寻常型银屑病患者炎症因子受体表达及基因多态性的研究（可编辑）

寻常型银屑病患者炎症因子受体表达及基因多态性的研究北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文寻常型银屑病患者炎症因子受体表达及其基因多态性的研究姓名顾宁琰申请学位级别博士专业皮肤病与性病学指导教师顾恒20090501北京协和医学院中国医学科学院博十学位论文中文摘要银屑病的病因和发病机制非常复杂,大量研究表明遗传背景和免疫因素在发病中起着重要作用。目前已有及共个银屑病易感基因位点被人类孟德尔遗传在线收录。在银屑病的免疫发病机制中,已有的研究认为银屑病是淋巴细胞介导的慢性炎症性自身免疫性疾病,和细胞占优势。在银屑病皮损和外周血中,细胞因子、和细胞因子、高表达,包括淋巴细胞、树突状细胞、浆细胞和不同的免疫相关细胞因子及趋化因子在内的细胞免疫系统的活化促发了角质形成细胞的过度增殖和异常分化、血管增生,从而形成银屑病相应的临床表现。促炎症因子和特征性细胞因子对银屑病皮损的形成、维持和发展具有重要的意义。细胞因子受体在细胞因子发挥生物学效应的过程中起着关键作用。我们初步研究了吖受体和受体在银屑病中两类重要的效应细胞淋巴细胞和上的表达,探讨和在银屑病发病机制中可能的作用。并通过分析可能对基因功能有影响的单核苷酸多态性位点,研究位点与相应基因表达之间的关系,从遗传学角度探讨影响受体基因转录调控的机制。全文分为三个部分。第一部分银屑病患者受体和一伍受体的表达采集寻常型银屑病患者外周血分离单个核细胞,采集寻常型银屑病患者皮损处和距皮损边缘处外观正常的皮肤分离表真皮,以法检测和表皮上和的表达,评分法评估银屑病的严重程度。分析寻常型银屑病患者和表达水平之间的关系,分析受体表达与评分的关系,分析受体表达水平在和表皮中是否有关联。研究结果如下和在所有银屑病患者和下常对照者和表皮中表达阳性率为。进行期和稳定期银屑病患者与正常对照者比较和表达水平均有极显著升高仁,。进行期和稳定期银屑病患者表皮表达水平均显著高于正常对照组,。银屑病患者和表皮和表达水平与值均无相关性尸。进行期银屑病患者与表达水平正相关胪,与表达水平也正相关,。稳定期银屑病患者皮损表皮与表达水平正相关,进行期银屑病患者非皮损表皮与表达水平也正相关几,。结论北京协和医学院中国医学科学院博学位论文寻常型银屑病患者中和表达显著升高,可能与银屑病的免疫发病机制有关。寻常型银屑病患者表皮表达显著升高,可能在银屑病皮损的形成过程中起作用。第二部分银屑病患者吖受体基因多态性的研究采集例寻常型银屑病患者和例下常对照者外周静脉血,提取基因组。采用方法及测序方法,检测/和/位点基因多态性,研究这两个位点多态性与银屑病易感性是否相关。结果发现寻常型银屑病患者与正常对照者之间及银屑病患者各临床分组间/位点基因型及等位基因频率分布无显著差异。寻常型银屑病患者与正常对照者/位点基冈型及等位基囚频率分布无显著差异,但与部分临床分组有关。伴甲损害银屑病组与正常对照组相比,/基因型和等位基因分布频率显著升高分别为和伴甲损害银屑病与无甲损害银屑病组比较,/基因型和等位基因分布频率极显著升高分别为和。以上感为诱因或加重因素的银屑病组与正常对照组比较,/基因型和等位基因分布频率显著升高分别为和以上感为诱因或加重因素的银屑病组与并非以上感为诱囚或加重因素的银屑病组比较,/基因型和等位基因分布频率极显著升高分别为和,/基因型分布频率显著降低。早发型银屑病与迟发型银屑病组比较,/基因型和等位基因分布频率显著降低分别为和。寻常型银屑病患者与正常对照者/位点和/位点基因型组合频率分布无显著差异早发型和迟发型银屑病患者以及有家族史和无家族史银屑病患者之间/位点和/位点基因型组合频率分布也无显著差异。结论/位点和/位点与寻常型银屑病的易感性无相关性,但/位点可能与寻常型银屑病患者的发病年龄、是否伴有甲损害有关,也可能与以上感为诱因或加重因素的寻常型银屑病有关。第三部分银屑病患者受体基因多态性与表达的相关性通过分析寻常型银屑病患者基因多态性与和表皮表达的关系,发现携带/基因型和/基因型的银屑病患者中表达水平比正常对照者显著升高,携北京协和医学院中国医学科学院博二学位论文带/基因型和/基因型者表达水平极显著高于正常对照者户,。