分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质的微观辨证的研究（可编辑）

分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质的微观辨证的研究南方医科大学级硕士学位论文分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质的微观辨证研究课题来源广东省中医药局课题佛山市科技攻关项目业专名称中西医结合临床学位申请人文凤妮指导教师吴正治研究员张继平研究员答辩委员会主席方永奇教授答辩委员会成员周迎春教授李常青研究员李鹏副教授张英俭主任医师论文评阅人方永奇教授李常青研究员李鹏副教授年月日广州硕士学位论文分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质微观辨证研究硕士研究生文凤妮指导老师吴正治研究员张继平研究员摘要“微观辨证”是中西医结合研究的产物,也是中医现代化的具体表现之一。二十世纪年代,沈自尹院士首次在微观辨证和辨证微观化一文中明确提出“微观辨证”这一新概念,随后郭振球教授提出了“辨证微观化”和“微观辨证学”的概念,经导师吴正治研究员进一步发展和完善了微观辨证学的学科概念,明确提出“微观辨证学是在传统中医理论指导下,运用现代多学科方法和技术,从微观领域探讨中医诊法和辨证原理,阐明“证”的现代科学实质及其病理变化规律,并为中医临床诊断提供客观化、微观化、定量化依据的中西医结合现代新兴基础学科。”并率先系统地提出和探讨了其学科性质、学科框架、学科历史阶段及学科发展方向,推动了本学科的创立和发展。微观辨证学的创立,具有阐明证候的病理生理基础,帮助中医临床的早期诊断,促进中医证候诊断规范化,有助于临床疗效的客观评价和促进中医学术创新和学科分化,该学科的深入系统研究将带动传统中医病机学、中医诊法学、中医辨证学、中医治则学等众多学科的深入拓展和现代跨越,对于促进中西医结合基础学科群的发展和中医现代化具有重要意义。随着以辨证论治为核心的中西医结合研究的广泛深入,微观辨证学学科不断发展成熟,该学科现已分化拓展出微观诊法学、微观证候学及微观证治学三大相互关联的领域和方向。微观诊法学以舌诊和脉诊为代表,用现代科学方法中文摘要阐明舌苔和脉象原理,实现舌诊和脉诊的客观化、微观化和现代化微观证候学是应用现代多学科先进技术将传统辨证提高到细胞、亚细胞、分子乃至基因水平,以阐明中医证候的现代科学实质及其微观变化规律微观证治学是基于中医辨证论治的原则,结合疾病的微观辨证进行中药干预效应研究,以探讨疾病的微观证治规律。而微观证候学是目前微观辨证学的主要研究领域。,是耳科常见病,发病率较高,分泌性中耳炎临床常以耳闷、耳鸣、阻塞感及听力下降为主要表现,其特征为鼓室内积液,易反复发作,日久形成粘连性中耳炎,导致长期听力障碍。祖国医学虽无“分泌性中耳炎”病名,但相当于祖国医学的“耳胀耳闭”,耳胀多为病之初起,以耳内胀闷为主,或兼有疼痛,多因风邪侵袭而致,所以古人又有“风聋”之称耳闭多为病之久者,耳内如物阻隔,清窍闭塞,听力明显下降,多为耳胀反复发作,邪毒滞留耳窍,迁延日久转化而致,故古代医籍中又有“气闭耳聋”之称。中医耳鼻咽喉科学将“耳胀耳闭”辨证分为四型,但结合岭南地区气候、地域特点,临床以风热上壅、经气痞塞型简称风热型,肝胆湿热、上蒸耳窍型简称湿热型和邪毒滞留、痰瘀交阻型简称痰瘀型多见。现代医学认为,的病因和发病机理目前尚未明确,主要涉及中耳负压、感染、咽鼓管表面活性物质、免疫学说及多因素复合作用学说等。