董稚明食管鳞癌tgf-β受体基因启动子区甲基化状态研究

前言WNT通路拮抗剂SFRPS家族甲基化状态与贲门癌关系的研究食管鳞癌TGF受体、基因启动子区甲基化状态研究河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所董稚明冀医四院食管癌我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家缺乏有效的早期诊断指标，就诊病人失去了最佳治疗时机95以上食管癌为食管鳞状细胞癌（ESCC冀医四院并非所有暴露个体均患病环境因素与遗传因素共同作用食管癌遗传因素和表观遗传因素亚硝胺类化合物吸烟、饮酒营养缺乏霉菌感染冀医四院传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。RNA干扰表观遗传学DNA甲基化组蛋白修饰染色体重塑冀医四院DNA甲基化是在DNA甲基转移酶的作用下,以S腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基基团转移到胞嘧啶第5位碳原子上,从而转变成5甲基胞嘧啶（5MC）。基因启动子区域的CPG岛正常状态下不发生甲基化，一旦由于某种原因而发生甲基化就会导致基因转录沉寂，使重要基因如抑癌基因、修复基因等丧失功能，有可能导致肿瘤发生。冀医四院冀医四院头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中TR基因甲基化与其表达降低有关。对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TR基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。小细胞肺癌中TR和表达缺失与基因甲基化无关。冀医四院研究目的本研究应用甲基化特异性PCR反应MSP和RTPCR技术检测食管鳞状细胞癌组织中TGF受体、基因TR、启动子区甲基化状态和MRNA表达水平，并结合临床资料探讨其与临床病理资料的关系，为确定TR、甲基化与ESCC发生发展之间的关系提供理论依据。冀医四院65例贲门癌组织、59例相应癌旁组织性别男性51例，女性14例TNM分期、期37例，、期28例病理分级高、中分化组55例，低分化组10例年龄范围在2674岁，中位年龄574岁冀医四院基因CPG状态引物序列（53）退火温度产物大小BPTRUCAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAA60147TGTTGGTTTTTGGTTATGTTTTATGTTTTTTMACCCTCCGAAACTAACGACTAAACGA52142CGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTTTRUTTGAAAGTTGGTTAAAGTTTTTGGA55123AAACAAAACCTCTCTCCACCCAMGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAACAAAACCTCTCTCCGCCCG53119冀医四院TR和TR基因MSP引物METHYLATIONANALYSISOFTRANDTRINTUMORTISSUETANDCORRESPONDINGNORMALTISSUESNUINDICATESTHEPRESENCEOFUNMETHYLATEDGENESMINDICATESTHEPRESENCEOFMETHYLATEDGENESCASES1TUMORSPECIFICMETHYLATIONCASE2THETUMORISFULLYMETHYLATED,WHEREASTHECORRESPONDINGNORMALTISSUEHASAVERYFAINTBANDDEMONSTRATINGMETHYLATIONCASE3BOTHOFTUMORANDCORRESPONDINGNORMALTISSUEUNMETHYLATEDCASE1CASE2CASE3冀医四院TRTRCASE1CASE2CASE3UNMETHYLATEDMETHYLATED原始序列GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG非甲基化序列AAAAAACATAAAACATAACCAAAAACCAA甲基化序列AAAAAACGTAAAACGTAACCAAAAACCGA冀医四院UNMETHYLATEDTRMETHYLATEDTR原始序列TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGC非甲基化序列TTGGGTGGAGAGAGGTTTTGT甲基化序列TCGGGCGGAGAGAGGTTTTGTFREQUENCYOFTR,GENEMETHYLATIONINESCCANDADJACENTNONCANCEROUSTISSUESGENEMETHYLATIONRATIO2PTUMORTISSUEADJACENTNONCANCEROUSTISSUETR523（34/65）40724/5916800195TR70846/6547528/5969840008冀医四院THERELATIONSHIPBETWEENTR,GENEMETHYLATIONANDCLINICALDATAINESCCGROUPTRTRNMU2PMU2PESCC6534314619AGE603717202896028171113930238181010000317GENDERMALE5126253516FEMALE14860167068311301540694CLINICALSTAGE37211627102813150682040919902020653DIFFERENTIALDEGREEWELLMODERATELY5530254015POORLY1046025306156401900663冀医四院FREQUENCYOFTR,GENEMETHYLATIONINCOMMONINESCCANDADJACENTNONCANCEROUSTISSUEGROUPTRANDGENESIMULTANEOUSMETHYLATIONNONSIMULTANEOUSMETHYLATION2PTUMORTISSUE314773438210051NONCANCEROUSTISSUE1830541冀医四院THERELATIONSHIPBETWEENTR,GENEMETHYLATIONINCOMMONANDCLINICALDATESINESCCGROUPTRANDGENESIMULTANEOUSMETHYLATIONNONSIMULTANEOUSMETHYLATION2PDIFFERENTIALDEGREEWELLMODERATELY282707630382POORLY37CLINICALSTAGE1918046104971216冀医四院目前认为DNA甲基化主要在转录水平抑制基因的表达，TGF受体、基因的甲基化对其MRNA的表达是否有影响呢冀医四院基因引物序列（53）退火温度产物大小BPTRGGAGAAGAAGTTGCTGTTAAG57419ATGGTATCTGTGGCTGAATCTRCAACATCAACCACAACACAGAG54248CCGTCTTCCGCTCCTCAGGAPDHGGGAAACTGTGGCGTGAT60342GTGGTCGTTGAGGGCAATTR和TR基因RTPCR引物冀医四院RTPCRANALYSISOFTRMA100BPDNAMARKER1,3,5,6POSITIVEMRNAEXPRESSION2,4NEGATIVEMRNAEXPRESSION冀医四院RTPCRANALYSISOFTRMA100BPDNAMARKER1,3,5,6POSITIVEMRNAEXPRESSION2,4NEGATIVEMRNAEXPRESSIONTHEEXPRESSIONOFTR,MRNAINESCCTUMORANDADJACENTNONCANCEROUSTISSUESGENETUMORTISSUEADJACENTNONCANCEROUSTISSUETPTR07701709903133930001TR08903011002923580022冀医四院GENEESCCTPMETHYLATEDUNMETHYLATEDTR07401808101512870206TR08603309502009220362THERELATIONSHIPBETWEENMETHYLATIONANDMRNAEXPRESSIONOFTRAND冀医四院本研究结果显示食管鳞癌组织中TR的甲基化率高于癌旁组织，其MRNA的表达量也明显低于癌旁组织，但是发生甲基化的癌组织与未发生甲基化的癌组织相比，其MRNA表达虽然降低，但却无统计学差异。冀医四院部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生