微生物的实验室培养(公开课).ppt

，主题2微生物培养和应用，微生物，原核生物：真核，非细胞类：细菌，放线菌，支原体，蓝藻等，酵母，真菌等，真菌：原生生物，病毒，病毒广泛分布。容易培养。个人小。结构简单。繁殖快。台词很强。容易变异。微生物群，微生物特性，(1)球菌，(2)螺旋细菌，肺炎球菌，金黄色葡萄球菌，链球菌，链球菌，大肠杆菌，芽孢杆菌，孢子壁厚，水分含量很低，抵抗力很强(对干旱、低温、高温等恶劣环境有很强的抵抗力)。细菌孢子的结构图在环境适合的时候孢子萌发，形成一个细菌。殖民地具有大小、形状、光泽、颜色、透明度等基本特征。菌落是鉴定菌株的重要基础。菌落，菌落由单个细菌(或其他微生物)细胞或少数同种细胞在适当的固体培养基的表面或内部生长，形成肉眼可见的子细胞群落。病毒的繁殖，即噬菌体感染细菌细胞，使宿主细胞融化死亡，形成在琼脂培养基表面的肉眼可见的透明小圆形斑点(“负菌落”)。在适当的条件下，噬菌体形成斑块。主题1微生物的实验室培养，1 .接种工具：接种针：直，大部分用于固体培养基穿刺接种。接种环：经常用于环，细菌和酵母的倾斜，平面接种。斜面，平板，接种针，钩，环，接种钩：多用于接种直接剂，真菌和放线菌。2 .涂布机：主要用于菌种的分离或微生物平板生菌数时涂敷。3 .吸管：0.1、0.2、0.5、1、5、10毫升等吸管通常用于液体接种和细菌悬浮系列稀释。4 .试管，培养皿，锥形瓶等，5。消毒、灭菌设备：酒精灯、干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅等。6 .无菌实验室、超净工作台等，一个、一个概念、微生物的分离、接种和培养工作中，意味着防止其他微生物污染的所有方法。是成功培育微生物的关键。灭菌技术，第二，范围，1。清洁和消毒实验工作空间、操作员服装和手。2 .灭菌培养基、接种机构、培养基等。3 .在酒井灯旁边工作，4 .灭菌材料与周围的东西分离。2.煮杀菌法在100 下煮5 6分钟左右，可以杀死微生物细胞和部分孢子。3 .化学药品消毒法，酒精消毒：细胞脱水，蛋白质变性。氯消毒：氯溶于水，形成盐酸和次氯酸，次氯释放新的生态氧气，杀死细胞。第三，消毒，灭菌，(a)消毒：比较温和，物理化学方法，一些有害细菌(不包括孢子)，1。巴氏杀菌法，在70 75下煮30分钟，或在85 下煮15分钟；杀死非孢子病原体，不要破坏材料味道。适合消毒牛奶、啤酒等。其他：汞、高锰酸钾、臭氧、甲酚肥皂、乙酸等。适合干热灭菌箱内160 170 1 2小时的耐高温性，需要干燥的物品(吸管、培养皿)和金属器具等。酒精灯火焰(200以上)燃烧，灭菌简单可靠。接种环，接种针，接种钩及其他金属仪器和试管口，三角瓶灭菌，1。燃烧灭菌，2。干燥炎热的灭菌，(2)灭菌：杀死所有微生物(包括孢子和孢子)的强大物理化学方法，4。紫外线(260nm)消毒方法，抑制DNA复制；产生臭氧辅助杀菌。适用于空气和物体表面消毒或灭菌。4 .其他灭菌方法：紫外线、超声波、微波、化学药品灭菌等。3 .蒸压，100KPa，121，15 30分钟；加压旨在提高温度，达到灭菌目的。因此，灭菌锅的冷空气完全冷却后，应关闭锅继续加热。适合于培养基杀菌。附着：在实验室消毒及灭菌、接种室、接种箱、超净工作台上喷洒适量的石炭酸或煤酚皂溶液等消毒剂后30分钟用紫外线照射。高讨论的：1。为什么在高压蒸汽灭菌开始前排出灭菌锅的冷气？高压蒸汽灭菌前，高压蒸汽灭菌锅的冷不下沉，压力上升到100kPa时，锅里的温度没有上升到合适的高度，灭菌不完整。