患者的中耳积液,主要是中耳腔炎性渗出所致,近几年研究表明,炎性介质如组胺、羟色胺、白介素、肿瘤坏死因子婚、血小板活化因子、内皮素等与形成关系密切,在炎症的发生、发展过程中起着重要的作用,其中与在起始阶段起关键性作用。有学者发现患者血清和中炎性介质有一定的分布规律,对指导治疗具有一定的临床意义,但不同辨证分型与血清和积液中炎性介质如、等水平的相关性,目前尚未见报道。本论文采用酶联免疫吸附实验法测定患者不同辨证分型血清中的、含量硕士学位论文和积液中含量,并与正常健康对照组对照,以探讨不同辨证分型血清和积液中炎性介质含量的变化特征,为微观辨证提供客观的临床实验依据。目的观察患者血清中、和积液中炎性介质含量与中医辨证分型的关系,探讨各辨证分型和血清中炎性介质含量的变化特征,为微观辨证提供客观的临床实验依据,阐明炎性介质在发病和疾病进程中的作用实质,丰富中医诊断学微观辨证的内涵,促进中医临床辨证客观化和微观化。方法根据中医耳鼻咽喉科学对的辨证分型,于年月年月,在佛山市第二人民医院耳鼻咽喉科门诊,收集不同辨证分型风热型例,湿热型例,痰瘀型例,并与正常健康对照组简称正常组例对照,采用法测定各组和血清中炎性介质、含量,并与正常健康对照组血清中炎性介质、含量对照分析。结果、患者风热型、湿热型、痰瘀型血清中的含量分别为、,正常组血清中含量为一,湿热型最高,痰瘀型最低,风热型和正常组次之各证型血清含量比较,正常组显著低于风热型和湿热型均为,但与痰瘀型无显著差异风热型显著低于湿热型,却显著高于痰瘀型和正常组均为湿热型显著高于风热型、痰瘀型和正常组均为痰瘀型显著低于风热型和湿热型均为但与正常组无显著差异。、患者风热型、湿热型、痰瘀型血清中的含量分别为、,正常组血清中含量为,患者血清中含量湿热型最高,痰瘀型最低,风热型和正常组次之各中文摘要证型血清含量比较,正常组显著低于风热型和湿热型和,但与痰瘀型无显著差异风热型显著低于湿热型,却显著高于痰瘀型和正常组和湿热型均显著高于风热型、痰瘀型和正常组、和痰瘀型显著低于风热型和湿热型和,但与正常组无显著差异。、患者风热型、湿热型、痰瘀型血清中的含量分别为士、士、士一,正常组血清中含量为士,患者血清中含量湿热型最高,痰瘀型最低,风热型和正常组次之各证型血清含量比较,正常组显著低于风热型和湿热型和,但与痰瘀型无显著差异风热型显著低于湿热型,却显著高于痰瘀型和正常组和湿热型均显著高于风热型、痰瘀型和正常组、和痰瘀型显著低于风热型和湿热型和,但与正常组无显著差异。、患者风热型、湿热型、痰瘀型中的含量分别为士、士。、士,患者中含量湿热型最高,痰瘀型最低,风热型次之各证型中含量比较,风热型显著低于湿热型,却显著高于痰瘀型湿热型均显著高于风热型和痰瘀型均为痰瘀型显著低于风热型和湿热型均为。、患者风热型、湿热型、痰瘀型血清中的含量分别为士、士,而中的含量分别为士、士、,患者血清和积液中含量均为湿热型最高,痰瘀型最低,风热型次之各证型血清和积液中含量比较,风热型和湿热型积液中含量均显著高于血清中含量均为,但患者痰瘀型积液中含量与血清中无显著差异。、患者各证型血清中、含量和积液中含量变化硕士学位论文特征一致,均以湿热型最高,风热型次之,痰瘀型最低,三型之间差异显著,有统计学意义,血清中、含量和积液中含量湿热型和风热型均显著高于正常组和痰瘀型,湿热型又显著高于风热型,说明患者血清中、三种炎性介质和积液中在各证型中的含量变化规律一致,在患者血清和积液中、的高表达是湿热型的特征,而中表达则是风热型的特点,痰瘀型则以低表达为主而且湿热型和风热型患者中含量升高比血清中含量升高更显著,差异有统计学意义而痰瘀型中含量与血清中含量差异不显著,无统计学意义。