志贺氏菌检验.ppt

志贺氏菌检查，1。流行病学简介，一种古老的肠道感染性腹泻。19世纪，世界范围内爆发了细菌性痢疾。1899年，日本志贺氏菌首次发现细菌性痢疾是由志贺氏菌引起的。第一次世界大战期间(1914-1918年)，德国约有40，000人死于痢疾，进一步证实志贺氏菌是细菌性痢疾流行的病原体。多年来，细菌性痢疾一直是我国夏秋季最常见的肠道传染病。近年来，非洲和中美洲痢疾志贺氏菌的死亡率据报道为5%-15%。中国是一个发展中国家。尽管人们的生活水平不断提高，但由于卫生知识普及不够，部分地区食品卫生管理和监督不力，志贺菌感染在我国传染病中一直处于较高的地位。每年都有志贺氏菌感染暴发的报告，每次暴发的病例数从数万到数千不等。其中大部分是由食物和饮用水污染造成的。1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起食物中毒事故，26所小学的1345人在课间休息时被学生喝的豆浆毒死。经调查，该食物中毒是由志贺氏菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的。疫情传播范围广，病例多，在我国历史上相当罕见。志贺氏菌是高致病性的，少量的细菌就能引起这种疾病。疾病是否发生取决于细菌的数量、致病性(粘附、入侵、毒素)和人体的抵抗力。各种志贺氏菌都能产生强内毒素，这是引起全身毒血症的主要因素。志贺氏菌也能产生外毒素(志贺毒素)，它具有神经毒性、细胞毒性和肠毒性作用，并能引起更严重的临床表现，如溶血性尿毒综合征。2，生物学特性，(1)，形态和染色革兰氏阴性短杆菌，无荚膜，无孢子，无鞭毛2 3 m0.5 0.7 m，(2)，培养特性，1，需氧或兼性厌氧，最适温度37，PH7.27.42，圆形，稍凸，光滑湿润，无色半透明，边缘整齐，中型菌落3，宋内志贺氏菌菌落较大，不透明，粗糙扁平，乳糖发酵可在SS平板4上延迟。在肉汤中均匀混浊和无菌生长。(3)、生化反应，1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋内志贺氏菌外，不发酵乳糖。2.阿多尼斯酒精、肌醇和水杨苷不发酵。3.不产生H2S，尿素不分解，伏安测试为阴性，柠檬酸盐不能使用。4.甲基红阳性。(4)抗原结构，1。抗原组成：o抗原：组特异性抗原：a，b，c，DK抗原：除b组外，一般有k抗原，2。志贺氏菌亚群和血清型。志贺氏菌分为四组：a组(痢疾志贺氏菌):b组(福氏志贺氏菌):1-6 x和y变异体，c组(鲍氏志贺氏菌):d组(宋内志贺氏菌):1型。(3)志贺氏菌检验GB4789.5-2012，1。在原国家标准的基础上，保持原标准的连续性，考虑基层单位方法的可操作性，尽可能简化细菌富集步骤和培养条件；在生化反应方面，也尽可能使用原标准中的方法。2.符合国际标准的原则。本标准的起草内容主要参照国际标准组织的国际标准化组织标准。一些参考文献使用了美国食品和药物管理局、美国国家医学实验室和其他美国标准。3.指已出版的2008年版国家标准与已出版的新版国家标准相协调，在样品前处理步骤、培养条件选择、文字描述等方面尽可能保持一致。GB/T4789.5-2003标准缺陷，1。GN增菌液，在37好氧培养4小时后，大肠杆菌的生长速度远快于志贺氏菌，检测效果差2。所用的分离板SS对志贺氏菌1 3型有抑制作用。检测方法不同于其他国家的现行标准，富集：用GN富集液恢复垂死细菌的活力，选择性平板分离培养：XLD培养基/显色培养基，生化试验：可使用API20E或VITEK2，血清学鉴定：特异性诊断血清被鉴定、和、和、志贺氏菌操作流程、修改内容、部分志贺氏菌增菌液(新霉素0.5g/mL)原国家标准：GNISO:志贺氏菌增菌液(新霉素0.5g/mL)FDA:志贺氏菌增菌液(新霉素0.5g/mL和3g/mL)NMKL:志贺氏菌增菌液(新霉素0.5g/mL)，培养条件：41.51厌氧培养原国家标准：37好氧培养iso: 41.5厌氧(1)富集培养，用志贺氏菌富集液富集，41.5和1厌氧培养16-20小时，智能厌氧微需氧培养系统，(2)分离培养，富集后取GN富集液或志贺氏菌富集液，分别划线接种于XLD琼脂平板、麦克琼脂平板或射频志贺氏菌显色培养基平板，36和1培养20-24小时如果菌落形态不典型或菌落小且难以观察，继续培养至48小时观察。