rage和hmgb1在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达及临床意义

RAGE和HMGB1在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达及临床意义南方医科大学级硕士学位论文和在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达及临床意义课题来源国家自然科学基金资助项目广东省自然科学基金资助项目业专名称泌尿外科学学位申请人赵楚标指导教师赵善超教授高新教授答辩委员会主席刘春晓教授答辩委员会成员刘久敏教授谭万龙教授韦安阳教授论文评阅人郑少斌教授丘少鹏教授年月日广州硕士学位论文禾在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达及临床意义硕士研究生赵楚标指导教师赵善超摘要前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率尤其在欧美发达国家甚高。年美国成年男性新发恶性肿瘤约万,将近三分之一为前列腺癌。年,在全球男性新发恶性肿瘤中,前列腺癌占男性新发恶性肿瘤的,位居第二位,前列腺癌的死亡率占男性恶性肿瘤死亡率,位列第六位。目前,我国的前列腺癌发病率还远低于欧美国家,但是随着我国人均寿命的不断增长、饮食结构的改变、环境污染的加剧以及检测技术的不断提高等原因,我国的前列腺癌发病率呈不断上升的趋势。目前,前列腺癌的发病机制尚不明确,由于早期前列腺癌隐匿,症状不明显,所以确诊时已有相当一部分患者属于中晚期前列腺癌,由于未能得到早期诊断而失去了根治性治疗的最佳时机。目前前列腺癌的筛查主要依靠前列腺特异性抗原,但是由于缺乏特异性,部分前列腺癌患者血清水平很低,存在漏诊的可能。从治疗的角度上看,根治性治疗是前列腺癌最有效的方法,但部分根治性治疗的早期前列腺癌患者仍有复发的几率,局部进展期前列腺癌和晚期前列腺痛的治疗主要依靠内分泌治疗,但是也几乎无法避免向激素非依赖性前列腺癌和激素难治性前列腺癌发展,使治疗变得十分困难。由此,当前需要迫切寻找新的前列腺癌标志物以及潜在的治疗新靶点,尽可能做到早发现、早诊断、早干预、早治疗,并且进一步提高治疗的效果,这成为当前前列腺癌研究的重要课题。目前分子生物学研究是肿瘤的研究热点,前列腺癌的发病机制和发生发展中文摘要的分子生物学基础仍然不清楚。既往大量的研究表明,前列腺癌的发生发展与人类染色体的畸形,、等原癌基因的激活和表达上调,、等抑癌基因的失活,、等基因多态性及甲基化等过程有关。而最近的研究表明,晚期糖基化终末产物受体,及其配体高,也与前列腺癌的发生、迁移率族蛋白进展有关。是细胞表面分子免疫球蛋白超家族中的一员,是一个具有多配体的跨膜信号转导受体。在包括糖尿病慢性并发症在内的许多疾病中发挥重要的作用,其能在许多细胞和组织类型表达,但是机体在生理状态下除了肺组织高表达外均呈基础的低表达。在肿瘤的作用是近十多年才发现的,目前的研究表明,在除肺癌之外的许多肿瘤表达上调,并且与肿瘤的发生、发展和不良预后密切关联。属于结合蛋白,是一种非组蛋白样染色体结构蛋白,是在肿瘤作用机制中最重要的配体,其几乎在所有的肿瘤组织中表达升高。研究表明,和的结合能激活一系列细胞信号转导通路,从而调节肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。因此,和可能成为肿瘤诊断新的分子标志物和肿瘤治疗的潜在新靶点。近年来,大量的研究表明了和的结合参与了多种肿瘤细胞的发展、侵袭和转移。关于、蛋白与前列腺癌临床病理参数以及预后的关系目前在国内外尚未见报道。目的检测和在良性前列腺增生和前列腺痛组织中的表达情况以及其差异性揭示两者在前列腺癌组织中表达的相关性研究和的表达与各临床病理参数的关系,探讨和在前列腺癌发生、发展的作用回顾性分析和与前列腺癌患者的生存情况的关系,为临床预后判断提供依据。