GB 5009.97-2016 食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定

016 前 言本标准代替003食品中环己基氨基磺酸钠的测定。本标准与003相比,主要变化如下:标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定”;气相色谱法改为使用毛细管柱进行分析;优化了样品处理、衍生化和测定的条件;增加液相色谱法;增加液相色谱谱法;删除003食品中环己基氨基磺酸钠的测定中的第二法比色法和第三法薄层色谱法。0161 食品安全国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定1 范围本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)的三种测定方法气相色谱法、液相色谱法和液相色谱谱法。本标准气相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍的蔬菜、腐乳食品中环己基氨基磺酸钠的测定。本标准气相色谱法不适用于白酒中该化合物的测定。本标准液相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、配制酒、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍的蔬菜、腐乳食品中环己基氨基磺酸钠的测定。本标准液相色谱谱法适用于白酒、葡萄酒、黄酒、料酒中环己基氨基磺酸钠的测定。第一法 气相色谱法2 原理食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取,在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应,生成环己醇亚硝酸酯,利用气相色谱氢火焰离子化检测器进行分离及分析,保留时间定性,外标法定量。3 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的二级水。庚烷化钠(油醚:沸程为3060。氧化钠(酸(铁氰化钾e(3酸锌(硝酸钠(氧化钠溶液(40g/L):称取20于水并稀释至500匀。0162 酸溶液(200g/L):量取54加水至500匀。铁氰化钾溶液(150g/L):称取折合15),溶于水稀释至100匀。酸锌溶液(300g/L):称取折合30),溶于水并稀释至100匀。硝酸钠溶液(50g/L):称取25于水并稀释至500匀。准品环己基氨基磺酸钠标准品(纯度99%。己基氨基磺酸标准储备液(水溶解并定容至100匀,置于14冰箱保存,可保存12个月。己基氨基磺酸标准使用液(匀。置于14冰箱保存,可保存6个月。4 相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(旋混合器。心机:转速4000r/声波振荡器。品粉碎机。0温水浴锅。平:感量1 需要可过滤),用水定容至50二氧化碳的试样:0水浴加热30冷,用水定容至50酒精的试样:氢氧化钠溶液(至弱碱性,60水浴加热30冷,用水定容至50 固体、脂、低蛋白样品(果酱、果冻、水果罐头、果丹类、蜜饯凉果、浓缩果汁、面包、糕点、饼干、复合调味料、带壳熟制坚果和籽类、腌渍的蔬菜等):称取打碎、30摇,超声提取20匀,离心(3000r/0滤,用水分次洗涤残渣,收集滤液并定容至50匀备用。蛋白样品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等):冰棒、雪糕、0163 250融化后搅匀称取;30声提取202匀,再加入2匀,离心(3000r/0滤,用水分次洗涤残渣,收集滤液并定容至50匀备用。脂样品(奶油制品、海鱼罐头、熟肉制品等):称取打碎、入25摇,超声提取3混匀,离心(1000r/0石油醚,再用25石油醚,60水浴挥发去除石油醚,残渣加30匀,超声提取202匀,再加入2匀,离心(3000r/0滤,用水洗涤残渣,收集滤液并定容至50匀备用。生化准确移取液体试样溶液(固体、半固体试样溶液(心管置试管架上冰浴中5紧离心管盖,摇匀,在冰浴中放置30间振摇3次5次;上盖后置旋涡混合器上振动1振摇60次80次),低温离心(3000r/04冰箱冷藏保存以备进样用。水定容。配成标准溶液系列浓度为:用时配制以备衍生化用。)衍生化。谱柱:弱极性石英毛细管柱(内涂5%苯基甲基聚硅氧烷,30m等效柱。温升温程序:初温55保持30/0/持3样口:温度230;进样量1L,不分流/分流进样,分流比15(分流比及方式可根据色谱仪器条件调整)。测器:氢火焰离子化检测器(温度260。气:高纯氮气,吹20mL/气:30mL/气330mL/气、氢气、空气流量大小可根据仪器条件进行调整)。谱分析分别吸取1注入气相色谱仪中,可测得不同浓度被测物的响应值峰面积,以浓度为横坐标,以环己醇亚硝酸酯和环己醇两峰面积之和为纵坐标,绘制标准曲线。在完全相同的条件下进样1),保留时间定性,测得峰面积,根据标准曲线得到样液中的组分浓度;试样上清液响应值若超出线性范围,应用正庚烷稀释后再进样分析。平行测定次数不少于两次。0164 6 分析结果的表述试样中环己基氨基磺酸含量按式(1)计算:X1=(1)式中:试样中环己基氨基磺酸的含量,单位为克每千克(g/c由标准曲线计算出定容样液中环己基氨基磺酸的浓度,单位为毫克每毫升(mg/m试样质量,单位为克(g);V试样的最后定容体积,单位为毫升(计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8 其他取样量5二法 高效液相色谱法9 原理食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取后,在强酸性溶液中与次氯酸钠反应,生成N,正庚烷萃取后,利用高效液相色谱法检测,保留时间定性,外标法定量。