结论、患者各证型血清中、含量和积液中含量变化特征一致,均以湿热型最高,风热型次之,痰瘀型最低,三型之间差异显著,可以作为证型辨证的微观依据、血清中、含量和积液中含量湿热型和风热型均显著高于正常组和痰瘀型,湿热型又显著高于风热型,在患者血清和积液中、的高表达是湿热型的特征,而中表达则是风热型的特点,痰瘀型则以低表达为主、湿热型和风热型患者中含量比血清中含量还显著升高,而痰瘀型中含量与血清中含量差异不显著,说明患者湿热型和风热型中含量将比血清中含量变化更具有微观诊断价值、患者血清和中炎性介质、对患者微观辨证分型具有一定的参考价值,为中医微观辨证提供了客观的临床实验依据,丰富了中医诊断学微观证候学的内涵,对促进中医临床辨证客观化和微观化具有重要的理论和临床意义。关键词分泌性中耳炎微观辨汪血小板活化因子白介素内皮素硕士学位论文。,“”,“”,一,“”,硕士学位论文,“,“”,一,、,“”,硕士学位论文,九,晰,一,卢,够俨,伊,。一,一,俨,一,卢一、析,士,尸铂,尸,硕士学位论文,尸,俨胆诵,、,、析俨一、析一,一“,谢,、,一一,惭谢,硕士学位论文目录摘要二第一章前言。微观辨证学的创立和发展炎性介质在中的作用第二章分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质微观辨证研究资料与方法结果一讨论第三章结论参考文献中英文缩略词表攻读学位期间成果致谢学位论文原创性声明研究生毕业论文统计学审稿证明硕士学位论文第一章前言微观辨证学的创立和发展微观辨证学的发展沿革与科学内涵“微观辨证”是中西医结合研究的产物,也是中医现代化的具体表现之一【】。二十世纪年代,沈自尹院士首次在微观辨证和辨证微观化一文中明确提出“微观辨证”这一新概念,指在临床收集辨证素材过程中,引进现代科学,特别是现代医学的先进技术,发挥它们长于在较深入的层次上,微观地认识机体的结构、代谢和功能特点,更完整、更准确、更本质地阐明证的物质基础,从而为辨证微观化奠定基础【】随后郭振球教授提出了“微观辨证学”的概刽危北海教授进一步明确了“微观辨证”主要是运用各种现代科学方法,对各类中医证型患者进行内在的生理、生化、病理和免疫微生物等各方面客观征象的检查分析,旨在深入阐明证候的内在机理,探讨其发生发展的物质基础和提供可作为辅助诊断的客观定量化指标【】而匡萃璋教授则认为所谓“微观辨证”,实际上是企图用某种或某些生理生化指标作为描述证候的内在依据的一种方法【导师吴正治研究员师从于郭振球教授,经过多年的潜心研究,进一步发展和完善了微观辨证学的学科概念,明确提出“微观辨证学是在传统中医理论指导下,运用现代多学科方法和技术,从微观领域探讨中医诊法和辨证原理,阐明证的现代科学实质及其病理变化规律,并为中医临床诊断提供客观化、微观化、定量化依据的一门中西医结合现代新兴基础学科。”并率先系统提出和探讨了其学科性质、学科框架、学科历史阶段及学科发展方向,推动了本学科的创立和发展。随着“辨证论治”为核心的中西医结合研究的广泛深入,微观辨证学学科不断发展成熟,该学科现已分化拓展出微观诊法学、微观证候学及微观证治学三大相互关联的领域和方向【。微观辨证学对祖国医学发展的作用微观辨证学的创立和发展对祖国医学的现代化具有划时代意义。