综合分析和在前列腺癌的发生、发展、侵袭硕士学位论文和转移的作用,探讨两者作为前列腺癌诊断、治疗和预后判断的分子标志物的可能。方法收集年至年行手术或者经直肠前列腺穿刺诊断前列腺癌,并且具有完整临床病理资料的前列腺癌患者组织例,另外随机选择同期诊断良性前列腺增生患者组织例作为对照。所有病理均行染色确认病理诊断后,应用免疫组织化学方法检测例前列腺癌组织和例良性前列腺增生组织中和的表达情况。光学显微镜下观察免疫组化染色情况,进行染色结果分析,采用统计学软件进行统计分析,应用矛检验或精确概率法,分析和在良性前列腺增生和前列腺癌组织的表达差异,并且分析蛋白表达与前列腺癌患者临床病理参数包括年龄、评分、分期等的关系和在前列腺癌组织表达的相关性采用等级相关分析采用法,对、蛋白表达与前列腺癌患者临床分期为和期生存期的关系进行统计学分析,生存期曲线显著性的比较用法进行分析,用比例风险回归模型作多因素预后分析。结果和在良性前列腺增生和前列腺癌细胞中的表达定位主要定位于细胞浆中,少部分于细胞膜上主要阳性染色在细胞核内,部分染色在细胞浆中。在良性前列腺增生和前列腺癌组织的阳性表达率分别为/和/在良性前列腺增生和前列腺癌组织中阳性表达率分别为/和/。和在良性前列腺增生与前列腺癌组织中的表达率差异具有统计学意义。和两者的共表达率在良性前列腺增生与前列腺癌组织中分别为/和/,和的共表达率在两组间的差异具有统计学意义。中文摘要和的蛋白表达与前列腺癌患者年龄和评分无关,的蛋白表达与患者术前水平无关,的蛋白表达与患者术前水平相关和的表达与前列腺癌患者的分期、分期和远处转移有关。和的共表达与前列腺癌患者年龄、评分和水平无关,与患者的分期、分期和远处转移有关。前列腺癌组织中蛋白的表达与蛋白的表达呈正相关关。系,相关系数为对前列腺癌患者临床分期为和期进行随访,、的表达分别与患者生存期在统计学上无相关关系,但两者共表达的前列腺癌患者预后比非共表达患者更差比例风险回归模型分析结果显示远处转移是前列腺癌预后的不良因素。结论、蛋白的表达及共表达在前列腺癌组织中明显高于良性前列腺增生组织,提示两者以及其共同作用在前列腺癌的发生上发挥作用。、蛋白的表达及共表达与前列腺癌患者的临床分期相关,水平增高的表达增高,提示和可能参与前列腺癌的发展、浸润和转移,促进了前列腺癌疾病的进展。与蛋白在前列腺癌组织中的表达呈正相关关系,提示在前列腺癌组织中和蛋白特异性结合起协同、诱导作用,从而促进肿瘤的发展,/可能成为前列腺癌治疗的新靶点。、共表达的前列腺癌患者比非共表达患者预后更差,提示两者的共同作用加快了前列腺癌疾病的进展,缩短了患者的生存时间,两者共表达可能成为前列癌判断预后的分子标志物。关键词前列腺癌良性前列腺增生免疫组织化学预后硕士学位论文。一,一、,、,、析,硕士学位论文,/,/,/,。丽,/硕士学位论文,曲,埘,/硕士学位论文目录摘要前言。日罱“材料与方法。结果口一讨论小结结论参考文献综述附录研究生期间发表的论文致谢南方医科大学学位论文原创性声明统计学证明硕士学位论文前言前列腺是男性特有的最大附属生殖腺,底位于尿道膀胱连接部,尖朝向尿生殖膈。前面贴耻骨联合,后面靠直肠。前列腺根据解剖学可分为移行带、中央带和外周带。其中外周带和中央带占腺体的,移行带占腺体的。良性前列腺增生症多发生于移行带,而外周带是前列腺癌好发部位。前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一,尤其是在欧美发达国家,其发病率位居恶性肿瘤的第二位。最新的流行病学研究显示,年,全球前列腺癌新发例,占男性新发恶性肿瘤的,位居第二位,仅次于肺癌,而死于前列腺癌的病例高达例,占男性恶性肿瘤死亡率的,位居第六位。发病率以及死亡率均有明显的地域差异,发达国家的发病率和死亡率明显高于发展中国家【】。目前,我国的前列腺癌的发病率还远低于欧美发达国家,由于我国还缺乏全国范围内的前列腺癌标准化发病率资料,所以无法确切的了解全国的前列腺痛发病情况,但是从多个区域性的资料显示,前列腺癌的发病率呈增长趋势。