10 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的一级水。庚烷色谱纯。腈(色谱纯。酸(氯酸钠(酸氢钠(酸锌(铁氰化钾e(3油醚:沸程为3060。酸溶液(1+1):50匀。0165 氯酸钠溶液:用次氯酸钠(释,保存于棕色瓶中,保持有效氯含量50g/匀,市售产品需及时标定,临用时配制。酸氢钠溶液(50g/L):称取5水溶解并稀释至100匀。酸锌溶液(300g/L):称取折合30溶于水并稀释至100匀。铁氰化钾溶液(150g/L):称取折合15溶于水并稀释至100匀。准品环己基氨基磺酸钠标准品(纯度99%。己基氨基磺酸标准储备液(制。己基氨基磺酸标准中间液(制。己基氨基磺酸标准曲线系列工作液:分别吸取标准中间液(水定容。00g/00g/用现配。11 相色谱仪,配有紫外检测器或二极管阵列检测器。声波振荡器。心机:转速4000r/品粉碎机。温水浴锅。平:感量12 入30匀,超声提取20心(3000r/0上清液转出,用水洗涤残渣并定容至50含高脂质类样品可在提取前先加入25摇后弃去石油醚层除脂。水定容至50需要可过滤)。二氧化碳的试样:0水浴加热30冷,用水定容至50酒精的试样:氢氧化钠溶液调至弱碱性,60水浴加热30冷,用水定容至500166 亚铁氰化钾溶液(混匀,离心分层后,将上清液转出,用水洗涤残渣并定容至50生化准确移取10剧烈振荡1置分层,除去水层后在正庚烷层中加入25振荡1液备进样用。谱柱:m,150i,d),或同等性能的色谱柱。动相:乙腈+水(70+30)。速:样量:10L。温:40。测器:紫外检测器或二极管阵列检测器。测波长:314准曲线的制作移取10定相应的峰面积,以标准工作溶液的浓度为横坐标,以环己基氨基磺酸钠衍生化产物N,制标准曲线。品的测定将衍生后试样溶液(0留时间定性,测得峰面积,根据标准曲线得到试样定容溶液中环己基氨基磺酸的浓度,平行测定次数不少于两次。13 分析结果的表述试样中环己基氨基磺酸含量按式(2)计算:X2=c000(2)式中:试样中环己基氨基磺酸的含量,单位为克每千克(g/c由标准曲线计算出试样定容溶液中环己基氨基磺酸的浓度,单位为微克每毫升(g/V试样的最后定容体积,单位为毫升(m试样的质量,单位为克(g);1000由g/算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。14 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。0167 15 其他取样量5三法 液相色谱谱法16 原理酒样经水浴加热除去乙醇后以水定容,用液相色谱谱仪测定其中的环己基氨基磺酸钠,外标法定量。17 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的一级水。醇(色谱纯。酸铵(0乙酸铵溶液:水溶解并稀释至1000准品环己基氨基磺酸钠标准品(纯度99%。己基氨基磺酸标准储备液(制。己基氨基磺酸标准中间液(制。己基氨基磺酸标准工作液(10g/容至100置于14冰箱可保存一周。己基氨基磺酸标准曲线系列工作液:分别吸取适量体积的标准工作液(用水稀释,用前配置。孔滤膜:相。18 相色谱谱仪,配有电喷雾(子源。析天平,温水浴锅。19 于5060水浴上加热300168 中,用水定容并摇匀,谱柱:00i,d),或同等性能的色谱柱。动相:甲醇、10乙酸铵溶液。度洗脱:速:样量:10L。温:35。子源:电喷雾电离源(描方式:多反应监测(描。谱调谐参数应优化至最佳条件,确保环己基氨基磺酸钠在正离子模式下的灵敏度达到最佳状态,并调节正、负模式下定性离子的相对丰度接近。质谱调谐参数和定性、定量离子参见附录A。准曲线的制作将配制好的标准系列溶液(照浓度由低到高的顺序进样测定,以环己基氨基磺酸钠定量离子的色谱峰面积对相应的浓度作图,得到标准曲线回归方程。典型的环己基氨基磺酸钠标准溶液选择反应监测质量色谱图参见附录B。性测定在相同的试验条件下测定试样溶液(若试样溶液质量色谱图中环己基氨基磺酸钠的保留时间与标准溶液一致(变化范围在内),且试样定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液中定性离子的相对丰度,其偏差不超过表1的规定,则可判定样品中存在环己基氨基磺酸钠。表1 定性离子相对丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%502050102010允许的相对偏差/%202530量测定将试样溶液注入液相色谱谱仪中,得到环己基氨基磺酸钠定量离子峰面积,根据标准曲线计算试样溶液中环己基氨基磺酸的浓度,平行测定次数不少于两次。20 分析结果的表述试样中环己基氨基磺酸含量按式(3)计算:X3=c(3)式中:试样中环己基氨基磺酸的含量,单位为毫克每千克(mg/c由标准曲线计算出的试样溶液中环己基氨基磺酸的浓度,单位为微克每毫升(g/0169 V试样的定容体积,单位为毫升(m试样的质量,单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。21 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。22 01610 附 录 相色谱梯度洗脱条件序号时间/10乙酸铵溶液/%离子模式的质谱参考条件:a) 毛细管电压:b)离子源温度:110;c)脱溶剂气温度:450;d)脱溶剂气(量:700L/h;e)锥孔气(量:50L/h;f)分辨率:位质量分辨)位质量分辨);g)碰撞气及碰撞室压力:氩气,0h)扫描方式:多反应监测(i)环己基氨基磺酸钠参考保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、离子模式的质谱参考条件:a)毛细管电压:b)离子源温度:110;c)脱溶剂气温度:450;d)脱溶剂气(量:700L/h;e)锥孔气(量:50L/h;f)分辨率:位质量分