sn 0668-1997 出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法 杯碟法

SN06681997出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法杯碟法SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN06681997出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法杯碟法METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD19970815发布19980101实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发布SN0668一1997前言本标准是根据GB/T111993标准化工作导则第1单元标准的起草与表述规则第1部分标准编写的基本规定及SN/T00011995出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定的要求进行编写的。其中测定方法采用了日本厚生省1990年编写的畜、水产食品中的残留物质检验方法中的枯菌素检验方法。技术内容上稍作改变，经验证后，按规定格式要求作了编辑性修改。在标准中同时制定了抽样和制样方法。本标准的附录A是标准的附录。本标准的附录9B是提示的附录。本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出并归口。本标准由中华人民共和国浙江进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人费飞金、高雯洁。本标准系首次发布的行业标准。食品伙伴网/FOODMATENETSN06681997前言本标准是根据GB/T111993标准化工作导则第1单元G标准的起草与表述规则第1部分2标准编写的基本规定及SN/T0001一1995出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定的要求进行编写的。其中测定方法采用了日本厚生省1990年编写的畜、水产食品中的残留物质检验方法中的粘菌素检验方法技术内容上稍作改变，经验证后，按规定格式要求作了编辑性修改在标准中同时制定了抽样和制祥方法。本标准的附录A是标准的附录本标准的附录B是提示的附录本标准由中华人民共和国国家迸出口商品检验局提出并归口本标准由中华人民共和国浙江迸出口商品检验局负责起草本标准主要起草人费飞金、高雯洁本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法杯碟法METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTCYLINDERPLATEMETHODSN0668一1997范围本标准规定了出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验的抽样、制样和杯碟测定方法。本标准适用于出口鸭肉中粘菌素残留量的检验。抽样和制样21检验批以不超过2500件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。22抽样数量批量，件最低抽样数，件12512610051012501025150015501100017100125002023抽样方法按22规定的抽祥件数随机抽取，逐件开启。每件至少取500G或一袋作为原始样品，抽取的原始样品总量不少于2KG，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。24试样制备从所取回的原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放人绞碎机中绞碎，充分混匀。用四分法缩分至不少于500G作为试样。装入清洁容器内，加封后标明标记。25试样保存将试样于一18以下冷冻保存。注在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定方法方法提要用磷酸盐缓冲液抽提试祥中残留的粘菌素，经均质、离心，取上清液进行杯碟法测定。利用样液中的中华人民共和国国家进出口商品检验局19970815批准1998一01一01实施I食品伙伴网/FOODMATENET中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法杯碟法SN066819971范围METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD本标准规定了出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验的抽样、制样和杯碟测定方法。