二代测序技术在血液系统疾病中的应用浅谈.ppt

1,二代测序技术在血液系统疾病中的应用,2,SequencingtheHumanGenome,Year,price,2010,1997,2008,10,8,6,4,2,TrendsinSequencingTechnology,2003,Sanger,2015,三代测序技术,TrendsinSequencingTechnology,1代测序SangerSequencing,利用DNA聚合酶和双脱氧链终止测定DNA核苷酸序列的方法。英国剑桥分子生物学实验室的生物化学家FredSanger及其同事在1997年发明的。,4,优点片段长度(900bps)适用于小片段,缺点低通量费用高、耗时长,TrendsinSequencingTechnology,二代测序，高通量测序（NextGenerationSequencing、High-throughputSequencing、DeepSequencing）:一次性对几百万到十亿条DNA分子进行并行测序，从而可对一个物种的转录组和基因组进行深入、细致、全貌的分析。目前主要有LifeTech的SOLiD系列、IonTorrentPGM和IonTorrentProton；Illumina的HiSeq和MiSeq序列；罗氏公司的Roche/454GSFLX和Junior。,TrendsinSequencingTechnology,2代测序NextGenerationSequencing(NGS),5,通量高准确度高分辨率高,成本下降,TrendsinSequencingTechnology,7,HighParallelismisAchievedinPolonySequencing,Polony,Sanger,8,3代测序单分子测序：HeliScope,DNA测序时，不需要经过PCR扩增，实现了对每一条DNA分子的单独测序。第三代测序技术基因组也叫从头测序技术，即单分子实时DNA测序。第三代测序技术发明人：StephenWTurner127(1):2941.,NGS在MDS中的应用,738例MDS,MDSMPN患者通过NGS检测了111个癌症相关基因，结果显示：78%的患者至少有1种致癌基因的突变骨髓或外周血提取DNA没有系统差异致癌基因突变的总数越多，结果越差,髓系肿瘤突变图谱AML,MDS,MPN,MDS/MPN,Matyniaetaletal.2015.ArchivesofPathologyandLaboratoryMedicine.,总生存率,复发率,Iveyetal.,NEnglJMed2016;374:422-33,MRDinStandard-RiskAML,有MRD的患者预后差，复发率高,Iveyetal.,NEnglJMed2016;374:422-33,MRDinStandard-RiskAML,有MRD携带FLT3-ITD的患者复发率高,复发无FLT3-ITDmutations,复发有FLT3-ITDmutations,Iveyetal.,NEnglJMed2016;374:422-33,MRDinStandard-RiskAML,有MRD携带DNMT3A的患者复发率低,复发withoutDNMT3Amutations,复发withDNMT3Amutations,NGS在T-ALL中的应用,NGS（外显子测序，全基因组测序或转录组测序）已经鉴定出T-ALL中突变的100多个基因。只有两个基因NOTCH1和CDKN2A/2B在超过50的T-ALL病例中突变，其余基因以较低的频率突变,63个基因的靶向测序（TGS）,NGS在CLL临床诊疗中的应用,不同的panel针对不同的需求,IG/TCR,展望,NGS正在为病理学和实验医学带来改革真正实现“个体化治疗”、“精准治疗”有利于进行靶向治疗费用的快速