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文档简介

转座子是一个基本单位，可以在DNA上自主复制和转移。20世纪40年代，人们首次在玉米中发现了大麦染色体组，这改变了人们对基因组序列稳定性的理解，打破了传统的染色体上遗传物质线性固定行的理论。麦克林托克因发现转座子而获得1983年的诺贝尔奖。转座子2存在于所有生物体的染色体上；转座子相关序列可以占据很大一部分物种基因，例如超过50%的人类和玉米基因组由转座子相关序列组成；3.不同基因组中转座子的含量差异很大；4.当转座子被置换时，转座子通常对插入位点的序列选择性很小。转座子类型：1，DNA转座子2，病毒样反转座子3，多聚-A反转座子，转座子机制：1，剪切-粘贴机制2，复制-粘贴机制，插入突变，转座子插入突变是利用转座子在染色体上移动的特性，当它跳到一个功能基因或邻近位点时，就会引起基因失活，并诱发突变。因此，我们可以利用一些能够随机插入基因序列的转座子在靶细胞的基因组中进行随机插入突变，建立一个携带随机插入突变的细胞库，然后通过相应的标记(如含有kan抗性基因的Tn5转座子)进行筛选，获得相应的基因敲除细胞。睡美人转座子已被证明在小鼠和人类细胞中被激活。转座子插入新位点后，该位点附近的基因被抑制，呈现隐性“睡美人”表型。一旦转座子在转座酶的作用下从该基因座转移，该基因座基因的隐性表型恢复为显性表型，即“睡美人苏醒”。调节转座酶和转座子活动的系统称为蛙皮素。使用特定的开放阅读框捕获技术，可以高度表达天然分散的转座酶编码基因，可以将转座子人工激活到苏醒，并且可以执行插入和切除等任务。目前，它已被应用于微生物、昆虫、植物、动物和人类基因组功能的研究。例如，青蛙基因组包含自然失活的Tcl水手转座子超家族。转座酶与转座子增强子序列的末端结合，并在HMGBI蛋白的辅助下，转座子被激活，使睡美人转座子苏醒。(1)转座子可以在转座酶存在的情况下从插入位点被切断，导致突变体的转化。该方法可以进一步证实突变表型是否是由转座子插入突变引起的。(2)大多数转座因子偏爱连锁位点，因此如果一个转座因子靠近目标基因，该转座因子将移动并有效插入目标基因。因此，即使在突变文库中没有发现所需的插入位点，位于连接位点的转座子转座子仍可用于获得插入并灭活目标基因的菌株。(3)当一个基因家族的多个成员沿着染色体串联排列时，复制转座子系统可用于产生突变体，其中基因家族的所有成员都被剔除。随着基因敲除技术的发展，早期技术中的许多不足和缺陷都得到了解决，但基因敲除技术总是有一个不可克服的缺陷，即敲除一个基因并不一定知道该基因的功能。原因包括：一方面，许多基因在功能上是冗余的，剔除一个功能上冗余的基因不会导致容易识别的表型，因为基因家族的其他
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