肺炎链球菌研究现况及血清分型PPT课件

.1，肺炎链球菌病及防治，袁小良2014-3-24，2，肺炎球菌病病原学及流行病学肺炎球菌病诊断和治疗方法及耐药机制肺炎球菌疫苗和接种，内容。3，呼吸道感染室，4，细菌实验室工作内容，病因学：取样、运输、培养、分离、鉴定、打字、抗生素耐药检测免疫学保存：血清、免疫效果评价分子生物学测试：PCR检测、打字、聚类、遗传变异、进化分析、5，肺炎链球菌殖民地形态，肺炎链球菌在营养丰富的培养基上形成平坦、中部凹的典型菌落，某些细菌可能表示粘液型菌落。6、streptococcus pneumoniae、7，2。optio chin (op)敏感试验，optio chin，即乙基氢化敲门卟啉，在奎宁结构上也被称为乙基氢化羟奎宁。药物对肺炎链球菌的作用机制是阻碍叶酸的合成。奥托钦敏感试验方法药敏试验。选择皮试菌，贴在皮瓣上，贴上含有5g/片的optochin纸，将5-10%CO2大气(或蜡烛缸)孵化到35 ，熬夜。抑菌环直径=14mm敏感，推断为肺炎链球菌。抗菌环直径14mm参考胆汁溶出菌试验。肺炎链球菌抑制环直径总是超过20mm，溶血性链球菌(约98%)小于12mm。8、Streptococcuspneumoniae、9，10、肺炎链球菌(strptococcus pneumonae)、肺炎球菌(Pneumococcus)或肺炎双球菌。多性或短链排列，革兰染色阳性肺炎球菌主要抗原：胶囊多糖：疾病的主要基础和血清分型标准，90多个血清型致病性细菌抗原：c多糖，c反应蛋白和沉淀反应。m蛋白：特定蛋白质溶血(绿色溶血环)。Optochin敏感测试阳性。胆汁溶解试验：自溶酶、胆汁或脱氧胆酸盐激活自溶酶，加速细菌自溶。胆汁溶解试验呈阳性。与溶血性链球菌不同。11，肺炎球菌血清型，pcv 7333694，6b，9v，14，18c，19f，23fp hid 1033604，6b，9v，14，18c，19f110 f 18 b 28 a 402111 a 18c 28 f 41311 b 18 f 2941 f 411 c 19 a 3142511d 19b 32 a 436 a 11f 19 c 32 f 446 b 12a 19f 33 a 456 c 12 b 2033 b 467 a 12 f 21333 c 47 a 3322 a 47 f 7 c 1422、12、13，肺炎球菌的传播，5-72%的健康成人和27-58%健康儿童的鼻咽1种血清型，鼻咽内可能长期有肺炎球菌，1。pneumococal disease . CDC . pinkbook chappers(12 thedition，2011)可以通过频繁接触在人与人之间传播。感染，未感染，病例，携带者，14，肺炎球菌的致病机制，细菌附着和粘膜渗透，在细菌血液中生存，细菌通过血脑屏障，门因ingococcaldisease，nancye。Rosen stein，nengljmed，2001。15，中耳炎，鼻窦炎，支气管炎，肺炎，菌血症/败血症，脑膜炎，疾病严重度，X1000，X100，X10，患病率，侵袭性53 (3) :17-463。内省率(%)，25，中国肺炎链球菌耐药，青霉素耐药率2001年为42% 55%，上海：对PNC不敏感72.7%的儿童的耐药率高，MIC32mg/L菌株对红霉素等大部分上海地区53%，23.4%耐药，19.8%中度耐药，56.8%敏感性，26，肺炎链球菌对青霉素耐药的发展趋势，n=214 (2000)，n=564 (2004)，n=417 (2007)，12王辉等，中国结核病和呼吸地。2004年3月第27卷第3号。