浅析中药清除羟自由基实验的改良

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/5浅析中药清除羟自由基实验的改良摘要目的对邻二氮菲FE2氧化法进行改良，使其在用于自由基清除剂筛选时更为有效和更为敏感。方法在不同的PH环境、不同的保温时间及不同的测定波长条件下进行对比实验。结果邻二氮菲FE2络合物在PH的环境下及510NM的测定波长时有较大的吸光度，30MIN的保温时间使各管有较大并较为稳定的吸光度。结论通过对邻二氮菲FE2氧化法的实验改良能提高该方法筛选自由基清除剂的灵敏度。关键词自由基清除剂；邻二氮菲；羟自由基机体在代谢过程中产生多种自由基，包括超氧阴离子自由基（O2）、羟自由基（OH）及其活性衍生物H2O2等，其中以OH化学性质最活泼。一定数量的氧自由基可为机体所用，但过多的氧自由基将作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病14。因此，自由基清除剂的合成及寻找成为当前医药研究的主要方向之一，而中药的天然、丰富及低毒更受人们的青睐。目前人们测定自由基清除剂清除羟自由基的方法有很多，其中邻二氮菲FE2氧化法操作简单，设备要求不高，易于推广和应用。本实验对该方法进行了若干改良。1材料与方法精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/5试剂维生素C（郑州羚锐制药有限公司生产）、邻二氮菲（天津市科密欧化学试剂有限公司生产，分析纯）、硫酸亚铁铵（广东光华化学厂有限公司生产，分析纯）、过氧化氢（广东汕头市西陇化工厂生产，分析纯）、磷酸二氢钾（上海市国药集团化学试剂有限公司）、无水乙醇和氢氧化钠（湖南汇虹试剂有限公司生产，分析纯）。仪器752N紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司生产），DK600S三用恒温水浴箱（上海精密实验设备有限公司生产）。方法以维生素C作为自由基清除剂，用邻二氮菲FE2氧化法检测H2O2/FE2体系通过FENTON反应产生的OH。H2O2/FE2体系产生的OH将邻二氮菲FE2氧化为邻二氮菲FE3，使邻二氮菲FE2对536NM波长的最大吸收减弱，A536明显降低。当反应体系中存在OH清除剂时，此氧化过程受抑制，A536则降低不明显，并可通过A536值比较OH清除剂的清除能力5。对该实验进行三个方面的改良一是将反应环境由PH改为PH的酸性环境；二是将37保温时间由60MIN改为30MIN；三是测定吸光度的波长由536NM改为510NM。实验过程中分别在PH的磷酸缓冲液及PH乙酸乙酸钠缓冲液的环境下进行对照实验；在保温560MIN的时间范围内、536NM和510NM波长分别测定吸光度，比较两种PH条件下吸光度的差异。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/5反应中依次加入邻二氮菲、缓冲液、自由基清除剂维生素C、FE2及H2O2为加药管；不加维生素C为氧化管；不加维生素C及H2O2为对照管。统计学处理组间采用T检验，数据以S表示。2结果不同测定波长及不同PH环境下的比较从表1可以看出，邻二氮菲FE2络合物的最大吸收波长为510NM，而最佳酸碱环境为PH。表1不同测定波长及不同PH环境下的比较略）不同保温时间及不同PH环境下的比较图1显示了PH时不同保温时间对A510的影响，对照管吸光度于15MIN时达高峰，随后缓慢下降；而加药管和氧化管吸光度一开始便呈现急剧下降的趋势。图2显示了PH时不同保温时间对A510的影响，对照管吸光度于30MIN时达高峰，此后处于基本稳定状态；加药管和氧化管吸光度均于30MIN后才出现较明显的下降。各管之间吸光度的变化值（A）比较从表2可以看出，随着保温时间的延长，各管之间的A逐渐加大，但PH时的A加药管氧化管，在30MIN时最大，此后较为精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/5稳定。表2各管之间吸光度的变化值（A）比较（略）3讨论实验表明，邻二氮菲FE2络合物在酸性条件下（PH）比较稳定，有较高的吸光度，并且最大吸收波长为510NM。而保温时间也是实验中的一个重要环节，保温到某一时间时，各管的吸光度较大，同时各管之间的吸光度变化值（A）也较大，有利于自由基清除剂的甑选。从实验中观察到，在PH的条件下，对照管保温到30MIN有最大的吸收峰，加药管也有较大的吸光度，使加药管与氧化管之间A（A加药管氧化管）达到最大，该值更能说明自由基清除剂的作用强弱，是判断自由基清除剂的重要指标，并且还能反映该方法的灵敏度。而在PH时，加药管和氧化管一开始便呈现急剧下降的趋势，虽然两管吸光度有所差异，但A加药管氧化管较PH时要小得多，不具有说服力，也降低了反应的灵敏度。综上所述，采用邻二氮菲FE2氧化法衡量自由基清除剂的作用时，最佳反应条件为PH，测定波长为510NM，37保温时间为30MIN。【参考文献】1LIMOLICL,KAPLANOFRADIATIONINDUCEDGENOMICINSTABILITYBYFREERADICALSCAVENGERSANDCELLULARPROLIFERATIONJFREE,311102VALKOM,IZAKOVICMROLEOFOXYGEN精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/5RADICALSINDNADAMAGEANDCANCERINCIDENCEJMOLCELLBIOCHEM2004,26612373YAMAMOTOH,WATANABEVIVOEVIDENCEFORACCELERATEDGENERATIONOFHYDROXYLRADICALSINLIVEROFLONGEVANSCINNAMONLECRATSWITHACUTEHE