2.杀菌结束后，压力没有降到0，打开排气阀会发生什么现象？怎么了？压力没有降到零，打开排气阀，试管里的徽章就会从喷嘴里弹出来。蒸压锅内外压力不平衡，3 .接种工作为什么一定要在火焰旁进行？空气中存在很多微生物，可以在接种灯的火焰旁边形成灭菌区域，在这里工作，可以避免杂菌污染，例如消毒灭菌是两个不同的概念，然后应用于消毒处理，(皮肤饮用水，)皮肤饮用水，(牛奶注射器接种环培养基手术刀a .b .b .，(b)氮源，无机氮源：有机氮源：N2，NH4，NH3，NO3-等，牛肉奶油，蛋白胨，酵母奶油，尿素等，培养基，1，概念：类型：KH2PO4、K2HPO4、(NH4)2SO4、mgl 2、Ca(NO3)2、CaCl2、FeSO4等。营养素，生长和繁殖，2 .功能，(1)参与酶的组成；(2)调节和保持细胞的渗透压。(3)平衡PH。(d)水，(1)参与物质运输的良好溶剂；(2)参与细胞内的一系列化学反应。(3)酶催化介质。(5)生长因子，1。概念：不能自行合成或合成微生物生长所需的微量有机物。2 .角色：酶和核酸的组成部分，3。类型：4。资料来源：维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶、酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取物等，注1:滋养微生物和一些从属营养微生物(如大肠杆菌)无需外源生长因子就能生长。2:在不知道微生物生长所需生长因子的本质的情况下，向培养基中添加很多天然物质，如酵母提取物、牛肉膏、动植物组织萃取物。附注3:最常用的碳源是碳水化合物，尤其是葡萄糖。注4:最常用的氮源是铵盐、硝酸盐。注5:含c、h、o、n的有机物为从属营养微生物的碳源，氮源，能量，3，种类(a)物理性质，1.5%-2.5%，0.2%-0.7%基本培养基，(1)成分：一般微生物生长和繁殖所需的基本物质，(2)一般类型：牛肉奶油蛋白胨培养基(20.0克琼脂)，相应的特殊营养素或化学物质，特定微生物的特殊营养要求或对特定物质的敏感度，根据微生物的代谢产物和对特殊化学物质的特定反应，产生明确的特性变化。，从无数微生物中分离所需的微生物，鉴定各种微生物，添加青霉素酵母和真菌分离氮缺乏培养基，固氮菌高浓度盐培养基分离无碳培养基分离滋养微生物，鉴定二红和梅兰培养基，鉴定大肠杆菌刚果红培养基鉴定纤维素分解菌，4，制备牛肉奶油蛋白胨固体培养基，1计算：使用100毫升培养基所需的各成分。2 .计量：玻璃棒在计量纸上选择牛肉霜。3 .融化：注：牛肉奶油，蛋白胨容易吸收水分，快，拍。取牛肉奶油、计量纸、少量水的烧杯加热溶解纸蛋白胨，NaCl混合溶解冷却pH琼脂混合熔化100毫升补充，牛肉奶油也粘在计量纸上，牛肉奶油也溶于水，减少错误，杯子因琼脂糊底部破裂灭菌：在培养基上放锥形瓶、棉签，包裹牛皮纸，高压蒸汽灭菌；培养皿用5-8包放在干燥、热的灭菌箱中灭菌。5 .背板，培养基冷却到50 左右时燃烧灭菌，用左手拔面插头，倒入培养基盖子，冷却颠倒，6。灭菌检查：37 反向培养24 48h，观察是否有微生物生长。防止污染和挥发，灭菌时避免水蒸气的棉箔，去除培养基时也起到阻止空气中杂菌的作用融化时牛肉奶油和计量纸一起加热的原因是什么？添加琼脂的目的是什么？为什么用玻璃棒搅拌？杀菌前用牛皮纸、旧报纸包好装有徽章的锥虫病的目的是什么？培养皿可以用高压蒸汽灭菌吗？