中国城乡市县常见恶性肿瘤的发病趋势分析显示前列腺癌的发病率虽低,但是增长幅度最大。天津市研究至年的前列腺癌发病情况,发现天津市前列腺癌发病率虽然较低,但增长速度快【】。上海前列腺癌的发病率由年时的/万上升至年的/万【。李鸣等人对全国部分县市的前列腺癌发病进行比较,同样发现我国前列腺癌发病率呈现逐年上升趋势。随着我国人口老龄化社会的加速推进、饮食结构的改变、环境污染的加剧等因素,可以预见前列腺癌的发病率将不断上升。众所周知,恶性肿瘤防治的关键在于早发现、早干预、早治疗。当前筛查,但前列腺癌的方法主要靠前列腺特异性抗原是由于缺乏特异性,仍有部分前列腺癌患者血清的水平很低,进而导致延误诊治。治疗上,早期前列腺癌的最有效治疗手段是根治性手术和根治性放疗,辅助性内分泌治疗和新辅助性内分泌治疗目前仍有很大争议,并且根治前言性治疗后也有复发的可能性。局限性晚期前列腺癌的治疗是最具争议性的,目前是否行根治术还无定论。晚期前列腺癌的治疗主要采用内分泌治疗,但是无论采用什么方法,前列腺癌无法避免发展成为激素非依赖性前列腺癌和激素难治性前列腺癌,导致内分泌治疗效果欠佳甚至无效,从而被迫采用包括化疗内的综合治疗方法,加速患者的死亡。因此,寻找新的筛查前列腺癌的分子标志物以及其潜在的治疗靶点是目前列腺癌研究的重点,这对于前列腺癌的防治具有重大的意义。前列腺癌的发病机制及发生发展的分子生物学基础至今仍不清楚。以往的分子生物学研究表明,前列腺痛的发生发展与染色体畸形、原癌基因、等基因的形成和激活以及抑痛基因、基因的失活有关。而最近的研究表明,晚期糖基化终产物受体,及其配体也与前列腺痛的发病密切相关【”。最早是在研究糖尿病的动脉粥样硬化中的作用时首次发现的,年等报道了在研究糖尿病的动脉粥样硬化中的作用时,从牛肺组织中分离出能与糖尿病的主要致病因子特异结合的多肽,并且发生生物学反应,从而对组织造成损害,由此将此多肽命名为受体【。随后等牛肺中获得了并鉴定其序列【。是细胞表面分子免疫球蛋白超家族中的一员,是一个具有多配体的跨膜信号转导受体。人基因位于号染色体短臂型与型主要组织相容性复合物,基因之间,共含有个外显子。由多个氨基酸组成,分子量为,分胞外段、跨膜段和胞内段,胞外段为配体结合部位,有个免疫球蛋白样结构一个区可变区和两个区恒定区。其中区是与配体结合的部位,有个糖基化位点,聚糖的羧化在介导的信号传递中起重要作用【。胞外段后面即是较短的跨膜段,由个氨基酸残基组成。胞内段由个氨基酸残基组成,胞内段与细胞激活标记具有高度同源性,能结合细胞内的多种细胞信号分子,产硕士学位论文生细胞效应,在的细胞信号转导过程中具有重要的意义。作为信号转导受体在细胞表面能与多种配体如高迁移率族蛋、晚期糖基化终末产物,、/钙粒蛋白和淀粉样,肽等结合,激活细胞内的各种信号通路,引起细胞内外功能的改变。在单核巨噬细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、神经细胞及平滑肌细胞等细胞中普遍表达,生理状态下除正常肺组织细胞外表达处于基础水平,但在高血糖、炎症反应、氧化应激、淀粉样变等特殊病理生理环境下细胞表面表达明显增强。在糖尿病慢性并发症的形成以及进行性加速过程中,发挥重要的作用,与其配体结合后可以启动多条细胞信号转导通路,刺激多种细胞因子和生长因子的生成和释放,引起血管内皮的损伤、血流动力学的改变等一系列病理生理学效应,从而加速糖尿病血管病变等慢性并发症的进程。除此之外,还参与了细胞的炎症反应、细胞的增殖与分化、神经元的分化等病理生理过程。目前研究表明,与许多慢性疾病,如糖尿病、肾脏疾病、心血管疾病、神经系统疾病以及恶性肿瘤等的发生发展密切相关引。高迁移率族蛋白最先于年从小牛胸腺中提取和鉴定,因其相对分子质量小,在聚丙烯酰胺凝胶电泳时的快速迁移而得名。根据其蛋白的分子量大小、序列的相似性以及结合特性,家族可分为、和种蛋白【】。