携带/基因型和厂基因型的银屑病患者表皮的表达水平均显著高于正常对照者,。结论厂位点基因多态性可能影响的转录活性,一/基因型可能增强基因的转录活性。/位点基因多态性对的转录活性也可能有影响,/基因型和/基因型可能增强基因的转录活性。【关键词】银屑病/受体受体基因多态性北京协和医学院中困医学科学院博士学位论文,一、一【、一、,。【,一丫一【,一伍一,吖北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文,仁,吩,吖/一/北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文/,/仔,至/,卢仁/,/尸兰/,一/吖北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文,/,/尸,/一/,/吖北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文缩略语焦碳酸二乙酯溴化乙啶乙二胺四乙酸二钠磷酸甘油醛脱氢酶干扰素丫受体干扰素受体干扰素受体角质形成细胞人类孟德尔遗传在线银屑病面积和严重程度指数外周血单个核细胞磷酸盐缓冲液聚合酶链反应限制性片段长度多态性等级相关系数逆转录聚合酶链反应单核苷酸多态性历尉缓冲液四甲基二乙胺伍肿瘤坏死因子仅肿瘤坏死因子受体北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。签字同期易月同即彳年学位论文作者签名丽研辘乙学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解量塞迹塑医堂瞳有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权匕塞迹塑医堂医可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书,学位论文作者签名导师签名融亏批签字日期印辟易月,眇日签字期砂,年歹月厂口日学位论文作者毕业后去向电话工作单位话科霞曼砜研邮编叨争通讯地址西骞不彩淖儡懒磕北京佛和医学院中圆医学科学院博学也论空引言年在银屑病是人类常见的慢性炎症生疾病,患病率约为我国人群中调查的总患病率为”。因其反复发作、迁延不愈在生理和心理上对患者造成了极大伤害,患者的生活质量严重下降,目前尚无完全根治银屑病的方法。银删病的病因和发病机制非常复杂,大量研究表明遗传背撖和免疫桑在发病中起着重要作用【。表皮过度增牛,炎症细胞浸涧、炎症介质释放,局部免疫学异常及真皮血管增生是银屑病发病的病理生理特点,它们之的内在联系和造成的机制尚不完全清楚。目前共有个银屑病易感基园位点被人类盂德尔遗传在线收录,即一及。已有的研究认为银屑病是淋巴细胞介导的慢性炎症性自身免疫性疾病,和细胞势在银屑病皮损和外周血中,细胞冈子一、咄和细胞因子一、高表达【,包括淋巴细胞、树突状细胞、浆细胞和小的免疫相关细胞圳子及趋化困子在内的细胞免疫系统的活化促发了的过度增殖和异常分化、血管增生。从而形成银屑病相应的临床表现”。淋巴细胞、和抗原提呈细胞足银屑病发病过程中的重要细胞。,。矗法在银屑病发病机制复杂的细胞园子网络中,促炎症因子和特征性细胞因子/是两个重要的细胞因子,对银屑病皮损的形成、维持和发展具有重要的意义【”。可以诱导和血管内皮细胞表达细胞间粘附分子北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文和选择蛋白,提供淋巴细胞和中性粒细胞粘附位点诱导其它前炎症因子如、一、一【、和的合成,具有刺激增殖及强烈的趋化中性粒细胞的作用诱导增殖增加型纤溶酶原激活物抑制剂的表达,保护细胞不发生凋亡。叫是细胞的特征性细胞因子,对细胞增殖和产生细胞因子有抑制作用。在银屑病中的生物活性有刺激抗原递呈细胞活化促使血管内皮细胞和表达一上调水平与吨协同诱导分泌促使表达诱生蛋白一促进增殖【】细胞因子受体在细胞因子发挥生物学效应的过程中起着关键作用。