日立l-8900氨基酸自动分析仪VIP

日立L-8900氨基酸自动分析装置，内容氨基酸相关内容介绍了氨基酸分析装置的发展和制造商氨基酸分析装置的原理及相关部件样品制造中常见故障的分析和处理保养，氨基酸相关内容介绍了氨基酸(aminoacid ) :含有氨基酸和羧基的有机化合物的通称。 是生物功能大分子蛋白质的基本构成单元，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。 包含碱性氨基酸和酸性羧基的有机化合物氨基酸附着在-碳上，由-氨基酸构成的蛋白质氨基酸全部为-氨基酸，构成蛋白质的20种氨基酸除甘氨酸外，都具有非对称的碳原子，即-碳原子。 -碳原子有羧基、氨基、氢原子、r基这4个不同的取代基，氨基酸的r基不同。 各自的氨基酸有D-配置和L-配置，天然蛋白质中的氨基酸都是L-配置。 广泛存在于食品、药品、水产品、饲料和体液(血液、尿样)，氨基酸受溶液pH的影响，在一种pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的倾向和程度相等，形成两性离子，成为电中性时，溶液的pH成为该氨基酸的等电点。 不同的氨基酸等电点丙氨酸Ala(A)6.02精氨酸Arg(R)10.76天冬氨酸Asn(N)5.41天冬氨酸Asp(D)2.98半胱氨酸Cys(C)5.02谷氨酸Glu(E)3.22谷氨酰胺Gln (o 7.58亮氨酸Leu(L)5.98赖氨酸Lys( K)9.74蛋氨酸Met(M)5.75苯基丙氨酸Phe(F)5.48脯氨酸Pro(P)6.30丝氨酸Ser(S)5.68苏氨酸Thr(T)6.53色氨酸5.97异亮氨酸Ile(I)6.02、氨基酸的化学性质、氨基酸分子中有氨基和羧基，因此它们会发生脂肪化、甲基化、乙酰化、酸碱的中和作用等氨基和羧基的一般反应。 氨基酸中，也有半胱氨酸的巯基(-SH )、吲哚醇反应、吲哚醇溶液和氨基酸共热，生成氨的物质。 氨与吲哚和还原性吲哚反应，生成紫色化合物。 该化合物的颜色浓淡与氨基酸的含量成比例，通过测定570nm下的光密度，可以测定氨基酸的含量。 离子交换法分离分析氨基酸的原理是，根据氨基酸为两性电解质的特性，以及目的氨基酸和杂质氨基酸pK、pI的值的差异，利用离子交换树脂分离纯化各种氨基酸吸附能力的差异。 氨基酸分析仪进入国内市场已有近三十年的历史，是一种用于测定蛋白质水解液(水解氨基酸)和生理体液(游离氨基酸)氨基酸含量的专用仪器，目前广泛应用于各行业。 与其他分析仪器的不同之处在于只能检测氨基酸，不能作为他使用，具有特异性。 1958年stein和moore两人独立发明了离子交换分离、吲哚醇柱后氨基酸自动分析器。 根据阳离子交换柱分离、柱后吲哚衍生物、光度法测定的离子交换色谱(IEC )，1972年stein和moore均获得诺贝尔奖。 IEC是现在的国际标准和国家标准以及仲裁和干涉外的方法。 二氨基酸分析器的发展和生产厂家，氨基酸分析器的生产厂家和常见型号，日立氨基酸分析器的发展历史，三氨基酸分析器的原理和相应零件，氨基酸分析器的基本分析原理：各蛋白质20种氨基酸首尾相连，按一定顺序构成肽链。 用水解法打开肽链，形成单一氨基酸进行分析。 所有氨基酸在低pH条件下均带正电荷，被阳离子交换树脂吸附，但吸附程度不同，碱性氨基酸结合力最强，其次是芳香族氨基酸、中性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。按照氨基酸分析仪设定的洗脱程序，用不同的离子强度、pH的缓冲液，按吸附力的不同依次洗脱氨基酸(先是酸性氨基酸、中性氨基酸，最后是碱性氨基酸)，使洗脱出的氨基酸和吲哚醇反应液在加热下反应(135度)，用分光光度计使其与570nm 1 .氨基酸在pH2.2的条件下带正电荷，吸附在阳离子交换树脂上，但结合强度各不相同。 2 .随着缓冲液在离子交换柱中流动，氨基酸不断地被吸附、解吸。 根据氨基酸性质的差异(酸碱性、极性、分子大小)，吸附强度也有差异。 3 .不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸芳香族氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸及羟基氨基酸。 4 .提高流动相的pH值，氨基酸的正电荷会减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱中溶出，溶出顺序为具有酸性和羟基的氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。 