是含量最丰富的高迁移率族蛋白,广泛分布于淋巴组织、脑、肺等组织中,在进化过程中其氨基酸序列高度保守。早期命名为两性素,属于结合蛋白,一种非组蛋白样染色体结构蛋白。是近年发现的与肿瘤侵袭、转移有密切关系的配体。人蛋白基因定位于染色体带,含个外显子,由个氨基酸组成。主要表达与细胞核中,具有个结构域,为盒、盒和羧基末端。盒和盒各含有个螺旋结构,结构相似,构成的非特异性结合区,盒是的拮抗剂,与竞争结合的位置,盒则是致炎特性前言的所在区域。羧基末端可与其他蛋白相互作用调节与的亲和力【。年,一篇发表在的文章开启了及其配体在肿瘤作用的研究,等人发现/阻断剂可以抑制肿瘤的生长和转移,往成瘤小鼠身上注射各种形式的,出现过度表达的和肿瘤比对照组明显的增大,给予抗体或者阻断/的相互作用,可以抑制/、的激活,从而减缓肿瘤的生长,同时,用胞质尾部删除的或溶,解性治疗神经胶质瘤细胞,可以阻断/,的激活【。随着研究的不断深入,及其配体特异性结合后参与了包括乳腺癌、结直肠癌、人口腔鳞状细胞癌、食管癌、胃癌、胰腺癌和前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生、侵袭和转移,而与在恶性肿瘤进展中扮演重要角色的主要配体是知。与结合后,可以启动多种途径调节肿瘤细胞的生长,激活细胞内各种信号转导机制,包括、/、/、/等,参与肿瘤生长、转移。及其配体相互作用在前列腺癌中的作用是近十年才被提出来,年,等对名前列腺癌术后患者的标本进行分析,发现肿瘤细胞及间质细胞中的及其配体共表达增高,已有转移的患者更为明显通过进一步的细胞学实验,证实/系统在雄激素阻断过程中通过旁分泌途径促进肿瘤细胞与间质细胞的相互作用,从而加速前列腺癌的发展和转移们。年,等发现在前列腺癌细胞株、和的表达中,臣激素非依赖性前列腺癌细胞株中是最高,在上述个细胞株中均有表达。和在前列腺癌中的表达比正常前列腺组织剐。等也通过研究认为与配体、的相互作用对前列腺癌的发生、发展有重要作用【】。年等进一步证明胞外端的区域是其与配体作用介导前列腺癌生长所必须的】。年等人通过体内外实验验证斟干扰沉默的表达能抑制前列腺痛的生长【】我们前期的研究也从蛋白、和水平发现了前列腺癌患者组织中比正常前列硕士学位论文腺组织表达增高【。肿瘤细胞的失控性生长以及远处转移是恶性肿瘤和良性肿瘤的根本区别,肿瘤晚期侵犯身体的其他器官是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因。研究已经发现及其配体蛋白在前列腺癌变过程中可以通过多种途径影响癌细胞的侵袭行为,如激活肿瘤细胞信号转导通路、刺激肿瘤血管生长、活化基质金属蛋白酶,、放大炎症反应影响肿瘤生长等等。但是有关及其配体与前列腺癌患者的临床病理资料以及预后的关系至今尚未见报道。本研究采用免疫组织化学的方法,检测和在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达差异,并进一步探讨两者表达与前列腺癌分化程度、临床分期以及预后等相关关系,为前列腺癌的临床诊断、治疗以及判断预后提供新的方向。材料与方法材料与方法临床资料及实验标本收集收集临床资料收集从年月至年月份在南方医科大学南方医院经手术或者前列腺穿刺并且病理确诊前列腺痛的患者资料。收集的资料包括患者的一般情况包括姓名、年龄、住院号、联系方式、出入院诊断等、辅助检查的结果包括手术前或者穿刺前的水平、超、等、分期、病理结果包括分化的评分、分化程度等、治疗情况等等。