血细胞比容测定讲稿

血球比容测定，一，概念，血球比容(Hematocrit，HCT或packedcellvolume，PCV )，是指一定容积的血液中红血球在全血中所占的体积的比例。二、检测原理、(一)、温氏法：在一定条件下离心沉淀EDTA-K2的抗凝固，测定红血球在全血中的体积比例。 微量法：使用一次性肝素化的干燥毛细血管(包括肝素2 )直接采集外周血，以相对离心力1000g(1100012000r/min )离心5分钟，取出后用尺测定血液的全长和血球层的长度.(三)，血液分析仪：现在大部分血液分析仪都用抵抗法进行细胞计数和血球比容测定。 其原理是，血浆是电的良导体，相对于此，血球是电的良导体，细胞通过小孔后，形成相应大小的脉冲，脉冲的数量是血球的数量，脉冲的高度表示血球的体积。 使用血液分析法的血球比容积是测定红血球平均体积和红血球计数这两个指标而导出的，即血球比容积(HCT=红血球平均体积x红血球计数)， (四)、相对离心力1、相对离心力(RCF ) g=1. 118 x 10 x5x有效离心半径(cm)x转速2/min、2、以相对离心力2264g (即有效离心半径22.5cm、3000r/min )测量时，以30min远离用、3、微量法测定时，以相对离心力1000g(1100012000r/min )离心5min，取出后用尺测定血液全长和血球层长度。三、检查方法和方法学评价、(一)、检查方法1、温氏法：的压积容量为管长11cm、内经2.5cm，管上刻有0100mm刻度的平底管，其读取侧用于测定红血球容积，相反侧用于测定红血球沉降率)、2、微量法： 手指穿刺血液经自然毛细现象放入特制的毛细血管中(肝素)，用夹克或橡胶泥塞住一端，放入专用离心机中，以1100012000r/min高速离心5min。 测定红血球层和全层的长度，计算比率的话，就成为红血球比积。(二)，方法论评价1，温氏法：中速离心3000r/min，离心30min； 离心沉淀过程中不能完全排除红细胞间残留的血浆，结果提高使用时间长，标本多，已被淘汰。2、微量离心法：高速离心11000-12000r/min、离心5min； 离心力大，红血球间残留的血浆量比平均温度法低2% (包括约1%-3%的残留血浆)。 标本使用量少，操作简单，现在WHO优先采用常规方法。3、血液分析法：目前血液分析仪提供的参数包括Hct测定，结果对数万个细胞体积产生的脉冲进行测定和换算，避免了血浆残留引起的误差。 但是，如果患者红血球增加，白血球和血小板的数量明显增加，患者血浆中存在异常的蛋白质和血浆渗透压异常的情况下，要注意器械法出现误差。四、质量控制、(一)、手工法：以下要素1、抗凝剂量不正确或抗凝剂和血液混合不充分，血液凝固。 2 .离心速度不足或时间过短会产生误差。 3、使用的器材要清洁干燥，避免溶血。4、当红血球形态改变时(如大红血球、小红血球、椭圆红血球、长红血球等)，变形性降低的红血球使血浆残留量增加6%。 不能使用改变红血球容积的抗凝固剂。5、红血球症时，血球比容明显增加，血浆残留量也增加。 6、避免血液稀释(静脉三通采血) 7、离心条件应保持一定。(二)，血液分析法： 1，避免溶血2，避免血液稀释3，要注意Hct和红细胞计数与红细胞平均体积测定值的相关性。五、参考值，1，温氏法男40%54%女37%47%2，微量法男38%48%女36%47%3，血球分析仪，六，临床意义，(一)，高度为1，各种原因引起的血液浓缩，如大量呕吐，大手术后，腹泻，出血，大面积烧伤，2，真性红血球症红血球减少，红血球比积减少，但根据原因贫血、红血球体积的大小不同，两者的减少不一定平行，因此临床上常用于计算红血球平均容积、红血球平均血红蛋白含量和红血球平均血红蛋白浓度，有助于贫血的辨别和分类。 可以作为计算、2、MCV、MCHC的基础数据，是影响全血粘度的决定因素之一(例如血液粘度变高引起休克)。 