本标准适用于出口鸭肉中粘菌素残留量的检验。2抽样和制样21检验批以不超过2500件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。22抽样数量批量，件最低抽样数，件125261001012501025150015501100017100125002023抽样方法按22规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取500G或一袋作为原始样品，抽取的原始样品总量不少于2KG，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。24试样制备从所取田的原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入绞碎机中绞碎，充分混匀。用四分法缩分至不少于500G作为试祥装入清洁容器内，加封后标明标记。25试样保存将试样于18C以下冷冻保存。注在抽样及制样的操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化3测定方法31方法提要用磷酸盐缓冲液抽提试样中残留的粘菌素，经均质、离心，取上清液进行杯碟法测定。利用样液中的中华人民共和国国家进出口商品位验局19970815批准19980101实施SN0668一1997残留粘菌素与支气管败血性博代氏杆菌的作用，根据产生抑菌圈的大小用标准曲线法定量。32试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。321枯菌素甲基磺酸钠标准品已知效价标准品。1PG相当于。613PG粘菌素。322缓冲液IPH6。士。1,称取800G无水磷酸二氢钾溶于700ML水中，另取200G无水磷酸氢二钾溶于300ML水中，两者混合，于121高压灭菌15MIN,323缓冲液QPH60士01称取800G无水磷酸二氢钾溶于700ML水中，另取200G无水磷酸氢二钾溶于300ML水中，两者混合。称取铁氰化钾以。2比例溶解于该溶液中。324试验菌种支气管败血性博代氏杆菌BRNDETELLABRONCHISEPTICA，由美国标准菌株收藏中心提供，菌株号ATCC4617,325粘菌素标准储备液称取适量的粘菌素甲基磺酸钠标准品精确到。1MG，用缓冲液工溶解并制备成浓度为1000PG/ML的粘菌素标准储备液。置4C保存，可使用8天。326粘菌素标准工作液分别吸取一定量枯菌素标准储备液，用缓冲液I稀释成浓度为。0125,0025,005,01,02PG/ML的粘菌素标准工作液。需当日配制和使用。327培养基I见附录A中AD328培养基见附录A中A2,3,29培养基M见附录A中A3,33仪器和设备33门培养皿内径90MM，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦盖。332牛津杯不锈钢圆筒，外径80101MM，内径60士01MM，高度100士01MM,333游标卡尺测量范围。200MM,精度。02MM，或抑菌圈测量仪。334绞碎机电动。335均质器不低于10000R/MIN,336离心机不低于4000R/MIN,337恒温培养箱36士1C，搁板应保持水平。33,8高压灭菌器。339恒温水浴锅恒温士1C。34测定步骤341祥液制备称取100G试样精确至。1G于均质杯内，加入10ML缓冲液II，搅匀，放置60MIN。均质2MIN10000R/MIN后，放入水浴锅中煮沸3MIN。移入离心管中离心不少于10MIN4000R/MIN以上，取出上清液。在残渣中再加10ML缓冲液Q，按上述方法均质、离心，取出上清液。合并两次上清液，并定容为20M1_作为样液。342菌悬液的制备将支气管败血性博代氏杆菌接种于培养基F制成的试管斜面上于361C培养1624H后，再转种到培养基II中，于36土1C培养1624H，制成菌悬液使用时注意摇匀。343菌悬液最佳用星测定测试前应先用。025PG/ML粘菌素标准工作液，对上述菌悬素液进行预测试。以不同量的菌悬液加入经熔化并冷却至4550C的培养基11中，充分混合，并经36士1C培养17士1H后，选择能使该标准工作液产生直径大于等于10MM清晰完整的抑菌圈的菌悬液加入量，即为菌悬液的最佳用量。344检定平板制备将培养基M熔化，注20ML于灭菌培养皿内保持水平，待其凝固，作为基层。