和吖对细胞的作用通过细胞表面和介导。分为两类。分为配体结合链,和,和信号转导链。已有的研究表明在银屑病皮损中、在水平和蛋白水平表达均升高瞄。银屑病患者表皮水平高于正常人,并且皮损处明显高于非皮损处,进行期明显高于稳定期【。有关银屑病患者和的研究尚未见有报道。受体的表达和功能异常与很多因素有关,包括编码基因的异常、调控基因的异常、细胞内信号转导过程的异常、转录和翻译过程的异常和一些负反馈或正反馈调节的异常等等。但和基因表达调控的机制尚不完全清楚,有待进一步探讨。基因组含有两类遗传信息一类是由序列提供的遗传信息,是基于基因序列改变导致基因表达水平改变,包括基因突变、基因杂合型缺失和微卫星灶不稳定等另一类是表观遗传学信息,是基于非基因序列改变所致基因表达水平改变,包括甲基化、组蛋白修饰和染色体重塑。基因表达的异常可能通过遗传学机制或表观遗传学机制而发生,遗传学机制是不可逆的,而表观遗传学机制对基因的改变是可逆的。人类不同群体和个体在生物学性状以及在对疾病的易感性/抗性上的差别,受进化过程中内外环境交互作用的结果,最终表现为基因改变。单核苷酸多态性是指在基因组水平上由于单个碱基的缺失、插入或置换而产生的一种序列多态性,是第三代遗传标记,也是人类可遗传的变异中最常见的一种,占所有已知多态性的以上。大约有的位于基因非编码区,其中一小部分位于基因调控区的位点称为调控位于基因编码区的位点包括同义和错义。研究表明,可以在、和蛋白质水平影响基因的功能。可导致氨基酸序列的改变,引起重要部位氨基酸的变异及蛋白质功能改变。位于基因启动子区的位点对基因的表达也会产生影响【。分析对基因功能有影响的的生物学意义最为重要,疾病易感性北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文和相关性研究备受关注。与自身免疫相关或与表皮增殖分化有关基因多态性与银屑病易感性的关联研究正在不断开展【孓”。目前银屑病相关基因启动子区域多态性和疾病关系的研究很少。寻常型银屑病中启动子区域与疾病易感性相关【。银屑病患者【启动子位点的基因型和频率分布与健康人相比无显著性差异,在型和型银屑病患者中也无差异,因此寻常型银屑病启动子位点与疾病易感性无关【。另一项研究表明,日本人群中寻常型银屑病一仅启动子和位点与疾病易感性无关【踟。在关节型银屑病中,有机阳离子转运蛋白启动子区域与疾病易感性相关【。然而,国内外尚未见有对银屑病中和基因启动子区域位点与疾病易感性的相关报道。那么银屑病中和基因启动子区域的位点与疾病的易感性是否存在关联这些位点与相应受体基因的表达水平是否存在一定的关联为此,我们选择和这两个重要的促炎症因子受体为切入点,研究其在银屑病发病机制中两类重要的效应细胞细胞和角质形成细胞上受体的表达,探讨和在银屑病发病机制中的作用。进一步选择有差异表达的受体基因,分析对基因功能有影响的位点,研究位点与相应基因表达之问的关系,从基因的遗传学调控机制层面探讨影响受体基因转录调控可能机制。通过实验,我们试图回答以下问题寻常型银屑病患者和和表达是否存在异常有差异表达的受体基因重要的位点与寻常型银屑病的易感性是否相关受体基因重要的位点与基因的表达水平是否存在一定的关联位点多态性是否参与影向基因的转录调控北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文本文的技术路线如下北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文实验材料标本来源银屑病外周血和皮肤标本来源于年月至年月间我院门诊和病房收治的银屑病患者。下常对照组外周血标本来源于我院健康志愿者和南京市红十字血液中心的健康献血人群。正常对照皮肤组织来源于我院外科和南京医院外科手术中切除的正常皮肤。本研究获中国医学科学院皮肤病医院医学伦理委员会批准,所有受试者均知情同意。