前列腺癌的临床分期根据美国肿瘤联合会,年的分期标准,具体如下一原发肿瘤原发肿瘤不能评价无原发肿瘤的证据不能被扪及和影像无法发现的临床隐匿性肿瘤偶发肿瘤体积所切除组织体积的偶发肿瘤体积所切除组织体积的穿刺活检发现的肿瘤如由于升高局限于前列腺内的肿瘤肿瘤限于单叶的/肿瘤超过单叶的/,但限于该单叶/肿瘤侵犯两叶肿瘤突破前列腺包膜肿瘤侵犯包膜单侧或双侧肿瘤侵犯精囊硕士学位论文肿瘤固定或侵犯除精囊外的其他临近组织结构,如膀胱颈、尿道外括约肌、直肠、肛提肌和或盆壁一区域淋巴结区域淋巴结不能评价无区域淋巴结转移区域淋巴结转移一个或多个一远处转移远处转移无法评估无远处转移有远处转移有区域淋巴结以外的淋巴结转移骨转移单发或多发其他器官组织转移伴或不伴骨转移临床分期期期芝眺期任何任何任何任何期任何任何期任何任何材料与方法任何任何任何任何任何任何任何病例选择的入选标准和排除标准入选标准经手术或者穿刺病理确诊的前列腺癌患者。排除标准非前列腺癌的患者无病理报告的患者临床数据不完整的患者穿刺或者手术前接受化疗、放疗以及内分泌治疗的患者患有糖尿病、病、其他恶性肿瘤等疾病可能导致和表达增高的患者。临床资料的整理、随访以及标本的收集按照既定的纳入与排除标准进行病例的筛选,对符合标准并且前列腺癌临床分期为期和期的患者进行随访随访截止时间为年月,随访时间为年,了解患者生存情况,死亡的患者,了解其死亡时间和死亡原因及与前列腺癌的关系。收集蜡块,标本过小者将排除。结果符合纳入标准并且具有完整病理临床资料的病例数例其中手术切除标本例,经直肠前列腺穿刺标本例。收集同期病理诊断良性前列腺增生病例例作为对照,同样排除患有糖尿病、等病、其他恶性肿瘤等可能导致和表达增高的疾病患者。研究对象及分组实验组例具有完整临床病理资料和符合纳入排除标准的前列腺癌组织作为实验组,例前列腺癌患者年龄岁。实验组的详细临床病理资料见表。对照组例符合标准的良性前列腺增生组织作为对照组,年龄一岁,均为南方医院年经尿道前列腺电切术后的标本。硕士学位论文实验组平均年龄为,对照组平均年龄为,两独立样本比较的检验结果显示,实验组和对照组在年龄上差异无显著性意义,。表前列腺癌患者的临床病理资料项目例数百分比年龄夕/立评分幻分期分期远处转移无“有主要仪器和试剂主要仪器及耗材石蜡切片机,光学显微镜,电热恒温干燥箱,广州市深华生物技术有限公司精辩与方法组织防脱载玻片江苏海门神鹰实验器材厂主要试剂一抗鼠抗人单克隆抗体公司一抗兔抗人公司多克隆抗体免疫组化试剂盒北京博奥森生物技术有限公司显色试剂盒北京博奥森生物技术有限公司武汉博士德生物技术有限公司缓冲液武汉博士德生物技术有限公司枸橼酸盐缓冲液免疫组化一抗稀释液美国公司封片用中性树胶北京博奥森生物技术有限公司免疫组化试剂盒包括了试剂无色液体去离子水试剂蓝色液体封闭用正常山羊血清工作液试剂黄色液体生物素标记山羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠试剂橙色液体辣根酶标记链霉卵白素工作液刖冲研究方法及步骤切片制作常规石蜡标本切片,使用切片机将本研究中所有石蜡包埋标本进行切片,所有切片厚度为。切片步骤如下切片前先将蜡块放负冰箱内约分钟,使蜡块冷却变硬,易于切片。将刀片安装在刀座上,调整刀的角度为度左右。从冰箱内取出蜡块,快速将蜡块固定在组织切片机上,并且调整好位置,使蜡块切面和刀片平行。先用较大进刀量约粗切蜡块至组织切面暴露完整,再调整厚度调节旋钮至,连续切片,直至所需要的切片数量。将连续切片漂在恒温水浴箱的水面上,让其完全自然展开,用眼科镊分开每张切片后快速捞片。每一例病例硕士学位论文用普通载玻片捞一张切片以作苏木素一伊红染色,其余均用免疫组化防脱载玻片捞片并做好标记,烤箱中烤片约分钟,自然冷却后装切片盒负冰箱内保存以备用。染色诊断每例病例在免疫组织化学染色之前,均行染色复习并明确其诊断。具体的染色步骤如下切片干燥箱烤片小时,二甲苯脱蜡次,每次分钟,乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、蒸馏水梯度水化分钟,苏木素染色分钟,自来水冲洗后,盐酸乙醇分化秒,温水中返蓝分钟,伊红染色分钟,乙醇、乙醇、乙醇、乙醇脱水分钟二甲苯透明次,每次分钟,吹干,中性树胶封片。免疫组织化学检测和蛋白,采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结法检测和蛋白的表达,严格按照抗体和试剂盒的要求进行。