基因工程及其应用 1

、EcoR，粘性末端，Sma，有，有，某生物的部分基因，某生物的全部基因， 部分基因是好的基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)的比较、补充：基因的结构，(1)原核生物基因结构、编码区、非编码区、非编码区、编码区上游、编码区下游、编码蛋白质、基因信息的表达终结者aatgtgcacgtagttagttacacgtgcatcaatc，编码区，非编码区，启动者，终结者，atgtgcacgtagtta，ta 没有启动子，基因就不能转录。 RNA聚合酶：识别启动子上的结合位点，结合的蛋白质终结子：基因末端的特殊DNA片段阻碍RNA聚合酶的移动，使其脱离DNA模型链，停止转录。 无法转录到信使RNA上，无法编码蛋白质序列。可以转录适当的信使RNA，编码蛋白质序列。 编码区、非编码区、原核细胞的基因结构、是调节遗传信息表达的核苷酸序列，该序列中最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合部位。 (即启动子)，编码区域， 被称为外显子的能编码蛋白质的序列称为外显子，内含子被转录到信使RNA中，启动子、终止子、编码区域上游、编码区域下游，内含子：外显子： 从真核细胞基因编码区转录前体mRNA，并切除其内含子，需要将外显子连接在一起的真核细胞的基因结构，编码区，非编码区，外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列， 非编码序列：包含非编码区和内含子，比较原核细胞与真核细胞的基因结构，编码相同数量的氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞的基因结构长度相同吗？ 连续、不连续、编码区、非编码、真核基因长度、(二)利用了PCR技术的放大、(三)、人工合成法：基因小、核苷酸序列已知，可以利用DNA合成器人工合成、 1、目的基因导入植物细胞的方法： (1)农杆菌转化法农杆菌的特征：容易感染双子叶植物或裸子植物，很多单叶植物没有感染能力，原理： Ti质粒上的T-DNA能转移到受体细胞，整合到受体细胞染色体的DNA中。 双子叶植物，祼子植物，适用生物？ 目的基因，Ti质粒上的T-DNA，插入，植物细胞，农杆菌，在染色体DNA上保持稳定和表达，整合，导入，感染，T-DNA导入，过程：优点：比较经济和有效，思考和探索：2.农杆菌将目的基因导入双子叶植物中把抗病基因导入小麦中，理论上该怎么办？必须选择合适的农杆菌菌株。 并非所有农杆菌菌株都能感染单子叶植物添加趋化和诱导的物质，一般用乙酰丁香等，使农杆菌靠近植物组织的受伤部位(趋化性)和激活(诱导)农杆菌Vir区的基因，激活T-DNA (37，(2)基因枪法：利用压缩气体的动力，将金属粒表面包着的表达载体DNA打入受体细胞，合并目的基因使其表达的方法，操作方法：金属粒：将目的基因导入单叶植物细胞，钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般为0.6 。适用：单叶植物，缺点：成本高，(3)花粉管道法：将目的基因导入植物细胞，操作方法：特征：植物授粉后，在花粉成为花粉管道愈合前切下柱头，然后滴下DNA (含目的基因)，将目的基因通过花粉管道放入受体细胞中例：转基因抗虫棉，2 .将目的基因导入动物细胞的显微注射技术，将含有目的基因的表达载体纯化，提取受精卵，方法：程序：原核生物的特征：繁殖快，多为单细胞，由于遗传物质比较少，早期成为受体细胞。大肠杆菌细胞、诱导细胞、重组表达载体DNA溶解于缓冲液中，方法：常用菌：大肠菌、3 .将目的基因导入微生物细胞，、转基因西红柿、转基因矮牛、1、3基因工程的应用、 将药物蛋白基因和乳腺蛋白基因的启动子等控制单元组合，通过显微注射等方法导入哺乳动物受精卵，并将受精卵输送到母体，使其发育成转基因动物。 转基因动物进入泌乳期后可以通过分泌母乳生产必要的药品，称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。 乳腺生物反应器，获得目的基因(如血清白蛋白基因)构建基因表达载体(血清白蛋白基因前特异性表达启动子)向哺乳动物受精卵显微注射导入形成胚胎将胚胎移植到母体动物转基因动物中(出生) 应用：基因工程技术实现动物乳腺生物反应器的操作过程如何，膀胱生物反应器，目的基因在膀胱上皮细胞中特异性表达，四、基因治疗极光，将正常基因导入患者体内，使该基因的表达产物发挥作用，达到治疗疾病的目的，并达到了基因(将特定的外来基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的)，体外基因治疗：首先从患者体内获取、培养某些细胞，然后在体外完成基因转移，然后筛选转移成功的细胞的扩增培养，最后重新输入患者体内。 体内基因治疗：直接转移到人体组织细胞的治疗方法。 (将治疗囊性纤维化的正常基因移植到患者的肺组织中)，DNA分子杂交是基因诊断的最基本方法之一。 以已知基因的碱基序列为探针，与被检基因接触，如果两者的碱基完全成为双链，表示被检基因中包含已知的基因序列。 基因诊断，五，从基因芯片、正常人的基因组中分离DNA和DNA芯片的杂交可以得到标准图像，从患者的基因组中分离DNA和DNA芯片的杂交可以得到病变图像。 通过比较和分析这两个图像，可以得到病变的DNA信息。 基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行、自动化等特征，成为现代化诊断的新技术。-DNA探测器序列，蛋白质的三维结构，氨基酸序列多肽链，基因DNA，期待的功能，分子设计，mRNA，生物功能，翻译，蛋白质工程学，目标：基于人们对蛋白质功能的特定需求蛋白质工程概念，蛋白质工程，是在蛋白质分子结构规律及其生物功能的关系的基础上，通过基因修饰或基因合成，改造现有的蛋白质，创造新的蛋白质，满足人的生产和生活需求。 也就是说，