首先它可阐明证候的病理生理基础辨证不仅是对机体外在证候与功能的认识,微观辨证学研究则是对证候内在生理生化基础和第一章前言病理本质的认识其次能帮助中医临床的早期诊断微观辨证在“无证可辨”指有病而无证、证候不太明显有若干症状而未能构成证、证候复杂以致辨证困难的情况下可以从微观角度提供佐证,同时对某些疾病的发展过程中有微观的变化而未能形之于外的所谓“隐潜性证”的早期诊断提供帮助,可以提高临床早期诊断的准确率并正确地指导治疗再能促进中医证候诊断规范化随着对“证的微观基础进行大量探索性的工作,求得具有规律性的内容,以期总结出“证”的定性定量的诊断标准,可以促进中医辨证诊断规范化和标准化还有助于临床疗效评价的客观化传统中医诊断与疗效标准欠规范与客观,说服力有待增强。“微观辨证”的应用有助于中医证候的疗效评价体系的科学规范,以利于提高中医药疗效评价的客观性和科学性并能促进中医学术创新和学科分化该学科的深入系统研究,将带动传统中医病机学、中医诊法学、中医辨证学、中医治则学等众多学科的深入拓展,对于促进中西医结合基础学科群的发展和中医现代化具有重要意义并必将产生深远影响【。开展微观辨证学研究的系列成果及价值中医证候本质与辨证客观化、微观化和定量化是中西医结合基础研究和中医现代化的重大关键课题。多年来,导师吴正治研究员带领的课题组在该领域进行了积极的探索和系列研究【。发展了微观辨证学的学科概念提出了“微观辨证学是在传统中医理论指导下,运用现代多学科方法和技术,从微观领域探讨中医诊法和辨证原理,阐明证的现代科学实质及其病理变化规律,并为中医临床诊断提供客观化、微观化、定量化依据的一门中医现代新兴学科。其主要任务即是解决中医诊法和辨证的客观化、微观化和定量化问题。”发展和深化了沈自尹院士和郭振球教授等提出的微观辨证学概念,使微观辨证学的学科概念更加严谨、科学,内涵更加丰富【。提出了微观辨证学的学科性质与学科框架微观辨证学属于中西医结合基础学科范畴,为近年以“辨证论治”为核心的中西医结合基础和应用基础研究逐步开拓发展起来的新兴学科。该学科旨在从微观水平阐明中医病证的病理硕士学位论文实质,其研究将促进对人体气血、脏腑、经络的生命科学本质及其治法方药的微观规律认识。其学科框架包括微观诊法学、微观证候学及微观证治学三大相互关联的研究领域【。界定了微观辨证学的内涵与外延学科内涵本学科属于中西医结合基础范畴,为近年以辨证论治为核心的中西医结合基础和应用基础研究逐步开拓发展起来的新兴学科,包括微观诊法、微观辨证及微观证治学三大相互关联的领域和研究方向【。学科外延运用现代多学科的技术方法研究阐明舌苔形成和变化原理、证候微观病理生理特质及其微观辨治规律,该领域的深入系统研究将带动传统中医诊法学、中医辨证学、中医治则学等众多学科的发展【】。探讨了微观辨证学的历史进程与发展方向将中医辨证学的发展划分为经典辨证学、微观辨证学和系统辨证学三个历史阶段。“宏观辨证”继承经典辨证学的精髓,并汲取现代证候规范化的成果“微观辨证”深入揭示中医证候的微观特质及其变化规律“系统辨证学”是对生命现象和本质规律的研究基于整体、联系和动态的观点,它在细胞、组织、器官和生物体整体水平研究结构和功能各异的各种分子及其相互作用,并通过计算生物学来定量描述和预测生物功能、表型和行为。“系统辨证”基于系统生物学研究方法融合宏观辨证和微观辨证研究成果于一体,为中医辨证学发展的高级阶段。微观辨证学是对宏观传统辨证的创新发展,是中医辨证学发展和现代化的必然趋势,系统辨证学则是中医辨证学未来发展的历史方向【】。开创了细胞化学与微观辨证学研究新领域细胞生物学认为细胞是生物体结构和功能的基本单位。人体证候的寒热虚实离不开细胞生命活动的强弱盛衰,而细胞生命活动的强弱,很大程度上取决于细胞内各种化学物质的质与量。