菌落特征，MAC琼脂：无色至淡粉色，半透明，光滑，湿润，圆形，边缘整齐或不规则，直径2 3 mm的XLD琼脂：粉红色至无色，半透明，光滑，湿润，圆形，边缘整齐或不规则，直径1 2 mm，RF志贺氏菌显色琼脂：白色，不透明，圆形，边缘不规则，直径1 mm 3 mm，菌落周围琼脂颜色变为紫红色，呈阳性，1宋内氏典型菌落， XLD，2个福勒典型菌落，志贤，XLD，XLD，3个鲍氏典型菌落，志贤，XLD，4个痢疾典型菌落，志贤，5个熟肉制品在宋内的分离效果，射频志贤，XLD，志贤，6个蔬菜在宋内的分离效果，志贤，7个鲍氏分离效果在生肉，8个熟肉制品在傅的分离效果，志贤，(4)初步生化，在平板上选择5个以上可疑菌落，接种TSI，葡萄糖半固体和营养琼脂斜面培养中的下列条件可以放弃：a .在三糖铁琼脂斜面上铺展和生长；发酵乳糖或蔗糖；c .不分解葡萄糖，d .仅在半固体表面产生气体；e .产生硫化氢；f .创造充满活力的文化；初步生化：三糖铁；志贺氏菌能分解葡萄糖，产生酸而不产生气体；大多数不发酵乳糖，也不生产H2S。如管2的反应所示，四组志贺氏菌的生化特征与志贺氏菌相似，并且由于额外的生化实验，可以与一些志贺氏菌血清型血清凝集。因此，在以前的生化实验(36培养24h48h)中，应在符合志贺氏菌生化特性的培养物中加入氨基葡萄糖、柠檬酸西蒙酯和粘液酸。志贺氏菌、非活性大肠杆菌和A-D细菌的生化特征如表3所示。(5)生化鉴定，用API20E诊断试剂条和自动细菌生化鉴定仪VITEK添加。(6)血清学鉴定。1.抗原制备志贺氏菌没有动力，所以它没有鞭毛抗原。抗原结构和分型：志贺菌的抗原结构由细胞抗原(O)和表面抗原(K)组成。o抗原是糖脂蛋白复合物，可分为类型特异性抗原和群体特异性抗原。志贺氏菌分为4组48种血清型(包括亚型和变种)。k抗原在志贺氏菌分类中没有意义。细胞(0)抗原1型特异性抗原：其化学成分为多糖，是光滑菌株中含有的一种重要抗原。当菌株变得粗糙时，这种抗原通常会消失。根据所含抗原类型的不同，志贺氏菌可分为甲、乙、丙、丁四组，共39种抗原类型。2.群体特异性抗原：它是光滑菌株的次级抗原，也是一种细菌抗原。特异性低，主要存在于b群。根据不同的群抗原，某些细菌类型可分为许多亚型。表面抗原(K抗原)在一些新分离菌株的表面上含有该抗原。它不耐热，加热到1001小时后会被破坏。具有这种抗原的菌株可以防止细菌抗原和相应的免疫血清之间的凝集。，2。凝集反应，3。血清分型(作为一个项目选择)。首先用四种志贺菌多价血清进行检测。如果出现凝集，则相应的多价血清组用于单独的试验。首先，用福氏志贺菌B组多价血清进行实验。如果出现凝集反应，则分别用乙组福氏志贺菌多价血清和型因子血清进行检测。福氏志贺氏菌各种类型和亚型的类型抗原和群抗原的鉴定见表4。如果B组多价血清不凝集，则使用D组宋内志贺氏菌血清进行实验。如果出现凝集，则使用一期和二期血清进行检查。如果b组和d组多价血清不凝集，则使用a组痢疾志贺氏菌多价血清和1 12型因子血清进行检测。如果上述三种多价血清不凝集，可采用c组鲍氏志贺氏菌多价检查，而1 18型因子血清则进一步用于检查。志贺氏菌O抗原，人们最初的理解是血清学试验是特异性的，但志贺氏菌O抗原与大肠杆菌密切相关，一半的细菌类型与大肠杆菌某些O抗原完全相同。同一抗原细菌之间存在血清交叉凝集。因此，生化试验对属的鉴定非常重要。志贺氏菌的O抗原与大肠杆菌的关系，O抗原完全相同：志贺氏菌、大肠杆菌、志贺氏菌、大肠杆菌A2具有相同的O抗原部分。112 ca11，120.A3 .124a2149a435