仪器和器皿型垂直电泳仪公司力像素数码相机型离心沉淀机北京医用离心机厂高速冷冻离心机公司海门其林医用仪器厂一旋涡混合器隔水式电热恒温水浴箱上海跃进医疗器械一厂冰箱南京伯乐集团公司低温冰箱型分析天平型水平电泳仪北京六一仪器厂公司微波炉顺德格兰仕电器有限公司凝胶成像仪公司公司可调式微量移液器,肛,南京生兴生物公司管,离心管和玻璃组织研磨器江苏兴隆玻璃制品厂生化试剂天津灏洋生物制品公司淋巴细胞分离液中性酶北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文饱和酚南京生兴生物有限公司限制性内切酶限制性内切酶丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵硝酸银上海化学试剂公司附琼脂糖硼酸普通化学试剂南京化学试剂厂三氯甲烷,异丙醇,无水乙醇,磷酸氢二钠,磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,氢氧化钠,碳酸氢钠,碳酸钠,甲醛,葡萄糖,乙酸,乙酸钠溶液配制缓冲液硼酸加双蒸水至无钙镁液液氯化钠氯化钾北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文磷酸氢二钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾碳酸氢钠葡萄糖加双蒸水至氯化钠氯化钾磷酸氢二钠磷酸二氢钾加双蒸水至双丙烯酰胺丙烯酰胺双丙烯酰胺丙烯酰胺双丙烯酰胺双蒸水加热至,溶解后室温保存乙醇溶液含冰乙酸无水乙醇,冰乙酸,双蒸水硝酸银溶液硝酸银,双蒸水碳酸钠溶液碳酸钠,双蒸水过硫酸铵过硫酸铵,双蒸水,。保存硝酸溶液硝酸溶液,双蒸水/硫代硫酸钠硫代硫酸钠,双蒸水/乙酸钠三水合乙酸钠,双蒸水北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文第一部分银屑病患者受体和受体的表达实验一银屑病患者外周血单个核细胞受体和伍受体的表达目的和方法一、实验目的研究寻常型银屑病患者外周血单个核细胞和的表达分析寻常型银屑病患者外周血单个核细胞和表达与银屑病病情的关系分析寻常型银屑病患者外周血单个核细胞和表达的相关性二、实验方法病例选择入选标准年龄周岁,经临床和/或病理组织学明确诊断为寻常型银屑病,同意采集标本患者。无其它自身免疫性疾病及系统性疾病不伴发热和其它感染性疾病,无肿瘤及人类免疫缺陷病毒或人类乳头瘤病毒感染个月内未系统用过维甲酸制剂、糖皮质激素和免疫抑制剂未接受过大剂量放射治疗,个月内未做/照射治疗女性患者排除怀孕、哺乳和月经期者。寻常型银屑病进行期和稳定期诊断标准赵辨,临床皮肤病学,第三版进行期新皮疹不断出现,原有皮疹不断扩大,鳞屑厚积,炎症明显,周围有炎性红晕,可出现“同形反应”稳定期基本无新皮疹出现,原有皮疹无消退趋势银屑病皮损面积和严重指数评分方法总分代表头,代表上肢,代表躯干,代表下肢代表皮损面积一红斑,一浸润,一鳞屑,分别分为级无皮损,轻度,中度,重度,极重皮损面积量化,银屑病患者资料例寻常型银屑病患者来自于年月至年月间我院门诊和病房,北京协和医学院中国医学科学院博卜学位论文经临床和组织病理诊断确诊为寻常型银屑病。例患者中男性例,女性例,平均年龄岁,病程周至年。进行期例,稳定期例。具有银屑病家族史者例。依据进行评分,积分值,平均。正常对照组资料正常对照组例均为健康志愿者,其中男性例,女性例,平均年龄岁,性别和年龄与银屑病组相匹配,无统计学差异。的分离外周血的采集所有入组者白肘静脉采集外周血,置含的无菌真空采血管中供分离。的分离采用分层液密度梯度离心法常规分离外周血。流程如下将外周静脉血与无菌液混匀,小心加入淋巴细胞分离液中,离心分钟小心吸取中间层置于无菌新离心管中,用倍体积液离心洗涤次,弃上清取约/的移入无菌管逆转录聚合酶链反应总的提取取/的,采用提取总,方法如下试剂准备异丙醇,三氯甲烷,乙醇水配制,无水提取流程次,离心沉淀细胞液洗涤加入,反复吹打,使细胞完全溶解静置分钟,分解核蛋白复合物加入三氯甲烷,振荡秒静置分钟,离心分钟移水相至新管中,加入异丙醇,静置分钟,离心分钟。乙醇,旋涡混匀移去上清液,加入,离心分钟后弃上清沉淀空气中干燥分钟后,加入无水溶解。