3、大量饮水，红血球平均指数，一，红血球平均指数： 1，包含红血球平均容积(meancorpuscularvolume，MCV )，是指每1个红血球的平均体积的大小，以飞升(fl )为单位.2、 红血球的平均血红蛋白含量(meancorpuscularhemoglobinMCH )是指每个红血球中包含的血红蛋白量，以像素(pg )为单位.3、红血球的平均血红蛋白浓度(meancorpousculrhemoglobin 、二、检测原理是，对同一抗凝固标本同时计数红细胞，测定血红蛋白与血细胞比容，从而能进一步计算红细胞的3个平均指数。 1，MCV(fl)=每升血液红血球体积/每升血液红血球数=Hct/RBC例：红血球为3.50*1012/L，红血球容积为0.36的情况： MCV=0.36/3.50*1012/L=103fl， 2、MCH(pg)=每升血液的血红蛋白含量/每升血液的红血球数=HB/RBC例：红血球为3.50*1012/L，血红蛋白为120g/L，mch=120 g/l/3.50 * 1012/l=34.20=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红血球体积=HB/Hct例：血红蛋白为120g/L，血球比容积为0.36的情况： MCHC=120g/L/0.36=333g/L，三，方法学评价，1，MCV器械法CV1%， 多数血液分析仪设定的MCV值的最大域值为360fl，因此有可能含有红血球团块，如果红血球凝聚，MCV假性提高的重症高血糖症(葡萄糖高于33.3mmol/L )会引起红血球的肿胀，提高MCV的假性。2、MCH高脂血症和白血球增加症由于血浆浊度的增加，MCH的假性提高，手动测定会施加离心力来消除浊度，测定结果可以修正。 仪表法CV为0.6%1.2%，手工作法CV值为10%左右。3、MCHC的值与血红蛋白的溶解度有关，血红蛋白浓度高于该值时有可能结晶。 另外，手法MCHC的测定会受到Hct (血浆残留或出现异常红血球)和Hb (高脂蛋白血症、白血球增加症)的影响。 仪器法CV为1%1.5%、4、质量控制，1、手工法是间接计算红细胞3个平均指数，因此红细胞计数、血红蛋白测定、血细胞比容的测定必须使用相同的抗凝标本，测定的数据必须正确。2、血液分析法应注意红细胞平均指数与红细胞数、血红蛋白、血细胞比容测定三个测定指标的相关性。 要注意不要溶血。、5、参考值、1、手动操作： MCV80-92fl； MCH27-31pg； MCHC 320-360克/升； 2、仪器法： MCV80-100fl； MCH27-34pg； MCHC 320-360克/升； 六、贫血的红血球形态学分类贫血分类MCVMCHMCHC贫血正细胞性贫血正常再障碍，急性出血性贫血，一些贫血大细胞性贫血变高了正常的各种造血物质不足或不良的贫血巨幼细胞性贫血单纯小细胞性贫血降低正常慢性感染，慢性肝肾疾病性贫血小细胞低色素贫血降低铁缺乏性贫血， 慢性出血性贫血，地中海贫血红血球的直径和厚度的测定，一，器材和使用(一)，器材1，目视千分尺：这是圆形的玻璃板，中间刻有50或100等分的格子，各格子相当于几微米，根据当时使用的显微镜镜筒的长度和目镜、物镜的倍率. 2、载物台测量仪：这是用来校正目视测量仪的，外观和载物台玻璃相似，中间封入了圆形的盖片标准尺，全长1mm，分成100等分，各格为10um。 (2)校正1，目视测量仪的校正： (1)在目镜中放置目镜，将载物台测量仪放置在载物台上，用低倍镜找到标准尺，移动到视野中央，更换测量用物镜，校正目镜测量仪，测量红细胞直径后更换物镜。 移动载物台，使载物台测定器的标准尺和目镜测定器的刻度平行，使左侧的线和零重叠，观察刻度和标准尺右侧的重叠线，记录各自的格子数，计算目镜测定器在该倍率下的每一个格子的微米数。 (3)目镜千分尺40格与载物台千分尺6格重叠，则每目镜千分尺的微米数=6*10um/40=1.5um式中： 6是载物台千分尺实测格数； 10um是载物台测定器的每单元的长度，40是目镜测定器的实测光栅数。 (4)目镜千分尺校正后，不可更换物镜、目镜或改变镜筒的长度。 显微镜转换后，必须再次校正。二、红细胞平均直径测定，(一)、方法和步骤1，按常规制备薄血膜涂膜，立即干燥固定，瑞氏染色。 2、将载物台测定器换成被检片，选择细胞分布均匀稀疏的区域，依次测定每个红细胞的直径，共计测定500个红细胞。 测定时，用红血球直径所占的目镜测定器的数量记录，测定异性红血球的长度、短度，取平均值。 