另取培养基Z熔化，冷却至45SOC，加入上述测得的最佳菌悬液用量，充分混合，取约4ML注入已铺有基层培养基的平板食品伙伴网/FOODMATENETSN06681997残留粘菌素与支气管败血性博代氏杆菌的作用，根据产生抑菌圈的大小用标准曲线法定量32试剂和材料除另有规定外所用试剂均为分析纯，水为蒸馆水。321粘菌素甲基磺酸纳标准品己知效价标准品。1月相当于0613G粘菌素。322缓冲液1,PH60101称取800G无水磷酸二氢御溶于700ML水中，另取200G无水磷酸氢二御溶于300ML水中，两者混合，于121C高压灭菌15MIN323缓冲液1,PH60土01。称取800G无水磷酸二氢饵溶于700ML水中，另取200G无水磷酸氢二梆溶于300ML水中，两者混合。称取铁氟化饵以02比例溶解于该溶液中。324试验菌种3支气管败血性博代氏杆菌BRDETELLAHRANCHISE户TICA，由美国标准菌株收藏中心提供，菌株号ATCC4617。325粘菌素标准储备液称取适量的粘菌素甲基硫酸锦标准品精确到01MG，用缓冲液I溶解并制备成浓度为1000问/ML的粘菌素标准储备液。置4C保存，可使用8天。326粘菌素标准工作液2分别吸取一定量粘菌素标准储备液，用缓冲液I稀释成浓度为00125、0025、O町、01、02G/ML的粘菌素标准工作液。需当日配制和使用。327培养基1见附录A中A1。328培养基H见附录A中A2。329培养基M见附录A中A3。33仪器和设备331培养皿内径90MM，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦盖。332牛津杯不锈钢圆筒，外径80士0MM内径60士01MM，高度000101MM333游标卡尺测量范围。200MM，精度。02MM，或抑菌圈测量仪。334绞碎机电动。335均质器不低于10000R/MIN336离心机不低于4000R/MIN。337恒温培养箱361C，搁板应保持水平。338高压灭茜器E339恒温水浴锅恒温土1C34测定步骤341佯液制备称取100G试祥精确至01G于均质杯内，加入10ML缓I中液N，搅匀，放置60MINT均质2MINO000R/MIN后，放入水浴锅中煮沸3MIN移入离心管中离心不少于10MIN4000R/MIN以上，取出上清液。在残渣中再加10ML缓冲液N，按上述方法均质、离心，取出上清液甸合并两次上清液，并定容为20ML作为样液。342菌悬液的制备将支气管败血性博代氏杆菌接种于培养基I制成的试管斜窗上于36士1C培养1624H后，再转种至IJ培养基E中，于36士1C培养1624H，制成茵悬液使用时注意摇匀。343菌悬液最佳用最测定测试前应先用0025月/ML粘菌素标准工作液，对上述菌悬素液进行预测试。以不同量的菌悬液加入经熔化并冷却至4550C的培养基E中，充分混合，并经36士1C培养0711H后，选择能使该标准工作液产生直径大于等于10MM清晰完整的抑菌圈的菌悬液加入量，即为菌悬液的最佳用量。344俭定平板制备将培养基E熔化，注20ML于灭菌培养皿内保持水平，待其凝固，作为基层。另取培养基E熔比，冷却至4550C，加入上述四H导的最佳菌悬液用量，充分混合，取约4ML主入已铺有基层培养基的平板SN0668一1997中作种层，保持水平，使其凝固，制成检定用的平板。所用平板需当天制备。345标准曲线的绘制用粘菌素标准工作液326绘制标准曲线。以。05PG/ML浓度的标准工作液为参考浓度以00125PG/ML浓度的标准工作液作阴性对照用。每个标准工作液浓度取三个检定平板作为一组每个平板上置4个牛津杯，使牛津杯在半径为25CM的圆面成900角间距，对角两个杯中注满005PG/ML参考浓度标准工作液，另两个对角杯中注满其他浓度的一种标准工作液。4个浓度标准工作液共12个检定平板，用于制备标准曲线。其中005PG/ML参考浓度的标准工作液将得到24个抑菌圈直径的数值，而其他标准工作液分别得到6个抑菌圈直径的数值。盖好平皿盖，置36士1培养17士1H,翻转平板，除去牛津杯，测量各个浓度产生的抑菌圈直径精确到。1MM，求得各自的平均值。再求出。05PG/ML参考浓度24个抑菌圈直径的平均值。用参考浓度的抑菌圈直径的总平均值减去每组平板参考浓度的抑菌圈直径平均值的差，即为各组平板的校正值。将校正后的值用式1和式2算出L和H点的直径值，在半对数坐标纸上，以抑菌圈直径为横坐标算术级，粘菌素浓度为纵坐标对数级，通过L和H点连一直线即为标准曲线。7A4BC一2D1017D十4CB一2A102式中L标准曲线上最低浓度抑菌圈的直径，MMH标准曲线上最高浓度抑菌圈的直径，MMB参考浓度。05PG/ML的24个抑菌圈直径的平均值，MMA,C,D分别表示标准曲线上其他标准工作液浓度0025,01,02PG/ML的抑菌圈直径经校正后的平均值，MM,346样液的测定每份祥液取3个检定平板在每个平板上置4个已灭菌的牛津杯按制备标准曲线方法放置，在对角的2只牛津杯里注满被检样液，在剩余的2只牛津杯里分别注满粘菌素参考浓度标准工作液即005PG/ML。