检测北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文的纯度为。检测含量,计算逆转录时需要模版约。保存备用。的合成采用逆转录试剂盒,按照说明书步骤进行操作。具体步骤如下取总溶液于薄壁管中孵育分钟轻微振荡后迅速置于冰上,依次加入以下各成分/重组核糖核酸酶抑制剂逆转录酶无水加至反应体系总体积为。逆转录反应条件,。逆转录产物置。保存待扩增。扩增和及的引物、反应条件和产物见表、表。表引物序列北京协和医学院中围医学科学院博士学位论文采用扩增,反应总体积为/。/。/上游引物/下游引物酶/模板灭菌双蒸水加至总体积琼脂糖凝胶电泳扩增产物加样于琼脂糖凝胶含,同时加入已知分子量的取标准作为分子量参照,在电泳缓冲液中电泳,电压,。经凝胶成像仪采集数据,用图像分析软件进行数据分析用法消除背景,先得到目的条带和内参照电泳条带的光密度体积值,单位为,再用目的条带的光密度体积值除以表达的相对半定量值。内对照光密度体积值,计算吖和结果统计分析采用统计分析软件进行统计分析。细胞因子受体表达水平的实验数据以廊表示,非正态分布数据采用秩和检验。细胞因子受体表达水平与评分以及细胞因子受体表达水平之问的关系用相关分析确定。双侧为差异有统计学意义。结果一、和的表达产物经琼脂糖凝胶电泳分离后,每一种产物均显示了一条特异性条带图、。每一条带的序列通过确认和证实,所有产物与其靶完全特异。例银屑病患者及例正常对照者和表达阳性率见表,图。表和的表达北京瞄和医学院中国医学科学腕博学位论文银屑病患者的表达均值为,其中“例进行期患者为,例稳定期忠者为叭正常对照者为。进行期银屑病患者与正常对照者相比,的表达水平升高,差异无统计学意义稳定期银屑病患者与正常对照者相比,。的表达水平接近,差异无统计学意义见表习臣图表达产物凝胶电泳幽分于量标记,常对,稳定擞屑躺出者进行期银崩璃忠肯银病患者的表达均值为,其中进行期忠者为,稳定期患者为正常对照组为。银屑病患者组与常对照比较表达水平有极显著升高,其中进行期忠者咛正常对照组比较表达极显著升高,稳定期患者与正常对照组比较表达也有极显著升高。但银厢病稳定期和进行期患者之问的表达水平无显著性差异。圈表选产物凝胶电泳图分了怀,常对照稳定期韫屑辅患者进行期刷“者银屑病患者的表达均值为,其中进行期患者为,稳定期患者为一正常对照组为。银眉病患者组图表达产物凝胶电泳图分子且标,常对稳定期锐屑病患者进行期银悄旃崽者北京协和医学院中田医学科学院博士学位论文与正常对照比较表达水平有极显著升高产,其中进行期患者与正常对照组比较表达极显著升高辟,稳定期患者与正常对照组比较表达也有极显著升高。银屑病稳定期和进行期患者之间烈的表达无差异。和图外周血单个核细胞的表达趔口正常对照纰母总银属嫡组饕银屑病进行期靛日银屑病稳定期罂簧懈秀表和表达水平差异为二、和表达水平与的关系银屑病患者和的表达水平与值无相关性见表。表和表达水平与评分的相关性北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文银屑病患者进行期或稳定期和的表达水平与值也无相关性。三、和表达水平之间的关系正常对照组和表达水平之间无相关性一,和表达水平之间无相关性以,和表达水平之问也无相关性以,见表。寻常型银屑病患者和表达水平之间无相关性,。无论是进行期还是稳定期银屑病患者和表达水平均无相关性。寻常型银屑病患者和表达水平之间正相关,其中进行期银屑病患者和表达水平之问正相关,而稳定期银屑病患者和表达水平之间无相关性珞,。寻常型银屑病进行期患者和表达水平之问正相关。,而稳定期患者和表达水平之间无相关性以,。表和表达水平之间的相关性为,幸为讨论目前认为银屑病是一种淋巴细胞介导的慢性炎症性自身免疫性疾病,和细胞占优势【】。细胞在银屑病皮损的形成、维持和发展中起重要作用。已有的研究推测细胞在银屑病的发病中可能经历活化、增殖分化、皮肤归巢和自身免疫炎症反应这四个阶段【。皮肤中活化的抗原提呈细胞主要为朗格汉斯细胞和真皮树突状细胞从皮肤迁移进入淋巴结,诱导初始细胞活化并分化成为和十细胞。