记录方式以0.5格为记录单位。4、计算红血球平均直径的红血球平均直径=被检细胞的总格子数/被检细胞数*目镜测定器的每一格子相当微米数：被检细胞的总格子数为980被检细胞数为200，目镜测定器的每一格的微米数为1.5um，红血球的平均直径=980/200 * 1.5 um=7. 红血球直径以微米数为横轴，红血球百分比为纵轴，各种直径的红血球百分比连接而成的红血球直径曲线。 可以清楚地反应红血球的大小和分布。(二)，正常基准值红血球直径6.7-7.7um，(三)，临床意义1，正常人红血球直径的大小的差异不大，直径曲线的基底狭窄，呈突出的尖峰状，其顶点位于7-8um之间，红血球直径曲线的基底宽，顶点越低红血球的大小越不均匀，差异越大、2，主要用于贫血的鉴别诊断。 (1)小红血球贫血时，平均红血球直径比正常基准范围小，平均直径为6.26.7um，曲线的基底稍宽，峰值向左偏移，红血球的大小不均匀时，曲线的基底变宽。 (2)大细胞性贫血的情况下，红血球的平均直径超过正常基准范围，红血球的平均直径为7.59.6um，红血球的直径曲线的峰值向右偏移，底部明显变宽，曲线变平。 (3)正常细胞性贫血时，红血球的平均直径及其曲线模式与正常相同。 比如急性出血性贫血。，(四)，方法学评价，1，红细胞直径测定简单，不需要特别设备，对贫血的鉴别诊断有一定的价值。 但是，由于血涂片的厚度不同和压片技术的不同，经常使红血球发生人为的变化，按压的学涂片很薄，很合适，没有红血球的重叠，形成血液片后，为了不让红血球收缩变形，必须迅速地进行干燥固定。 病理形态的红血球也影响正确的直径测定，记录其平均值。 目镜测量仪校正过一次后，必须更换镜头，或变更镜头镜筒的长度，不变更倍率，再次进行校正。 3、测定时选择红血球分布均匀的体尾边界，依次测定200500个红血球的直径，不能任意取舍。4、血细胞分析仪可基于测定的各个红细胞体积，计算体积变异系数RDW，客观准确地反映红细胞大小不均匀性，结合红细胞体积直方图分析，对贫血的鉴别诊断更有价值。 三、红血球平均厚度的计算，红血球平均厚度=红血球平均体积/(红血球平均直径/2)2例：红血球平均体积88fl，红血球平均直径7.2um :红血球平均厚度=88/3.1416*(7.2/2)2=2.16um，临床意义： 1，正常红血球平均厚度为2um左右。 2 .患遗传性球性红血球性贫血和巨大红血球性贫血时，比正常稍厚3，单纯小细胞性贫血和闭塞性黄疸时，比正常稍薄。红细胞体积分布宽度、一、概念、红细胞体积分布宽度(redbloodcellvolumedistributionwidth，RDW )是一个新的红细胞参数，血液分析仪从红细胞体积直方图中导出，能反映所测标本中红细胞体积的异质度，常反映变异系数(CV .二、检查原理、检查原理与血液分析装置的红血球的计数相同，多采用电阻电阻原理，红血球通过小孔时，代替相同体积的电解质溶液，使原来的恒流电路的孔电阻瞬间增加，产生脉冲信号，红血球通过小孔时，产生几个脉冲信号如果对检测到的红血球的体积进行统计学分析，则导出RDW值。三、方法学评价，一、红血球的体积评价，过去主要是用压片观察红血球形态，该观察受到多种因素的影响，如血涂片的制作技术、血片的厚度、观察者的主观因素的影响很大，无法定量。2、仪器法测定数万个红血球后，从直方图导出RDW值为定量值，同时可以克服人工观察到的各种主观和客观误差，更准确地反映红血球体积异质性程度。3、相比之下，MCV的值只是反映了红血球体积的平均大小，不能代表红血球间的体积差异。 仅以MCV作为贫血的形态学分类标准，可隐藏病理性红细胞体积异质性的实态，影响贫血分类的准确性。四、质量控制、红细胞分布宽度的结果与临床和红细胞直方图的变化相结合，分析RDW异常是否由红细胞碎片红细胞凝集或两相性红细胞引起。五、参考值成人： 11.6%-14.6%、六、临床意义、1、贫血形态学新分类2、对缺铁性贫血(irondeficiencyanemiaIDA )进行早期筛选诊断和疗效观察，3， 鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白障碍性贫血两