鉴于此,我们运用定量细胞化学现代新技术开展微观辨证学研究,通过观察微量化学反应来确定和测量不同证候病人某些特定组织细胞内各种微量和超量化学物质,进而了解其代谢特点及生理病理规律,开创了微观辨证学的新领域。第一章前言在气血辨证、阴阳辨证、寒热辨证的细胞化学研究和脾虚证免疫细胞与虚实辨证红细胞免疫功能研究方面取得了较好的成绩。建立了微观证候学的雏型“微观证候学是微观辨证学的主要研究领域,它应用现代多学科先进技术将传统辨证提高到细胞、亚细胞、分子乃至基因水平,以阐明中医证候的现代科学实质及其微观变化规律。建立基于分子整体水平、有中医特色的舌苔、唾液及血液蛋白质组学微观辨证研究方法与技术平台,为中医特色的分子水平无创性检查和整体化微观辨证学研究开辟了新的领域阐明了中医寒、热、虚、实等纲领性证候的特征性微观物质基础及其转化规律,并通过病证结合微观辨证研究,探索若干大病常见证候的特征性微观生物学标志指标/指标群,探讨同病异证、异病同证的微观物质基础、现代科学本质和内涵逐步建立和完善了微观辨证学学科体系,促进了中医诊断学的学科分化和中医辨证学现代化【。炎性介质在中的作用炎性介质在临床发病中的作用发病与中耳负压、感染、变态反应、咽鼓管表面活性物质、免疫学说及多因素复合作用学说等有关。近年来,炎性介质与的关系已经受到关注,的中现已可检出的生物活性物质有、组胺、乙酰胆碱、缓激肽、肝素、受体、花生四烯酸的代谢产物及咽鼓管表面活性物质、神经肽、干扰素、核转录因子、一氧化氮、免疫球蛋白等,其来源为渗出的炎性细胞或中耳粘膜细胞以及血液等【。血管壁通透性增高是另一个导致发生的一个非常重要的病理因素,因而成为炎症研究中的重要课题。因可促进多形核白细胞和单核细胞聚集、趋化和颗粒分泌,体内注射可引起体循环血液浓缩、血管通透性增加,还是能够使血浆从血管内转移到间质腔的最有力的内源性物质之一,、是三个作用最强的炎性介质,在炎症的发生、发展过程中起着重要的作用。当机体受到致炎硕士学位论文因素作用后,首先是炎性粒细胞的游走、趋化及氧自由基的产生或炎性介质、等的释放,继而产生一系列的生物效应】与多种炎性介质如、等相互诱导合成、释放协同参与作用,共同形成一反馈网络系统,其中在这个反馈网络系统的开始阶段起关键性的作用【。姚雅芬发现实验性和患者血清中、一氧化氮合酶含量均明显高于正常对照组,中、含量均明显高于血清中含量,合成抑制剂抗氧化剂抗生素治疗后血清、含量明显低于单纯应用抗生素组【】韩朝冬发现、在患者中的表达率分别为和,早期积液中含量高于晚期,浆液性含量亦较甜陈穗俊发现患者的中的浓度明显高于血清,患者组血清中浓度较健康对照组高,急性期较慢性期组耐】陈静发现患者中水平明显增高,检出阳性率为,粘液性较浆液性积液显著增高,的浓度和病程呈正相关【】高为华发现患者中检出率为/】林国武发现患者、含量中明显高于血浆含量】郭敛容和梁象逢发现的中浓度在中高于血清,在急性粘液性积液中高于浆液性积液【锄】章诗富发现中的白介素一受体浓度高于血清,组血清水平明显高于对照纠】任基诰发现和血清中和的水平明显升高【】唐永元发现患者血清显著高于正常对照组【】王智楠发现患儿组、在中含量较血浆中高,患儿组的血浆含量较对照组高,说明细胞因子参与了介导中耳局部的炎性反应【】邵佩芬发现患儿明显增高【】梁耕田发现患者中阳性率为,粘液性积液中的含量高于浆液组【】陈亮发现患者中浓度明显高于血浆中浓度,患者血浆中浓度明显高于健康对照组粘液性中浓度明显高于浆液性,是中耳积液中的重要炎性介质,它与疾病的持续状态相关【】第一章前言,等均发现患者的血清和中存在高浓写度的,其与的发病和病情进展关系密切引。