活化的细胞皮肤归巢,与真皮树突状细胞、北京协和医学院中国医学科学院博十学位论文巨噬细胞、肥大细胞和中性粒细胞相互作用,释放炎症介质、一、一、和一等,起始并维持银屑病的自身免疫炎症反应,形成银屑病相应的临床表现。促炎症因子和参与了细胞作用的各阶段。活化的细胞表达和吖,吖可作为自分泌调节因子进一步刺激细胞向细胞转化并抑制细胞增殖和表达细胞因子,促进并维持细胞异常活化同时,删吖还可以上调水平并促进的表达,诱导其它促炎症因子、趋化因子如、队、和的表达。和对细胞的作用通过细胞表面相应的受体介导。分为两类,和,。分为配体结合链和信号转导链。几乎表达于所有有核细胞表面。银屑病患者外周血清中一仅和吖表达水平显著升高【,而其效应细胞上相应受体的表达情况目前国内外尚未见有相关研究报道。和的我们以方法检测了寻常型银屑病患者表达情况,发现和在正常对照者和银屑病患者中的表达阳性率为,提示和可能在中组成性表达。进行期和稳定期银屑病患者和的表达水平均显可能与著高于正常对照者。我们推测,银屑病患者异常表达的银屑病免疫发病机制有关。异常增加的受体与自分泌调节因子相互作用,通过正反馈机制促进并放大细胞活化的级联效应,可使机体短时问内就形成强大的细胞免疫应答,在细胞介导的自身免疫炎症反应的起始和维持阶段起重要作用。表达水平与银屑病病对结果进一步分析,银屑病患者显著上调的表达水平与积分情的活动性和严重程度无特定关联,这表现在无显著相关性,且进行期与稳定期银屑病患者表达水平无显著差异。提示银屑病患者本身可能存在表达异常。银屑病患者自身的遗传背景可能是造成表达异常的原因之一,目前尚未见到相关报道,其具体机制有待进一步研究。、与表达水进行期银屑病患者与平均显著正相关,而稳定期银屑病患者和下常对照组、和三者表达水平无显著相关性,提示在银屑病进行期与和有一定关联。在银屑病自身免疫炎症反应的起始和维持阶段,与、与相互作用,参与整个银屑病发病的细胞和细胞因子交互作用网络。和作为功能复合物的两个必需组成部分,在进行期银屑病患者上表达正相关,对增强吖生物效应有协同作用。有学者北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文发现,肿瘤细胞中与有相关性,能上调的表达水平,的数量增加而亲和力不变。如果抑制的合成可以阻断这一作用,证实了,能上调的转录水平。我们推测,吖可能介导和的相互作用。进行期银屑病患者表达上调,增强了吖的生物效应,通过吖上调的转录,从而增加的表达。当然,在银屑病中蜊与、与相互作用的具体机制有待进一步探讨。银屑病患者和表达高于正常对照组,且进行期高于稳定期,但差异无统计学意义,这是否提示表达在银屑病患者中无异常还需要今后扩大样本量并进一步检测受体蛋白,特别是有功能的受体蛋白来进一步明确在银屑病发病机制中的作用。北京协和医学院中国医学科学院博卜学位论文实验二银屑病患者表皮受体和受体的表达目的和方法一、实验目的研究寻常型银屑病患者表皮和的表达。分析寻常型银屑病患者表皮和表达与银屑病病情的关系。分析寻常型银屑病患者表皮和表达的相关性。二、实验方法病例选择入选标准同实验一银屑病患者资料例寻常型银屑病患者来自于年月至年月间我院门诊和病房,经临床和/或组织病理诊断确诊为寻常型银屑病。其中男性例,女性例,平均年龄岁,病程周至年。进行期例,稳定期例。具有银屑病家族史者例。依据评分,积分值,平均。正常对照组资料正常对照组例标本均为我院外科和南京医院外科手术中切除的正常皮肤,其中男性例,女性例,平均年龄岁,性别和年龄与银屑病组相匹配,无统计学差异尸。皮肤采集和真表皮分离用角膜环钻分别钻取寻常型银屑病患者皮损和皮损周围至少以外的外观正常的皮肤各一块,迅速置液氮中过夜后。冰箱保存备用。取出皮肤标本,加入中性酶将标本完全浸入其中,置。冰箱中消化小时,以用眼科镊刚好可以分离出表皮的时间为宜。用眼科镊将分离出的表皮移入用水处理过的平皿中,液洗去多余的分散酶。将表皮移入用水处理过的玻璃匀浆管中,加入适量,研磨成匀浆研磨过程始终在冰水中操作。将匀浆移入管中,直接提取总或置。冰箱保存备用。收集正常对照皮肤,处理方法同上。