155-16011。王辉等。中国检验医学杂志。2007年11月11日。1242-1247页，耐药率(%)，(年)，PISP，PRSP，27、28、肺炎球菌耐药、多重耐药肺炎球菌抵抗、肺炎球菌抵抗增加等常见的多重结果：治疗失败时用昂贵的抗菌药物延长住院期间医疗费用增加，29、耐药性产生的原因、各种原因使用抗菌药物引起的选择性压力是诱发和加速耐药性的最大因素。选择不当的抗菌剂、剂量不足、治疗过程不足、药品质量下降等也可以诱发和加速耐药性、抗生素治疗、选择压力、肺炎球菌耐药性、往返、张永元主编。实用的抗感染治疗学，2004年版，30，31，收集细菌性呼吸道传染病标本，1，急性上呼吸道感染：鼻/咽拭子2，肺炎1)鼻咽拭子/鼻咽吸入：2)尿液：3)痰：4)血：5)胸腔穿刺液(3，脑膜炎1)脑脊液2)血液、肺炎症状、体征影像诊断应考虑病情的进展变化。病原微生物学诊断：呼吸道分泌物的分离和培养，受正常植物影响的侵袭性取样，工作风险，接受度的影响。32，鼻子/咽拭子，33，血液样本，充足的血液样本，在床前接种血培养瓶。成人：每样本10毫升，5毫升注射准备好的血液培养瓶。儿童：每次采集5.l，注入3mL准备的血液培养瓶血液培养瓶里长了细菌，培养皿也转动了。血清可检测PCR或RealtimePCR检测或抗体检测。建议：最好用碘伏消毒，用碘伏消毒，不要使用酒精碘。70%酒精消毒血液培养瓶橡皮擦塞，酒精作用1分钟；血液注入血液培养瓶之前，用无菌纱布或棉签去除橡皮塞表面残留的酒精，然后注入血液。防止皮肤寄生虫或环境微生物引起的污染。杆菌、芽孢杆菌、痤疮丙酸或凝固酶阴性葡萄球菌、抗冻菌等标本通常被认为是污染。34，脑脊液标本，没有增加的细菌，直接接种试验培养皿，快速检测(涂层染色，乳胶凝集检测)PCR和RealtimePCR检测，35、培养基及接种培养、普通培养基(皮瓣、巧克力平板)选择培养基、培养基质量控制、标本接种培养鼻咽棉缝制涂层培养基后，应进行细菌环划线接种。 36，药敏试验，最终确认为菌落特征，细菌形态，直接涂层革兰氏染色，确认试验，检查程序，血液平板，营养肉汤增菌，355%-10%CO2，18-24h，35，37，细菌鉴定，Gram染色，奥普托辛敏抗菌环14mm，胆汁溶解试验，接触酶试验，生化鉴定，肺炎球菌，嗜血杆菌。38，生物特性，主要生化反应optio chin测试：含有5 optochin纸35 ，将正在测试的细菌附着在涂层板上孵化一整夜，抑菌圈大于14毫米，敏感。39，血清分型(组)-幻灯片凝集结果和解释，细菌与抗血清凝聚，只有生理盐水不凝聚的情况下，才能确认这种血清类型。如果不能确定血清群，菌株就会成为需要分离的菌株(NG)或不可分离的菌株(NT)。关于NG/NT菌株在生理盐水中凝集，即使有抗血清和强烈反应，也应标记为自体凝血细菌。生理盐水中没有自我凝固，在多个血清中凝聚的是NG。不在生理盐水中自行凝固，不与任何血清凝集，写为NG。分型血清质量控制，40，乳胶工具包，将乳胶悬浮液滴在检测对象标本上，搅拌，摇晃反应，观察结果，检测对象标本掉落，乳胶凝集的快速检测，41，细菌耐药性检测(1)，K-B纸扩散法：支付最低的费用，但有一定的不确定性，将被检查的菌株分为敏感性、中介、耐药性或对特定抗生素的不鉴定。但是不能反映对抗生素的MIC值以及对该菌株的敏感度的减弱趋势。，16mm，6mm，CLSI或CA-SFM标准比较(确保质量控制菌株的结果在质量控制范围内)，影响因素：MIC，接种率，细菌增长率，抗生素含量扩散性，盘子厚度，温度培养时间，42，细菌耐药性检测(2)，梯度测试条法：操作简单，连续梯度浓度，稳定性好，测试结果可以用g/ml表示，是半定量测试方法。