每一批均设阳性对照和阴性对照,检测采用己知阳性表达的大肠癌组织作为阳性对照,检测采用已知阳性表达的正常肝组织作为阳性对照,阴性对照用液代替一抗。抗体在前列腺癌组织的最佳工作浓度经过预实验摸索,的工作浓度为,的工作浓度为。免疫组化的具体步骤如下烤片将切片放入恒温箱中烘烤时置入二甲苯前再用电吹风机吹切片组织以提高脱蜡效果。脱蜡石蜡切片常规二甲苯脱蜡三次,每次分钟。水化乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇水化各分钟,蒸馏水冲洗分钟,冲洗次,每次分钟。抗原修复高压锅煮沸枸盐酸缓冲液后,放入切片,盖好高压锅,喷气后计时分钟,室温自然冷却,流水冲洗分钟,冲洗次,每次分钟。材料与方法抑制内源性过氧化物酶切片组织上力/,室温孵育分钟,冲洗次,每次分钟。封闭非特异性蛋白在切片组织上滴加试剂封闭用正常山羊血清工作液,室温封闭分钟。一抗孵育甩干血清封闭液后,直接滴加已稀释的鼠抗人单克隆抗体和兔抗人多克隆抗体,孵育过夜。二抗孵育倒掉一抗后,冲洗次,每次分钟,滴加试剂生物素标记的二抗工作液,室温孵育分钟后,冲洗次,每次分钟。反应滴加试剂辣根酶标记链霉卵白素工作液,室温孵育分钟,冲洗次,每次分钟。显色滴显色剂,显色约分钟显微镜下观察染色情况控制时间,自来水冲洗终止染色。复染、分化、返蓝苏木素复染分钟,盐酸酒精分化秒,温水返蓝分钟。脱水、梯度乙醇脱水分钟。透明二甲苯透明次,每次分钟。封片中性树胶封片。免疫组化阳性染色判断标准每一张切片均由两位资深的病理医师在未知病例资料的情况下随机观察具有代表性的个高倍视野,根据阳性染色的深浅和阳性染色的细胞百分比进行评分。细胞基本不着色者为分,细胞阳性染色淡者为分,细胞阳性染色适中者为分,细胞阳性染色深者为分着色细胞占计数细胞百分率为分,为分,为分,为分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘为其最后得分,分为“”,分为“”,分为“,分为“”。表达水平的判断标准上,将“和“的定义为阴性表达,“和“斗一定义为阳性表达。硕士学位论文统计学分析采用统计学软件进行统计分析,应用检验或精确概率法,分析和在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达差异,同样的方法对和蛋白表达与前列腺癌各临床病理参数之间的关系进行统计学分析和在前列腺癌组织中表达的相关性采用等级相关分析采用法,对、蛋白表达与前列腺癌患者生存期的关系进行统计学分析,生存期曲线显著性的比较用法进行分析,用比例风险回归模型作多因素预后分析。按的水准判断是否具有统计学意义。结果结果染色结果染色结果经染色后,两位经验丰富的病理科专家对每一例病例包括实验组和对照组进行复习确诊,前列腺癌的病理诊断标准如下根据分化程度将前列腺癌分为高分化、中分化与低分化腺癌三型。高分化前列腺癌多见,癌由腺体构成,腺体表现为一致的腺泡呈背靠背结构,正常的两层上皮变为单层上皮细胞,外层基底细胞层消失,核仁显著,细胞有不同程度异型性,可见癌组织浸润间质,但周围尚有界限如图,图。中分化腺癌是高分化腺癌病变的进一步发展,腺体在大小和形态上明显不规则,部分腺体结构消失,细胞异型明显如图,图。低分化腺癌的癌细胞形成索状或者实性团,而很少形成腺腔结构如图,图。良性前列腺增生镜下主要表现为腺上皮、平滑肌及纤维结缔组织的结节样增生,增生的腺体体积增大,部分腺体呈乳头增生突入腺腔内如图,图。免疫组化染色结果镜下可见在良性前列腺增生和前列腺癌组织中和的阳性染色呈棕黄色。蛋白主要定位于细胞浆,少部分位于细胞膜上蛋白主要位于细胞核上,少部分分布于胞浆内。图、和图、分别为和在良性前列腺增生组织中的表达。图、和图、分别为和在高分化前列腺癌组织中的表达图、和图、分别为和在中分化前列腺癌组织中的表达图、和图、分别为和在低分化前列腺癌组织中的表达。