北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文同实验一琼脂糖凝胶电泳同实验一结果统计分析采用统计分析软件进行统计分析。细胞因子受体表达水平的实验数据以表示,非正态分布数据两独立样本比较采用秩和检验,成组样本比较为秩和检验。细胞因子受体表达水平与评分以及细胞因子受体表达水平之间的关系用相关分析确定。双侧为差异有统计学意义。结果的表达一、表皮和产物经琼脂糖凝胶电泳分离,每一种产物均显示了一条特异性条带图、。每一条带的序列通过确认和证实,所有产物与其靶完全特异。例银屑病患者及例正常对照者表皮和表达阳性率。表达水平银屑病皮损和非皮损组均高于正常对照组,其中银屑病皮损处高于非皮损处,进行期高于稳定期见表,图。表达水平在银屑病皮损组高于正常对照组,差异无统计学意义在银屑病非皮损组和正常对照组间表达均值接近。表表皮和的表达水平银屑病患者皮损的表达均值为,其中例进行期患者为,例稳定期患者为银屑病患者非皮损的表达均值为,其中例进行期患者为,例稳定期患者为正常对照者为。进行期银屑病患者皮损表达高于非皮损处和正常对照组,但差异无统计学意义。稳定期银屑病患者皮北京悱和医学院中目目学科学院博十学位论文损处和银屑病患者非皮损处表达均值接近正常对照组见表。图丧皮表达产物磁胶浊罔分干量标记正对照定银厨旃皮稳定日“皮损进行期银屑掰患者非皮损进行如房病患皮损的表达均值为进行期银屑病患者皮损较正常表皮表达均值有擞显著的升高。稳定期银屑病患者皮损的表达均值为,较下常表皮也有显著的升高,。进行期银屑病患者非皮损的表达均值为。较正常对照组有极显著的升高/淼幽雷麓鬻兰图裘皮受仆把迭“糍胶电泳幽分子量标常对照稳定期银屑辅患者非皮损稳定期馓屑腑患者皮损进行船银屑病甚肯非皮损进行期舸辅患肯皮捌银屑病患者表皮表达高于正常对照组,且银屑病皮损高于非皮。损,进行期高于稳定期,但差异无统计学意义图表皮受体表达产物凝胶电泳图升了盈标记稳窟朝银屑病患者非皮损稳定期银屑扁牡荐皮拭进行期银屑摘者非皮损进行期银屑病患青皮攒常对照北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文进行期和稳定期银屑病患者皮损和非皮损和表达水平均无显著差异。图表皮和的表达正常对愚组日馁眉瘸皮授组锻周腐非皮损组革碱斗灰且名蝈黎丕巳陬趁图银屑病皮损和的表达口锻屑痨皮擞纽进行朋银属瞒皮损虮巴稳定期锻属稍皮拭纽单嘲议斗靛巽艘群蚕图银屑病非皮损和的表达口馁厨病荸皮损组避行期银扁病非皮损纽稳定期银膊崩椎皮损组掣嘲悄井茛霹譬枚鹫薯岷北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文表表皮和表达差异幸木二、表皮和表达水平与疾病严重程度的关系银屑病皮损组和表达水平与值无相关性尸,其中进行期皮损和稳定期皮损细胞因子受体表达水平与值均无相关性见表。银屑病非皮损组和表达水平与值无相关性尸,其中进行期皮损和稳定期皮损细胞因子受体表达水平与值均无相关性。表表皮和表达水平与评分的相关性三、表皮和表达水平之间的关系和表达银屑病患者皮损和非皮损之间的关系北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文银屑病患者皮损和非皮损之间表达水平正相关,其中进行期患者皮损和非皮损之间表达水平正相关,稳定期患者皮损和非皮损之间表达水平也正相关舻,见表。银屑病患者皮损和非皮损之间表达水平正相关,其中进行期患者皮损和非皮损之间表达水平正相关以,稳定期患者皮损和非皮损之间表达水平则无相关性卢。银屑病患者皮损和非皮损之间表达水平无相关性,无论是进行期还是稳定期患者皮损和非皮损之间表达水平均无相关性。表银屑病患者皮损和非皮损和表达水平之间的相关性,尸表皮和表达水平的相关性分析正常对照组表皮和表达水平之间、和表达水平之间、和表达水平之间三者均无相关性尸见表。寻常型银屑病患者表皮和表达水平无相关性尸。无论是进行期还是稳定期,无论是皮损还是非皮损和表达水平均无相关性。寻常型银屑病患者表皮和表达水平无相关性尸。