附着在计量纸上的牛肉奶油也可溶于水，用作混凝剂以减少误差；防止琼脂糊底部导致烧杯破裂。杀菌时可以避免水蒸气凝结时弄湿棉签，去除培养基锥虫病时也起到防止空气中杂菌污染的作用。因为培养皿要干燥，就必须干燥，干燥，干燥，灭菌。讨论问题，答：用手摸锥子瓶的时候，感觉手很快就不热了。2 .为什么要让锥形瓶的瓶盖通过火焰？答：燃烧杀菌，防止瓶口的微生物污染培养基。讨论问题，1 .灭菌培养基后，冷却到50 ，才能倒入板。你用什么方法估计徽章的温度？3 .平板凝结后，为什么板颠倒？答：可以防止培养基表面的水分过多挥发，也可以防止碟子盖上的水滴落入培养基中，影响微生物生长。4 .在倒盘子的过程中，如果不小心在盘子盖和盘子底之间炸了徽章，还可以用这个盘子培养微生物吗？怎么了？a:最好不要使用。因为空气中的微生物可以在这里繁殖。大肠杆菌的纯化，最常用的平面划线和稀释涂层板方法，第一，平面划线：微生物接种技术包括倾斜免疫、穿刺免疫等。技术和操作方法各不相同，但其核心是防止细菌污染，确保培养物的纯度。一、平面划线：问题讨论，一，工作的第一阶段，以及为什么在每次划线前燃烧疫苗？划线工作结束时需要接种疫苗吗？怎么了？第一阶段燃烧的接种环杀死微生物污染培养物，最后剩下的菌种，下一次标记时，为了确保菌株直接来自上次划线结束，增加划线次数，从而逐渐减少每个划线时的菌种数量，以获得殖民地。及时杀死接种戒指上残留的菌株，避免细菌污染环境或感染者。2、消防接种后，为什么冷却后再刮？杀死菌株，以免接种环温度太高。，问题讨论，3 .进行第二个和下一个线条处理时，为什么总是从上一个线条处理的终点开始进行线条处理？划线后，线末端的细菌数量比线的起点少，每次从线的终点开始，细菌数量逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖的群体。刮的话，可以创造难以达到单个集落分离目的的不均匀的线；贝齐留下的单个细胞不能形成一定的群体，菌落沿着刮伤的地方生长，形成带状的群体。4 .为什么在平板划线过程中不能刮胸章？例如：与平扫相关的正确操作需要火焰灭菌才能打开带有()a .菌株的试管。如果取出菌株，就需要立即棉塞。b .无菌接种环，培养皿，运行中不再灭菌c .最后将板倒放，放入孵化器，培养d。将沾有菌种的接种环快速展开到板上，画出3-5条平行线，放入C，6个试管，每个9毫升无菌数，101，102即可。103，104，105，106，1，拔模稀释菌液：细菌，微型吸管，2，稀释涂层板法：浸泡，0.1毫升以下，每个拔模分别涂3个板，1个未涂为空白对照组，滴，少作， 在平扫和稀释涂层平板接种大肠杆菌工作中，在相同情况下():使用相同培养基接种针稀释接种细菌液后，接种可用于计算活性细菌标准的相同原理火焰旁接种a .b .c .d .涂膜板的所有工作都在火焰附近进行。 想一想，除了平板划线和系列稀释无菌操作要求外，第二阶段如何进行灭菌操作。工作的所有细节都要保证“无菌”。例如，酒井灯和培养皿之间的距离要适当，吸管头不能接触其他物体，吸管必须在酒井灯的周围。c，讨论问题，培养12h及24h后大肠杆菌群大小可能有显着差异1，培养基是否适合生产，未接种的培养基在孵化器中1 2d保温后，如果培养基不生长，说明培养基制造成功，否则应重新制造。2，接种工作是否是无菌要求，如果在培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，符合大肠杆菌菌落的特性，接种工作就是要求；如果介质出现其他殖民地