炎性介质在动物模型发病中的作用刘卫红应用灭活肺炎链球菌注入豚鼠中耳腔,制作动物模型,检测致病豚鼠鼓室黏膜上皮在注入细菌后和的表达,结果【和的表达也出现相应波动【王秋菊在内窥镜引导下对豚鼠行双侧咽鼓管管内烧灼,复制实验性动物模型,豚鼠纤维粘连蛋白和层粘连蛋白在中耳粘膜的表达比正常豚鼠增强陈亮将不同浓度的从耳后切口注入豚鼠右侧中耳鼓泡,复制豚鼠模型,结果注入组与对照组相比血管通透性均有所增加,说明可引起中耳粘膜血管通透性升高,是其引起产生的重要机】郭志强用大鼠于左侧中耳注射脂多糖并同时切断同侧三叉神经第三支下颌神经制备大鼠模型,结果左侧中耳粘膜上皮细胞和血管内皮细胞中仅及细胞间粘附分子的表达均较对照组明显增强【】祝威采用大鼠中耳腔注射制备模型,结果实验组在第、天均有的表达,的表达贯穿于始终【】张静采用心制备豚鼠动物模型,结果听阈升高耳,以低频为主,鼓膜呈内陷状,病理改变主要在中耳腔、咽鼓管,中耳腔有不同程度的渗出,以浆液性为主,说明可导致中耳粘膜的炎症反应及中耳腔渗出】,等发现可成功复制动物模型,模型血清和中、含量明显升高,而拮抗剂可明显降低含量的升高【纠。患者辨证分型与炎性介质的关系祖国医学将称为“耳胀”、“耳闭”,临床分为风邪外袭、痞塞耳窍证早期,肝胆湿热、上蒸耳窍证中期,脾虚失运、湿浊困耳证后期和邪毒滞留、气血瘀阻证晚期四型。我们前期为探讨中医不同辨证分型患者血清和积液中、酮前列环素、水平的相关性,将患者分为风热上壅型与痰瘀交阻型,并与正常健康人进行对比研究发现,不同证型患者血清与正常组比硕士学位论文较差异均有显著性意义而两种证型中明显比血清中高痰瘀交阻型中比风热上壅型患者高两组比较差异有显著性意义。两型中比血清中明显升高,而两型之间比较差异无显著性意义。不同证型血清中均比正常组升高,两证型之间比较,痰瘀交阻型比风热上壅型高,风热上壅型中水平与血清中相当,差异无显著性意义,但痰瘀交阻型中水平比血清中明显升高,提示患者中风热上壅、经气痞塞型明显低于邪毒滞留、痰瘀交阻型,含量与病程呈正相关而两型之间无明显差异,提示可以作为风热上壅、经气痞塞型与邪毒滞留、痰瘀交阻型的微观辨证指标【】。是耳科常见病,发病率较高,临床常以耳闷、耳鸣、阻塞感及听力下降为主要表现,其特征为鼓室内积液,易反复发作,日久形成粘连性中耳炎,导致长期听力障碍【。祖国医学虽无“分泌性中耳炎”病名,但相当于祖国医学的“耳胀耳闭”,耳胀多为病之初起,以耳内胀闷为主,或兼有疼痛,多因风邪侵袭而致,所以古人又有“风聋”之称耳闭多为病之久者,耳内如物阻隔,清窍闭塞,听力明显下降,多为耳胀反复发作,邪毒滞留耳窍,迁延日久转化而致,故古代医籍中又有“气闭耳聋”之称。中医耳鼻咽喉科学虽将“耳胀耳闭”辨证分为四型【,但结合岭南地区气候、地域特点,临床以风热上壅、经气痞塞型简称风热型,肝胆湿热、上蒸耳窍型简称湿热型和邪毒滞留、痰瘀交阻型简称痰瘀型三型多见。患者的主要是中耳腔炎性渗出所致,近几年研究表明,炎性介质如组胺、等与形成关系密切,在炎症的发生、发展过程中起着重要的作用,其中在起始阶段起关键性作用。患者血清和中炎性介质有一定分布规律【】,对指导治疗具有一定的指导意义,但不同辨证分型与血清和积液中炎性介质如、等水平的相关性,目前尚未见报道。探讨患者不同辨证分型血清中的、和积液中含量,并与正常健康对照组对照,分析不同辨证分型血清和积液中炎性介质含量的变化特征,为微观辨证提供客观的临床实验第一章前言依据,对丰富中医诊断学微观证候学的内涵,促进中医临床辨证客观化和微观化具有重要的理论和临床意义。