无论是进行期还是稳定期,无论是皮损还是非皮损和表达水平均无相关性尸。寻常型银屑病患者皮损和表达水平显著正相关,其中进行期患者和表达水平之间无相关性几,而稳定期患者和表达水平之间显著正相关。,。寻常型银屑病患者非皮损和表达水平显著正相关,其中进行期患者和表达水平显著北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文正相关,而稳定期患者和表达水平无显著相关性珞,。表表皮和表达水平之间的相关性事,宰尸讨论在银屑病的发病中,既是靶细胞,又是免疫活性细胞。作为重要的靶细胞,其膜表面的细胞因子受体在传递免疫信号以及介导异常增生的病理过程中发挥重要的作用。生物学行为异常,表现为过度增殖,异常分化,形成银屑病典型皮损。可以诱导表达细胞问粘附分子一和选择蛋白,提供淋巴细胞和中性粒细胞粘附位点诱导其它前炎症因子如、和的合成,具有刺激增殖及强烈的趋化中性粒细胞的作用诱导增殖。表达上调水平与仅一同诱导分泌促使表达诱生蛋白吖可以促进增殖【】。促炎症因子和趋化因子等的相互作用,银屑病的发病形成了一个自我增强的过程。已有研究证实,在银屑病皮损中、在水平和蛋白表达水平表达均升高【】。水平高于正常人,并且皮损处明显高于非皮损处,进行期明显高于稳定期【。在银屑病皮损和正常皮肤中均有表达,但分布有差异【。我们以方法检测了寻常型银屑病患者皮损和非皮损和的表达情况,发现和在银屑病患者皮损和非皮损以及正常对照者表皮的表达阳性率为,提示和可能在中组成性北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文表达。进行期和稳定期银屑病患者表皮的表达水平均显著高于正常对照者,这与之前的研究报道相符【。与以往研究不同的是,银屑病患者显著上调的表达水平与银屑病病情的活动性和严重程度无特定关联。与实验一的表达水平可能与患者的研究结果相结合,进一步支持银屑病患者自身遗传背景有关这一观点。进行期银屑病患者表皮表达高于正常对照组,且皮损处高于非皮损处,进行期高于稳定期,但差异无统计学意义,这与以往文献不完全一致【。是否这与选择的患者病情严重程度、病程不同有关,或者与不同人群有关,尚不完全清楚。银屑病患者皮损和非皮损表皮和两者表达显著正相关,而正常对照组无此关联,提示和可能发挥协同作用,上调功能复合物的水平,增强吖生物效应,促进银屑病皮损的形成和发展。其相互作用的具体机制尚不清楚,有待进一步研究。北京协和医学院中国医学科学院博上学位论文实验三银屑病患者外周血单个核细胞和表皮受体和仅受体表达的相关性目的和方法一、实验目的分析寻常型银屑病患者外周血单个核细胞和表皮和表达的相关性二、实验方法病例选择入选标准同实验一标本来源银屑病患者组从前两部分实验的银屑病患者标本中选取例同时采集和皮损及非皮损组织的患者。其中男性例,女性例,平均年龄岁,病程周至年。进行期例,稳定期例。具有银屑病家族史者例。依据进行评分,积分值,平均。正常对照组正常对照组同实验一,表皮正常对照组同实验二。皮肤采集和真表皮分离已在实验二中完成分离已在实验一中完成已在实验一中完成琼脂糖凝胶电泳已在实验一、二中完成结果统计分析采用统计分析软件进行统计分析。细胞因子受体表达水平的实验数据以汹表示,银屑病、皮损和非皮损表皮细胞因子受体表达水平之问为成组样本,相关性分析采用相关分析方法确定。双侧为差异有统计学意义。北京协和医学院中国医学科学院博士学位论文结果和表皮和表达水平见表。表表皮和和表达水平寻常型银屑病患者表皮和表达水平无显著相关性尸。进行期和稳定期患者表达水平与皮损表表达达水平均无显著相关性尸进行期和稳定期患者水平与非皮损表达水平均无显著相关性见表。和表表皮和表达的相关性稳定期银屑病患者非皮损表皮和表达水平极显著负相关表吩,/进行期银屑病患者非皮损表皮和达水平无显著相关性。进行期和稳定期患者皮损表皮和表达水平无显著相关性。稳定期银屑病患者皮损表皮和表达水平极显著正相关北京协和医学院中国医学科学院博十学位论文表达吩,进行期银屑病患者皮损表皮和水平无显著相关性尸。进行期和稳定期患者非皮损表皮和表达水平无显著相关性。讨论在银屑