组织培养概述.ppt

组织培养技术,TissueCultureTechniques(InVitroCulture),概述,.绪言/Introduction.细胞生长的基本需要/Basicrequirementofcellgrowth.细胞培养的配备/Equipment.清洁、消毒与灭菌/Cleaning,DisinfectionandSterilization.无菌操作/Aseptictechnique.培养细胞的形态/Morphologyofculturecell,I.绪言/Introduction,1.概念/Concept2.发展史/Developinghistory3.应用/Application,1.概念,体外培养/Invitroculture将动植物活体内取出的组织、细胞或器官等，放置在类似体内生存环境中，使其维持、生长或繁殖的方法。wholeculturemicroorganismparasiteorganculturepartsculturetissueculturecellculture,器官培养/Organculture,体外器官原基或整个器官或部分器官的维持或生长，包括结构和功能上的维持和分化。（Themaintenanceorgrowthoforganprimordiaorthewholeorpartsofanorganinvitro,inawaythatmayallowdifferentiationandpreservationofthearchitectureand/orfunction.）,Organculture,组织培养/Tissueculture,体外组织的维持或生长，包括结构和功能上的维持和分化。（Themaintenanceorgrowthoftissueinvitro,inawaythatmayallowdifferentiationandpreservationofthearchitectureand/orfunction.）组织块（O.51立方毫米）或薄片（厚0.2毫米）,细胞培养/Cellculture,是指单细胞在体外培养。（Thistermisusedtodenotethegrowingofcellinvitro,includingthecultureofsinglecell.）通常体外培养中的单细胞不再形成组织。细胞培养也称为组织培养（tissueculture），二者可作为同义语使用。,细胞培养的类型/Typesofcellculture,（1）原代培养/Primaryculture（2）传代培养/Subculture（cellline）,（1）Primaryculture,直接来自活体的细胞（组织或器官）的初次培养。（Aculturestartfromcells,tissuesororganstakendirectlyfromorganisms.）严格地说，是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。实际应用上，常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。,新生大鼠肺成纤维细胞（原代）培养的天数：48h放大倍速：倒置显微镜X40培养基种类：1640+10%小牛血清细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长,幼兔骨髓基质干细胞（原代）：细胞种类：幼兔骨髓基质干细胞培养的天数：五天后放大倍数：倒置显微镜X40培养基种类：DMEM+20%胎牛血清细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长,传代/passageorsubculture将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶的过程。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存培养细胞的“一代”，不表示细胞分裂一次，而是指培养细胞从接种到再次转移培养的过程。,原代培养细胞的生命归宿原代培养期传代期衰退期,（2）Subculture,细胞系/Cellline原代培养成功后的细胞，传代再培养，称细胞系。有限细胞系/Finitedcellline无限细胞系/infinitedcellline,有限细胞系/Finitedcellline细胞群体在体外生长有一定限度，即体外传代（passageorsubculture）到一定次数时，细胞停止繁殖、衰退、死亡。一般情况下可传代10-50次。无限细胞系/infinitedcellline细胞群体能无限制生长下去，不进入衰退期。肿瘤细胞系可无限增殖；正常细胞系可发生自发转化，使细胞获得永久增殖的能力。,Infinitedcellline:Hela,细胞株（cellstrain）用单细胞分离培养或通过筛选的方法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株,体内培养/Invivoculture是将活体的组织细胞、器官等取出，放置在其它生物体内让其生长和发育的方法。器官移植/transplantation干细胞/stemcell,2.发展史,19世纪末，20世纪初温生理盐水培养鸡胚髓板组织存活数天提出组织培养(tissueculture)概念（1885Roux）血浆凝块试管中培养成年兔肝、肾、甲状腺、卵巢植块3天早期器官培养（1897Loeb）应用悬滴培养法，用动物血清培养狗的肉瘤细胞，存活约72小时。（1906Beebe等）短期存活，没有细胞的生长和增殖。,悬滴法培养蛙胚神经组织存活了几个星期,且从培养的细胞中长出了轴突完善了体外培养体系，体外培养技术的开始（1907Harrison）改良悬滴培养法培养鸡胚心肌细胞数年将无菌操作技术（aseptictechnique）引入体外培养发现动物体液中存在着对动物细胞生长有强烈促进作用的生长因子（1912Carrel）,1950s培养技术快速发展无菌操作技术/aseptictechnique培养容器/cultureflasks抗生素/antibiotics培养基/medium培养方法/culturemethodsmicrocarrier，hollowfiberculture,微栽体法Wezel在1967年首创固体微珠直径约在50微米到数百微米之间将细胞悬液和微载体混合孵育,待细胞贴附于微载体上,再转移至培养液中培养借助温和搅拌系统使细胞随载体均匀悬浮于培养液中，细胞就能够在微载体表面迅速生长、增殖,细胞浓度可高达107个/ml。适于各种细胞的大规模培养,空心纤维法:是Richardknazek等在1972年创建的空心纤维是一种由硅胶、聚砜、聚丙烯等材料构建的可透性滤膜,外径约为1/33/4mm,表面具有海绵状多孔结构,既能使水分子、营养物质和气体透过,也能使细胞在上面贴附生长。当细胞密度达到107108个/ml时,逐渐用无血清培养液代替含血清培养液。此时细胞不再增殖,但能正常生活并继续分泌所需的蛋白质或其他生物制品。在生产激素和单抗时被广泛应用。,3.应用,细胞生物学/cellbiology形态、发育、营养、代谢、病变等遗传学/genetics染色体分析、细胞融合、杂交、转基因等病毒学/virology病毒培养免疫学/immunology细胞因子,细胞毒试验/cytotoxictest检测有毒物质并判断其强弱（对药品、化妆品、食品添加剂、杀虫剂等进行筛选和安全评估）生物制品/biologicproduct(biologics)疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、单克隆抗体等干细胞培养/stemcellculture细胞定向诱导分化、移植肿瘤细胞培养/tumourcellculture肿瘤细胞生物学特性、肿瘤细胞发生发展、筛选抗癌药物,应用体外培养技术的优点,1.细胞种类广泛（从低等动物到高等动物，从胚胎到成体，从正常组织到肿瘤细胞）。2.能长时间直接观察活细胞的形态结构、生命活动及细胞变化，便于监控和