ _ _ _ _ _ _。大部分蛋白质在高温下不能承受60-80oc，DNA在_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _中变性。洗涤剂可以推翻_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，但对DNA没有影响。3.对DNA来说，_ _ _ _ _ _ _ _ _ _是用_ _ _ _颜色染色的，所以二苯胺可以用作检查DNA的试剂。酒精，酒精，蛋白质，DNA，80oC以上，细胞膜，沸水浴，二苯胺，蓝色，实验想法，4.2DNA提取和识别，DNA从哪里提取？如何将DNA与细胞中的其他物质分离？如何确认我们提取的DNA？NaCl溶液中的1 .DNA的溶解度随NaCl浓度的变化而变化。如果NaCl的物质浓度为0.14 mol/l，则DNA的溶解度最低。利用这个原理，可以析出溶解在NaCl溶液中的DNA。2.DNA不溶于酒精溶液，但细胞内的某些物质溶于酒精溶液。利用这个原理，可以进一步提取杂质较少的DNA。3.在酸性条件下，DNA遇到二苯胺(沸水浴)就会染成蓝色，所以二苯胺可以用作确认DNA的试剂。2mol/L、0.015mol/L、实验材料，1，鸡血细胞液(5-10毫升)；2、体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前放入冰箱，24小时冷却)；3、蒸馏水；4、柠檬酸钠溶液质量浓度0.1g/ml；(抗凝剂)5，NaCl溶液，物质量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L；6、二苯胺试剂。、上课前准备：鸡血液液，b .鸡血液很容易吸收和膨胀。使用动物间细胞作为实验材料往往需要同质和离心力。对设备的要求高，操作麻烦，长路。3.选择鸡血作为实验材料的原因：a .鸡血核的DNA丰富，材料容易。1.实验物质的选择是：2。材料选择：新鲜猪血原则上只需选择含有DNA的生物材料。)，哺乳动物成熟的红细胞没有核，DNA含量几乎不容易提取。4.鸡血细胞的制造过程：取质浓度为0.1g/ml的柠檬酸或溶液(抗凝剂)100ml，放入500ml燃烧器。注入新鲜肉桂(约180毫升)，同时用玻璃棒搅拌血液，使其与柠檬酸溶液充分混合。把烧杯里的血放在冰箱里静养一天，让血细胞自己沉淀。将血液倒入离心管，利用1000r/2min(每分钟旋转)的离心机离心2分钟，血细胞沉到离心管底部。实验时，用吸管去除离心管上部的净化液，就能得到鸡血细胞溶液。)、5 .柠檬酸钠作用：防止血液凝固，6 .实验时用吸管去除离心管上部的净化液的原因是？血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞。离心上清液是血浆(不包括血细胞)。去除牙齿，就能得到鸡血球溶液。DNA容易吸附在玻璃容器上，因此最好用塑料燃烧器和试管盛鸡血细胞液。7.注意：步骤1。提取鸡血球的核物质，将准备好的鸡血球液5mL10mL注入50m燃烧器。将20毫升蒸馏水添加到烧杯中，用玻璃棒充分搅拌5毫升，加速血细胞破裂。然后用装有纱布的漏斗将血液小液过滤到500毫升，提取滤液。讨论：(1)为什么要加蒸馏水？添加蒸馏水后，细胞会发生什么？用玻璃棒搅拌有什么意义？(3)过滤的物质是什么？得到的是什么？分析：a:如果使细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸收水，膨胀，(1)为什么添加蒸馏水？添加蒸馏水后，细胞会发生什么？用玻璃棒搅拌有什么意义？答：用玻璃棒搅动可以加速血细胞和细胞核的破裂。要在一个方向快速搅拌，但搅拌得太快，不能防止DNA破裂，(3)什么物质会被过滤掉？得到的是什么？答：过滤过滤过滤细胞膜和核膜等物质。就是获得与蛋白质等物质结合的DNA。第二阶段。溶解核内的DNA，将氯化钠的物质浓度为2mol/l的溶液40毫升放入滤液中，用玻璃棒向一个方向搅拌1分钟，搅拌混合。