于36士1C培养17士1H,翻转平板，除去牛津杯。如有抑菌圈产生，量取抑菌圈直径精确到01MM35结果的计算和表述如样液抑菌圈的直径小于10MM，即报告为“阴性”。如样液抑菌圈的直径大于等于10MM，求出每组三个检定平板上样液和参考浓度标准工作液抑菌圈直径的平均值，经校正后，从标准曲线上查出相应的粘菌素的浓度，通过式3，计算试样中粘菌素残留的含量3式中X试样中粘菌素残留的含量,MG/KGC从标准曲线上查得样液中粘菌素浓度，KG/ML。每毫升最终徉液所代表的试样量,G注如测定结果呈阳性，即所显的抑菌圈直径的平均值大于等于10MM必要时尚需进行确证试验可用薄层层析法，参见附录T3以证明抑菌物确系粘菌素。测定低限和回收率测定低限本方法的测定低限为。05MG/KG回收率食品伙伴网/FOODMATENETSN06681997中作种层，保持水平，使其凝固制成检定用的平板所用平板需当天制备345标准曲线的绘制用粘菌素标准工作液326绘制标准曲线以005G/ML浓度的标准工作液为参考浓度以00125何/ML浓度的标准工作液作阴性对照用每个标准工作液浓度取三个检定平板作为一组，每个平板上置4个牛津杯，使牛津杯在半径为25CM的困面成90角间距，对角两个杯中注满005月/ML参考浓度标准工作液，另两个对角杯中注满其他浓度的一种标准工作液。4个浓度标准工作液共12个检定平板，用于制备标准曲线。其中005G/ML参考浓度的标准工作液将得到24个抑菌圈直径的数值，而其他标准工作液分别得到U6个抑菌圈直径的数值。盖好平皿盖，置36土1C培养17J1H，翻转平板除去牛津杯，测量各个浓度产生的抑菌圈直径精确J1JO1MM，求得各自的平均值。再求出005G/ML参考浓度24个抑菌围直径的平均值用参考浓度的抑菌圈直径的总平均值减去每组平板参考浓度的抑菌圈直径平均值的差，即为各组平板的校正值。将校正后的值用式1和式2算出L和H点的直径值，在半对数坐标纸上，以抑菌圈直径为横坐标算术级，粘菌素浓度为纵坐标对数级，通过L和H点连一直线RP为标准曲线。L一7A4BC2D10H一7D4CB一2A10式中L一一标准曲线上最低浓度JLJ菌圈的直径，MMH一一标准曲线上最高浓度抑菌圈的直径，MMB一一参考浓度005月/ML的24个抑菌圈直径的平均值，MM12A，C、D一一分别表示标准曲线上其他标准工作液浓度0025、01、02问IML的抑菌圈直径经校正后的平均值，MM。346样液的测定每份样液取3个检定平板在每个平板上置4个己灭菌的牛津杯按制备标准曲线方法放置，在对角的2只牛津杯里注满被检样液，在剩余的2只牛津杯里分别注满粘菌素参考浓度标准工作液即005吨/ML。于36士1C培养L7J1H，翻转平板，除去牛津杯。如有抑菌圈产生，量取抑菌圈直径精确J1J01MM35结果的计算和表述如样液抑菌圈的直径小于10MM，即报告为阴性。如样液抑菌固的直径大于等于10MRN，求出每组三个俭定平板上样液和参考浓度标准工作液抑菌圈直径的平均值，经校正后，从标准曲线上查出相应的粘菌素的浓度，通过式3，计算试祥中粘菌素残留的含量X二3式中X试样中粘菌素残留的含量，MG/KGC从标准曲线上查得样液中粘菌素浓度，FG/MLM一一每毫升最终佯液所代表的试样量，G。注G如测定结果呈阳性N所里的抑菌圈直径的平均值大于等于10MM必要时尚需进行确证试验可用薄层层析法，参见附录BJ以证明仰菌物确果粘菌素。4测定低限和回收率41测定低限本方法的测定低限为005MG/KG,42回收率SN0668一1997鸭肉中枯菌素添加浓度及其回收率的实验数据0050MG/KG时，回收率为780写，0100MG/KG时，回收率为8500200MG/KG时，回收率为GOOE食品伙伴网/FOODMATENETSN06681997鸭肉中粘菌素添加浓度及其回收率的实验数据20050MG/KG时，回收率为780，0100MG/同时，回收率为850，0200MG/同时，回收率为900SN0668一1997附录A标准的附录培养基K1培养基I蛋白陈100G牛肉浸膏50G抓化钠259琼脂150G水1000ML将上述成分于水中加热溶解，调节PH使其灭菌后PH为65士。1，分装于试管或克氏瓶中，于121高压灭菌15MIN。灭菌后可制成斜面。A2培养荃I蛋白豚100G牛肉浸膏509氯化钠25G水1OOOML将上述成分溶解于水中，调节PH使其灭菌后PH为7。士。1，分装于试管或克氏瓶中，于121C高压灭菌15MINA3培养垂，蛋白陈170G氯化钠50G葡萄塘259磷酸氢二钾259木瓜酶水解大豆30G琼脂120G水1000ML将上述成分于水中加热溶解，调节PH使其灭菌后PH为73士。