5 .氨基酸标准溶液中各种氨基酸用氨基酸自动分析仪溶出的顺序一定，标准液中各种氨基酸的浓度一定，溶出峰的面积一定，可以计算样品中各种氨基酸的含量。 氨基酸分析器的洗脱过程通常细分为蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统)，使用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。 其中，钠盐系统一次分析最多约25种氨基酸，速度快，基线直线度好的锂盐系统一次分析最多约50种氨基酸，速度慢，基线一般比钠盐系统好。 离子交换树脂、专用氨基酸分析仪柱主要以磺酸型强酸性阳离子交换树脂为柱填料。 强酸型阳离子交换树脂是苯乙烯和二乙烯基苯聚合而成的。 该树脂是苯乙烯和乙烯基本聚合磺化而成的，球状树脂的粒度一般在5-10m之间，交联度多为8%-12%。 交联度大，树脂的网状结构密集，空隙率小，具有阻碍外界离子进入树脂的作用，通过大的离子不进入树脂内部，可以提高树脂对离子的选择性。 交联度大的适合分子量小的氨基酸分离的交联度小，树脂结构稀疏，空隙率大，适合蛋白质、肽类的分离。 L-8900氨基酸分析仪的内部结构，日立L-8900氨基酸分析仪的组成，日立L-8900氨基酸分析仪的分析原理，1 .样品中的氨基酸在低pH下具有正电荷，虽然被阳离子交换树脂吸附，但吸附程度不同，碱性氨基酸结合力最强2 .按照氨基酸分析仪设定的溶出步骤，用不同的离子强度、pH的缓冲液按吸附力的不同依次溶出氨基酸。 3 .分离出的氨基酸和吲哚醇试剂在高温反应器中进行诱导反应，生成能用分光光度计检测的有色物质，用检测器检测。 日立L-8900氨基酸分析器的流程图，分析例：啤酒酵母，事例分析：炸猪排，事例分析：正常血清，事例分析：丙酮尿症血清，事例分析：苹果汁，L-8900氨基酸分析器的性能指标，蛋白质水解液的标准分析方法例：纯分析时间：30分检测界限：3p n=2天冬氨酸)保存时间再现性： UUR0.3 %峰面积再现性： 1.0% (甘氨酸、组氨酸)，氨基酸分析器的特点，1 .敏锐、快速、提供数据准确、分辨率高、操作简单、分析周期短(水解30分钟，体液110分钟)。 2 .保持时间、峰面积、再现性好，检测极限达到3pmol。 3 .没有液相法生成二次衍生物的问题。4 .峰形呈高斯分布，系统稳定快(30分钟即可)，氨基酸分析仪根据其分离和测定方法的不同分为两种类型，第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后人参醇诱导光度法测定的经典方法(IEC )。 第二类均为反向色谱分离、柱前诱导、基于荧光或紫外检测的高效液相色谱(HPLC )和阴离子交换分离直接安培法的离子色谱(IE )。 氨基酸分析法与HPLC法相比，近年来常见的检测氨基酸液相的方法不少。 在此，将几种常用的方法与氨基酸分析法进行比较： (1)opa法(邻苯二甲醛)(反应机理稍微不足：要进行全分析，必须与其他技术一起使用。 赖氨酸及胱氨酸衍生物荧光弱，灵敏度低。 由于OPA是一种快速的反应剂，氨基酸反应及其不稳定，特别是甘氨酸、赖氨酸衍生物的信号衰减很快，一天的变化很大。 资料显示，该方法的变异系数CV%一般为5%左右，个别氨基酸，例如组氨酸达9%左右，特别是不适合含盐分的饲料氨基酸类样品，在样品中，盐分直接影响而被诱导(紫外发基线差)。 (二) PITC法(异硫氰酸酯)(反应机理略)该方法的再现性明显低于壬醇法，最大的缺点是，1成分诱导后能生成2个以上的衍生物。 另外，与其他成分的峰值重叠，灵敏度低。 由于有残留的衍生物，柱效应和柱寿命迅速下降(200样品左右)，变异系数在4%左右，各个氨基酸，例如组氨酸达到8%，部分氨基酸在24小时内分解。 (三) D-CL法(单宁)反应比较简单，以mol/L的比例，在室温、遮光条件下在短时间内完成反应。 缺点：衍生物对紫外敏感，反应必须避开光进行，能准确测定赖氨酸、组氨酸和半胱氨酸生成二次衍生物的影响。 (四) 2，4 -二硝基氟苯法是较常见的液相测定法，最大缺点是诱导剂峰值大，对柱子危害大。 当组氨酸分离差，组氨酸的二次衍生物与丝氨酸重叠，另一个峰的柱效应降低时，完全溶解于先前的苯丙烯峰，直接影响定量，时间变化大。 用于氨基酸分析装置和HPLC的常规比较、四种样品的制备、1 .蛋白质的水解2 .