DNA在溶液中溶解。步骤3。取出含有DNA的占卜，沿着杯内壁慢慢加入蒸馏水，用玻璃棒轻轻搅拌。这时，燃烧器上出现细丝，观察蜘蛛网是什么颜色。继续添加蒸馏水，溶液中出现的粘度会越来越大。粘度不再增加时停止添加蒸馏水(此时溶液中氯化钠物质浓度等于0.14 mol/l)，讨论：添加蒸馏水的目的？降低NaCl溶液浓度，以DNA溶解度为最低点，从NaCl溶液中析出DNA，在实验中缓慢附着蒸馏水，然后在一个方向轻轻搅拌，以帮助附着和缠绕DNA分子。注意：步骤4。过滤包含DNA的粘度，用包含多层纱布的漏斗，三阶段中的溶液用500毫升的烧杯过滤，包含DNA的粘度停留在纱布，第五阶段。重新溶解DNA的粘度，取一个50毫升燃烧器，向烧杯中注入氯化钠的物质浓度为2 mol/l的溶液20mL。用钝头镊子将纱布的粘度夹在氯化钠溶液中，用玻璃选择搅拌，使粘度最大限度地溶解在溶液中，过滤包含6级DNA的氯化钠溶液，取1个100毫升燃烧器，用2个纱布的漏斗过滤5级溶液。取其滤液，DNA溶解在滤液中，步骤7。提取较少杂质的DNA，将在上述过滤溶液中冷却的酒精的体积率为95%的溶液50毫升(使用了冷却的酒精，DNA的凝聚效果更好)用玻璃棒搅拌，溶液中会产生较少杂质的长丝。用玻璃棒把线卷起来，用滤纸把上面的水分吸出来。这种灯丝的主要成分是DNA，因为DNA不能溶解在冷酒精里，其他物质可以溶解在酒精里，使杂质少的DNA灯丝在溶液中漂浮，然后析出。(2)观察灯丝是什么颜色？白色，(1)为什么加50毫升冷酒精？步骤8。DNA的确认，2个20毫升试管，分别提取0.015毫升氯化钠的溶液5毫升，其中一个放入丝状体，用玻璃棒搅拌，溶解丝状体。然后分别将4毫升的二苯胺试剂添加到两个试管中。将试管放入沸水中加热5min，观察和比较两个试管中溶液颜色的变化，直到试管冷却，讨论：a:带灯丝的试管变成蓝色，其他试管是原来的颜色(2)，确认结果说明了什么问题？(1)比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？答：提取的丝状结构是DNA，(3) DNA的直径约为2010-10米，实验中的丝状结构是否表示一个DNA分子直径的大小？答：DNA分子直径只有2纳米。灯丝是由多个DNA分子聚集形成的。a:整个实验枪，第一步：第一步。细胞吸水膨胀第二阶段：第三阶段。石化DNA黏附物。这个实验中用了多少次蒸馏水？过滤几次？析出了多少次？搅拌几次？各是哪个阶段？实验摘要，蒸馏水2次：3次过滤：2次析出：6次蒸馏水：2次蒸馏水：过滤用的纱布含水层与需要使用滤液或粘合物有关，第二次与过滤用的纱布有关，所以要使用多层纱布。第一个和第三个都使用那个过滤物，纱布在1-2层，过滤3次。步骤1:1。DNA在滤液中第2步：4。DNA留在纱布里第3步：6。DNA存在于滤液中。第2次析出：第1步：3。0.14mol/l NaCI溶液(杂质较多)，步骤2:7。使用95%冷却的酒精，混合6次：在这里，除了步骤8，向另一个方向搅拌，在步骤3，5慢慢搅拌，玻璃棒不要直接插入烧杯底部，才能得到完整的DNA。步骤1、2、3、5、7。思维扩张，将植物(花椰菜、洋葱)用作实验材料，如何进行DNA的粗提取和鉴定？植物细胞需要添加特定的洗涤剂和盐。例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和盐，搅拌均匀，搅拌均匀，搅拌均匀，滤出粉碎溶液，讨论：加入洗涤剂和盐分别有什么效果？答：洗涤剂是溶解细胞膜，有助于释放DNA的离子洗涤剂。盐的主要成分是NaCl，有利于DNA溶解。b，1 .从蛋白质和DNA的混合液中获得更纯的DNA的方法如下()。在混合液中加入足够的蒸馏水，在混合液中加入DNA水解酶，在混合液中加入95%的冷酒精，在混合液中加入蛋白酶a。b .c .d .。2 .在“DNA的粗提取和鉴定”实验中有3种过滤。(1)过滤用蒸馏水稀释的鸡