硕士学位论文图的染色,币,在的表达在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的阳性表达率分别为/和/,矿检验结果显示的阳性表达率在实验组和对照组中差异具有,。如表。统计学意义良性前列腺增生和前列腺癌组织中和的共表达率分别为/和/,检验结果显示两者共表达率在实验组和对照组中差异具有统计学意义矛,。如表。表和在和前列腺癌组织中的表达和蛋白的表达与前列腺癌临床病理参数的关系和蛋白表达与前列腺癌患者年龄的关系在例前列腺癌患者中,按照其平均年龄分为两组年龄组和年龄组,其中年龄岁的患者有例,岁的有例。在两组中的阳性表达率分别为/和/,检验结果显示在墨和年龄组中阳性表达率差异无统计学意义,。在两组中的阳性表达率分别为/和/,检验结果显结果示在冬和年龄组中阳性表达率差异无统计学意义妒,。两者共表达率在两组中分别为/和/,矿检验结果显示差异无统计学意义,。如表。表和的表达和前列腺癌患者年龄的关系和蛋白表达与前列腺癌水平的关系在例前列腺痛患者中,其/的患者有例,/的有例,在两组中的阳性表达率分别为/和/,精确概率法结果显示在/和/组中阳性表达率差异具有统计学意义。在两组中的阳性表达率分别为/和/,矿检验结果显示在立/和组中阳性表达率差异无统计学意义,。两者共表达率在两组中分别为/和/,检验结果显示差异无统计学意义,。如表。硕士学位论文和的表达与前列腺癌患者水平的关系表和蛋白表达与评分的关系在例前列腺痛患者中,其中的有例,的有例,的有例,在这三组中的阳性表达率分别为/、/和/,检验结果显示在评分分组中在这三组中的阳性阳性表达率差异无统计学意义,。表达率分别为/、/和/,检验结果显示在评分分组中阳性表达率差异无统计学意义矿,。两者共表达率在三组中分别为/、/和/,检验结果显示差异无统计学上意义矿,。如表。表和的表达和前列腺癌患者评分的关系结果和蛋白表达与前列腺癌患者分期的关系在例前列腺癌患者中,分期的患者有例,的患者的有例,在两组中的阳性表达率分别为/和/,矛检验结果显示在分期分组中的阳性表达率差异具有统计学意义,。在两组中的阳性表达率分别为/和/,检验结果显示在分期分组中的阳性表达率差异具有统计学意义,。两者共表达率在两组中分别为/和/,检验结果显示差异具有统计学意义,。如表。表和的表达和前列腺癌患者分期的关系和蛋白表达与前列腺癌患者分期的关系在例前列腺痛患者中,其中分期为的患者有例,的有例,在两组中的阳性表达率分别为/和/,矛检验结果显示在分期的分组中阳性表达率差异具有统计学意义矛,。在两组中的阳性表达率分别为/和/,妒检验结果显示在分期的分组中阳性表达率差异具有统计学意义,。两者共表达率在两组中分别为/和/,检验结果显示差异具有统计学意义,。如表。硕士学位论文和表的表达和前列腺癌患者分期的关系和蛋白表达与前列腺癌患者远处转移的关系在例前列腺癌患者中,其中未发现远处转移的患者有例,已发现有远处转移的有例,在两组中的阳性表达率分别为/和/,检验结果显示在是否有远处转移的分组中阳性表达率差异具有统计学意义,。在两组中的阳性表达率分别为/和/,检验结果显示在是否有远处转移的分组中阳性表达率差异具有统计学意义妒,。两者共表达率在该分组中分别为/和/,检验结果显示差异具有统计学意义,。如表。表和的表达和前列腺癌患者远处转移的关系结果和蛋白在前列腺癌组织中表达的相关性采用等级相关分析探讨前列腺癌组织中实验组、蛋自表达的相关性。结果二者之间呈正相关关系,相关系数,相关性具有统计学意义。如表。表和在前列腺癌组织中表达的相关性和蛋白表达与前列腺癌预后关系的分析为探讨、蛋自在判断预后的作用,我们对初诊时临床分期为期和期的患者进行回顾性随访。总共随访了例符合标准的患者,随访时间年。生存分析显示阳性表达患者与阴性表达患者在生存时间上差异无统计学意义,阳性表达患者与阴性表达患者在生存时间上差异无统计学意义矿,和蛋白共表达患者与非共表达患者在生存时间上差异具有统计学意义,。如图。