游离氨基酸样品的制备、全氨基酸测定的样品，作为蛋白质存在的都进行水解处理，水解方法为1 .酸水解法：标准水解法，一般采用的水解方法， 在水解过程中采用6N盐酸作为水解剂的方法，水解彻底，水解的氨基酸全部以l型存在，但色氨酸被破坏。 (6NHCL，110真空水解24小时)优点： HCL本身的加热可以蒸发去除。 缺点：溶液呈黑褐色，与含醛基的化合物作用的结果。 提示：盐酸中的重金属作为接触剂破坏氨基酸，因此要求高纯度的盐酸水解样品。 蛋白质水解，2 .碱水溶液解法：使用2.5NNaOH (氢氧化锂)作为水解剂，色氨酸不被破坏，但具有外消旋作用，丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸在某种程度上被破坏(水解时20小时)的优点：水解液提示：只为了测定蛋白质中色氨酸的含量，采用此水解方法。 3 .酶水解法：酶是有机催化剂，不需要高温高压，常温常压下能催化有机物质的合成和分解。 优点：水解条件温和，不需要特殊设备，氨基酸不被破坏，产物中除了氨基酸以外还有多肽类。 目前没有一种酶能完全水解蛋白质。 将酶法与酸法进行比较必须考虑酶试剂的种类、量、温度、pH等因素。 该方法主要用于水解蛋白和蛋白肽的生产。缺点：水解时间长，且水解不完全。 提示：不能采用这个方法作为氨基酸的全分析。 目前，日本、欧洲和中国植物蛋白质水解生产中采用的技术都是酸水解法，4 .微波分解法：微波分解技术在近年来化学领域，特别是氨基酸样品的预处理中显示了良好的应用前景。 微波水解条件：体积30ml左右的高强度，耐腐蚀和微波透过容器，水解温度150-160，水解时间30分钟。 优点：水解时间短，适合大量样品预处理。 (该方法有待同行批准和实验比较数据论证)，游离氨基酸样品的制备，游离氨基酸样品在分析前要进行磨碎、脱脂、提取、脱盐、脱蛋白、脱色等处理。 建议在进行分析之前使用C18过滤器列。 生理体液样品的处理，生理体液样品首先去除样品中的蛋白质，得到游离氨基酸。 去除蛋白质的化学方法有：1.苦味酸法2 .三氯乙酸法3 .乙醇沉淀法4 .磺基水杨酸法，影响氨基酸分析的各种因素；(1)样品中氨基酸浓度的影响；(2)缓冲液的pH值、钠离子浓度的影响；(3)柱温度氧气存在的影响(6)光源的影响(钨丝灯)，(1)样品中氨基酸浓度的影响，每个测定器都有比较合适的样品量，样品浓度有一定的范围，本测定器对样品的样品量要求的浓度太大而不合适，特别是高浓度的样品最好在取样分析前将样品稀释到比较适当的浓度(0.02-1mmol/L )。 (2)缓冲液的pH值、钠离子浓度的影响、色谱中各种氨基酸的分离特别好，峰值没有丢失，缓冲液的pH值和钠离子起着重要的作用。 日立氨基酸分析仪的说明书中明确规定了所使用的缓冲液的成分和配方，必须严格按照其要求进行调制。 特别是pH和钠离子浓度不适当时，氨基酸会发生峰会延迟和重叠现象。 (根据需要，可以以异常图为最佳原则，根据情况进行调整)，(3)柱温度的影响，各种型号的氨基酸分析仪有各种柱温度的要求，操作上，柱温度达到规定的温度基线后，可以进行样品的正常分析。 否则，基线漂移会影响分离效果和正确的定量。 日立氨基酸分析仪的柱温度为57，柱温度提高几度，各种氨基酸的溶出速度就变快，难以分离的氨基酸就不能分离，分离度差。 如果降低柱的温度几度，氨基酸的溶出速度就会变慢，柱的压力变高，峰的形状变得不干净，发生峰的变形不完全的现象，分析时间变长。 柱温度影响较大的氨基酸有蛋氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸等。 (4)氨的影响、缓冲液、样品、流路系统中混入氨的情况下，使基线在碱性氨基酸的峰值上升，对碱性氨基酸的分离效果和正确的定量产生影响。 氨的主要原因是离子水的生产过程中混入的，试剂等级差也可能含有微量氨。 分析中pH值低时氨吸附在树脂上，随着缓冲液的pH值的提高而溶出，苯丙氨酸后碱性氨基酸部分会抬起基线，对赖氨酸、组氨酸、精氨酸的分离定量产生一定的影响。 为了解决该问题，日立氨基酸分析仪将选择性地吸附氨的2650树脂放入除氨柱中，使氨吸附，为了在分析中不溶出，吸附在除氨柱上的氨在分析中用B5 (再生液)再生分离柱时(5)氧的存在的影响、日立氨基酸分析仪的缓冲液、反应液、再生液等容器的液面充满了氮，这些试剂与空气隔绝，最重要的是反应液中的吲哚醇最讨厌氧，因为吲哚醇氧化会变质，所以购买了吲哚醇后很重要缓冲液中的溶解氧也影响了茚三酮的显色效果。 在配置茚三酮试剂时，要注意有足够时间的氮气流动以排除氧，另外试剂表