硕士学位论文第二章分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质微观辨证研究资料与方法病例来源病例均来源于年月年月在佛山市第二人民医院耳鼻咽喉科门诊的患者并取我院体检中心体检为所有体检指标均无异常的正常健康者作为正常组对照。诊断标准参照耳鼻咽喉科诊断学诊断标准【】上呼吸道感染后出现耳堵塞感、闷胀感为主要症状,或伴有听力减退,或自听过强,或耳内疼痛,或低频耳鸣纯音测听为传导性耳聋声导抗测试为平坦型型鼓室导抗图鼓膜有积液征。具有第项和第项其中之一者即可诊断为本病。中医辨证分型标准参照中医耳鼻咽喉科学、中西医结合耳鼻咽喉科学【,并结合岭南地区气候、地域特点,将患者辨证分型分为风热上壅、经气痞塞型简称风热型,肝胆湿热、上蒸耳窍型简称湿热型,邪毒滞留、痰瘀交阻型简称痰瘀型。风热型耳内胀闷闭塞感,或有耳内疼痛,耳鸣如风声,听力突然减退鼓膜微红充血,内陷或有鼓室积液征,鼓膜穿刺可抽出清稀积液伴见头昏痛、鼻塞、涕粘黄、咽干咽痛,或有咳嗽舌质偏红、苔薄黄,脉浮略数。湿热型第二章分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质微观辨证研究耳内胀闷堵塞感,耳内微痛,耳鸣如机器声,自听增强,重听检查见鼓膜内陷,周边轻度充血,或见液平面,鼓膜穿刺可抽出黄色较粘稠的积液患者烦躁易怒,口苦口干,胸胁苦闷舌红苔黄腻,脉弦数。痰瘀型耳内胀闷闭塞,经久不愈,听力减退逐渐加重,或伴耳鸣如蝉,或嘈杂声鼓膜内陷,鼓膜穿刺可抽出少量粘稠的积液,咽鼓管不通或欠通畅全身可伴肺、脾、肾虚之证如饮食减少、腹胀便溏、腰膝酸软、头晕目眩、失眠多梦舌质黯或有瘀点,脉弦或涩。观察病例纳入标准符合诊断及中医辨证分型标准者有中耳积液者愿意配合本研究实施,同意抽肘静脉血和进行鼓膜穿刺抽取中耳积液治疗者。观察病例排除标准鼻咽癌引起中耳积液的患者无中耳积液者妊娠或哺乳期妇女合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病及精神病患者不同意抽肘静脉血或进行鼓膜穿刺抽取中耳积液治疗者不符合纳入标准或资料不全等影响判断者。病例标本采集方法对符合诊断标准和观察病例纳入标准的患硕士学位论文者,先由两位具有副主任中医师资格以上职称的中医临床医师,依据中医辨证分型标准进行临床辨证,两者中医辨证证型一致者才纳入观察病例,两者中医辨证证型不一致者则剔除。本研究共纳入观察的病例例和正常对照组例,在肘静脉抽血,所取血液注入含二钠和抑肽酶的试管中,混匀,离心,分离血清,置于冰箱中保存,集中统一测定四。患者的采集【】用碘伏和酒精棉球对患者的外耳道常规消毒,鼓膜用丁卡因滴入外耳道作表面麻醉,严格无菌操作下于鼓膜前下象限穿刺抽取积液,/离心,取上清液封口标记,置于冰箱中保存,统一测定。采用由广州市达晖生物科技有限公司提供的人血清型和组织型、血清型和血清型酶联免疫含量测定试剂盒,运用法测定患者不同辨证分型血清和积液中的含量,以及血清中的、,测定严格按试剂盒说明书操作。实验主要仪器设备仪器公司酶标公司分析仪低速冷冻离心机安徽科大创新股份公司中佳分公司型电热恒温干燥箱广东东方红医疗器械厂旋涡混合器上海医科大学仪器厂超低温生物冰箱日本公司型电子天平日本公司病例标本测定方法血清测定方法采用酶联免疫吸附实验法检测血清含量第二章分泌性中耳炎患者血清和积液中炎生介质微观辨证研究【。实验前试剂盒应平衡至室温。再实验。取出所需反应板,分别加入标准品、已稀释血清于相应反应板孔中,轻轻混匀。,轻轻混匀。温育。每孔加入洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。,轻轻混匀。温育。