回归分析逐步回归模型对就诊时确诊为期和期前列腺癌患者的水平、评分、具体分期、分期、远处转移情况、表达、表达以及和的共表达等可能和预后有关的因硕士学位论文素进行分析,最终远处转移情况进入模型,即远处转移是影响前列腺癌患者预后的独立因素。就诊时发现有远处转移,反映不良预后,相对危险度。,图前列腺癌中、及其共表达与患者生存时间的关系,讨论讨论由于全球人口的持续增长和快速步入老龄化社会,以及环境恶化、抽烟酗酒、饮食习惯的改变等社会因素,肿瘤越来越来成为威胁人类健康的最重要疾病。年的全球肿瘤统计数字显示,这一年全球新发恶性肿瘤万例,死于肿瘤的有万例,这给各国政府在医疗卫生的投入上造成了不小的负担。前列腺癌作为男性泌尿生殖系统中重要的恶性肿瘤之一,在欧美发达国家和地区,它是男性最常见的恶性肿瘤,随着全球步入老龄化社会,前列腺癌的发病率呈不断上升趋势【】。年以来,由于的检测和前列腺活检技术的不断发展,前列腺癌的发病率呈不断上升趋势,美国在年成年男性的新发恶性肿瘤约万,前列腺癌占其将近三分之一【。在中国,随着人均寿命的不断增长、生活饮食方式的西方化和检测技术的不断提高等原因,我国的前列腺癌发病率呈不断上升的趋势。目前,前列腺癌的筛查诊断主要依靠,但是由于是非特异性的前列腺癌标志物,存在诊断灰度区/,给筛查诊断带来一定困难,存在一定的漏诊率。治疗上,根治性手术和放疗有可能治愈前列腺癌,但是只适用于少数诊断为早期前列腺癌的患者,并且存在一定的复发率。大部分患者就诊时已是中晚期前列腺癌,只能行姑息性治疗。虽然前列腺癌起初多为激素依赖性,对内分泌治疗敏感有效,但是几乎所有前列癌无法避免向激素非依赖性前列腺癌和激素难治性前列腺癌发展,使治疗缺乏更加有效的方法。分子生物学研究是目前肿瘤研究的热点。随着上世纪年代人类正式启动人类基因组计划以来,人类基因图谱已经完成,多个物种也完成了基因组测序,人类基因组计划正式进入了后基因组时代,它的任务是在已完成基因组测序的物种之间进行整体、全方位的比较和分析,希望在整个基因组的规模上了解基因组和蛋白质组的功能意义,包括基因组的表达与调控以及基因蛋白产物在生物体生长、发育、分化、老化以及疾病过程中的作用机理。因此人类基因组计划,不仅仅为了测序,更重要的是为了读懂每个基因的功能,以及每个基因与硕士学位论文某些疾病存在的种种关系,最终服务于人类的健康。不可置疑,蛋白是生理功能的最终执行者,也是生命的直接体现者,研究蛋白功能有利于我们直接揭示疾病产生的最终机制。而对于肿瘤的研究,人类也在年提出了“肿瘤基因组解剖学计划。大量关于前列腺癌分子生物学的研究表明,前列腺癌发病机制的分子水平涉及染色体的畸变、原癌基因的激活、抑癌基因的失活等多个方面。有研究证实了人类染色体缺失而丢失的基因和染色体获得而扩增的基因在前列腺癌的进展中起重要的作用口】。原癌基因的过度表达可能导致前列腺癌患者的预后更差。进一步研究证实了,雄激素阻断治疗可以导致前列腺癌中基因的表达增强,间接表明其可能与内分泌治疗加速前列腺癌向激素非依赖性进展的可能。基因的表达水平随着前列腺癌的疾病进展而增强口。基因的表达也有同样的趋势,并且表达水平越高,预后更差【。前列腺癌的基因和基因【】的表达率比正常的前列腺高,可能提示着与前列腺癌的发生有密切关系。研究还发现前列腺癌与抑癌基因、和基因有关。等发现随着前列腺痛疾病的进展,的突变率逐渐升高【。基因与前列腺癌的表达下降与前列腺癌的发生内分泌治疗后不耐受复发有关【】。密切相关【。除此之外,前列腺癌还可能与基因、端粒酶的激活等有关。但是,目前前列腺癌的分子生物学机制仍不十分明确,及其配体是新近研究与前列腺癌关系较为密切的蛋白,由于在形态学和半定量上的优势,本实验采用了临床上最常见的方法检测和在前列腺增生和前列腺癌的表达水平,并揭示两者在前列腺癌患者临床病理参数的关系,以期为前列腺癌的诊断、判断预后和治疗带来新的方向。一、与肿瘤是细胞表面分子中免疫球蛋白超家族成员之一,是一个具有多配体的跨膜信号分子。参与了包括了神经系统疾病、心血管疾病、糖尿病和代谢性疾病、肿