价格高，要慎重阅读结果。43，细菌耐药性检测(3)，MIC肉汤稀释法，MIC琼脂稀释法，同时检测多种菌，观察细菌生长等板工作量准备，抗生素要求准确度高。44，microccusletusatcc 9341 penicilling，70.25 u43mm 80.13 u38mm 90.06 u35mm 100.03 u，45，肺炎链球菌识别流程图，46、肺炎链球菌鉴定试验，溶血，胃蛋白酶试验，胶囊水肿，胆汁溶解。47，传统卡氏基肺炎球菌血清分型(组):多克隆/单克隆抗体，胶囊膨胀(金标准)，肺炎链球菌丹麦血清棋盘分类方法，1。菌株依赖性2。高3。技术操作要求高4。不同血清间交叉反应5。结果解释主体性，48，高灵敏度，特异性，交叉克服经济实用性：高吞吐量，降低对传统血清打字的依赖，程序可调整：通过一次实验，可以同时完成多个反应，血蓝型高吞吐量，根据该地区流行血清型式的组合的非培养依赖性：在标本中直接检测肺链和血清型操作的简单结果，科学、客观、新的特异性分诊发表，以及，49、Staphylococcus aureus PCR和RealtimePCR测定的靶标基因：lytA基因(self-lysin) ply基因(肺炎球菌)在检测上呼吸道标本时容易产生假阳性结果，streptococcusPsaA基因(肺炎球菌表面粘附)。肺炎链球菌利用溶酶体和赖氨酸进行消化，去除细胞壁上大量的肽聚糖，然后进行消化分解，有助于提高DNA的含量。50，目前在非洲使用最广泛的血清型肺炎链球菌PCR血清分型计划基础*反应2为6A/6B/6C/6DPCR阳性，基于目前在美国使用最广泛的肺炎链球菌PCR血清分型计划，51、肺炎球菌疾病监测PCR检查注意事项，病例对RealtimePCR敏感度高，一般用于珍贵标本中细菌的检测和分型，不宜常规用于细菌分离培养物的分型。PCR分析法一般不检查所有血清，根据流行血清群或罕见血清群的地理分布，选择一般血清群检查，一般应集中调查当地流行的血清群(型)。肺炎链球菌，Ct30可用作传统PCR方法，Ct值为30时，realtimePCR方法可用于血清打字，提高敏感性。，52，菌种保存和运输，兔子血：抗生素对赤麻血：含有抗生素的牛奶：含有抗生素，需要专业配方奶粉的菌种保存管：禁止冻融重复，53，预防策略，接种肺炎球菌疫苗是减少肺炎球菌感染严重危险的最佳预防措施.对抗生素的抗药性.who推荐多价肺炎球菌多糖菌2岁以上的危险群，65岁以上健康老人，特别是生活在公共机构的老年人慢性呼吸系统疾病，糖尿病，肾病综合征，以及在某些免疫功能缺陷的患者，特别是在功能性或解剖学上没有脾脏的人，WHO认为“肺炎球菌病是儿童和性中负担，因此在发展中国家，肺炎球菌病的预防是优先的”83(oct 7):33-84 . www . who . int/wer/2008/wer 8342 . pdf，54，制定肺炎球菌疫苗接种指南的机构，世界卫生组织(国际)- WHO免疫咨询委员会(美国)- ACIP加拿大医学会英国卫生部国家卫生医学研究委员会(澳大利亚)中国医学会呼吸会(世界卫生组织，weeklyepidemiologilogilogilogilogis)78(14):17-120；疾病预防和控制中心，MMWR.199746(RR-08):124；国家免疫咨询委员会，加拿大2002年免疫指南；英国卫生部2005年针对老年人和高危人群的肺炎球菌疫苗后续程序；澳大利亚国立卫生医学研究委员会，theaustralia nimmunisation handbook，8 thedition，2003。世界20多个国家的保健机构提供肺炎球菌多糖疫苗。55，肺炎球菌疫苗开发