每孔加入洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。每孔加入显色液,轻轻混匀,置暗处温育。轻轻混匀立刻在处读每孔加入终止液值。以值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据血清样品的值可在标准曲线上查出其浓度。积液测定方法采用酶联免疫吸附实验法检测积液中含量。实验前取出试剂盒平衡至室温再实验。取出所需反应板,分别加入标准品、标本中耳积液于相应反应板板孔中。轻轻混匀秒,封住板孔,温育分钟。洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板每孔内加入洗涤液,并去除水滴在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。每孔加入。轻轻混匀秒,封住板孔。温育分钟。洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板每孔内加入洗涤液,并去除水滴在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。每孔加入。轻轻混匀秒,封住板孔,温育分钟。洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板每孔内加入洗涤液,并硕士学位论文去除水滴在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。每孔加入显色液和显色液,轻轻混匀秒,暗处温育分钟。轻轻混匀秒立刻在处每孔加入上终止液读取值。以值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,制作标准曲线。根据样品的值可在标准曲线上查出其浓度。血清测定方法采用酶联免疫吸附实验法检测血清含量。实验前试剂盒应平衡至室温再实验。取出所需反应板,分别加入标准品、“已稀释血清于相应反应板孔中轻轻混匀。每孔加入,轻轻混匀。温育。洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。,轻轻混匀,温育。每孔加入洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。显色液,轻轻混匀,置暗处温育。每孔加入轻轻混匀内在处每孔加入终止液读取值。以值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据血清样品的值可在标准曲线上查出其浓度。血清测定方法采用酶联免疫吸附实验法检测血清含量。实验前试剂盒应平衡至室温再实验浓缩洗涤液用双蒸水稀释至。取出所需反应板,样品稀释倍血清加样品稀释液,标准品第二章分泌性中耳炎患者血清和积液中炎性介质微观辨证研究不稀释。分别加入标准品、已稀释血清于相应反应板孔中。每孔加入酶联物,轻轻混匀。室温温育分钟。洗板甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,在厚叠吸水纸上拍干反复洗涤次。显色液,轻轻混匀,置温育。每孔加入。轻轻混匀确定兰色变为黄色后,每孔加入终止液内在处读取值。以值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据血清样品的值可在标准曲线上查出其浓度。统计学处理所有实验数据采用统计软件进行统计分析,计量资料数据以均数士标准差士表示。多个样本均数