1，分装于锥形瓶中，于121高压灭菌15MIN附录B提示的附录确证试验确证试验采用薄层层析法，用粘菌素标准品作对照，求R，值，以确证试样中是否存在粘菌素。薄层层析条件薄层板硅胶G板点样量50TAL点状。展开剂丙酮一水1十1食品伙伴网/FOODMATENETSN0668一1997A1地弊基I蛋白陈100G牛肉浸膏50G氯化锵25G琼脂150G水1000ML附录A标准的附录蜡基将上述成分于水中加热溶解，调节PH使其灭菌后PH为65士01，分装于试管或克氏瓶中，于121C高压灭菌15MIN灭菌后可制成斜面A2培养基E蛋白炼100G牛肉漫膏50G氯化销25G水1000ML将上述成分溶解于水中，调节PH使其灭菌后PH为70土0，1，分装于试管或克氏瓶中，于121C高压灭菌15MINOA3膏，丰基E蛋白陈170G氯化纳50G葡萄糖25G磷酸氢二铮25G木瓜酶水解大豆30G琼脂120G水1000ML将上述成分于水中加热溶解，调节PH使其灭菌后PH为73士0，1，分装于锥形瓶中，于121C高压灭菌15MINO附录B提示的附录确证试验确证试验采用薄层层析法，用粘菌素标准品作对照，求RI值，以确证试样中是否存在粘菌素。薄层层析条件薄层板G硅胶G板点样量，50L点状展开JFTJ，丙翻水110SX0668一1997展开在饱和槽内进行显色剂。5MTV布三酮丙酮溶液。检测喷洒显色剂布三酮溶液，反应时间约5MIN食品伙伴网/FOODMATENETSN06681997展开Z在饱和槽内进行显色1FJO5V苟三阁丙嗣溶液检测Z喷洒显包剂苟三爵溶液，反应时间约5MINOSN0668一1997FOREWORDTHISSTANDARDWASDRAFTEDINACCORDANCEWITHTHEREQUIREMENTSOFGB/T111993DIRECTIVESFORTHEWORKOFSTANDARDIZATIONUNIT1DRAFTINGANDPRESENTATIONOFSTANDARDSPART1GENERALRULESFORDRAFTINGSTANDARDSANDSN/T00011995GENERALRULESFORDRAFTINGTHESTANDARDMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFPESTICIDE,VETERINARYDRUGRESIDUESANDBIOTOXINSINCOMMODITIESFOREXPORTTHISSTANDARDADOPTSTHERELEVANTMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINTHEMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFRESIDUESINANIMALANDAQUATICFOODS1990ED,APUBLICATIONOFMINISTRYOFPUBLICHEALTHOFJAPAN,ASTHEMETHODOFDETERMINATION,WHICHISTECHNICALLYEQUIVALENTTOTHATOFTHEORIGINAL,BUTWITHSLIGHTMODIFICATIONAFTERGOINGTHROUGHVERIFICATIONTHESTANDARDWASDRAFTEDACCORDINGTOTHEEDITORIALREQUIREMENTSFORTHESTIPULATEDFORMATINADDITIONTHEMETHODSOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATIONAREALSOSPECIFIEDINTHISSTANDARDANNEXAOFTHISSTANDARDISANORMATIVEANNEXANNEXBOFTHISSTANDARDISANINFORMATIVEANNEXTHISSTANDARDWASPROPOSEDBYANDISUNDERTHECHARGEOFTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASDRAFTEDBYTHEZHEJIANGIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONBUREAUOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASMAINLYDRAFTEDBYFEIFEIJIN,GAOWENJIETHISSTANDARDISAPROFESSIONALSTANDARDPROMULGATEDFORTHEFIRSTTIMENOTETHISENGLISHVERSION,ATRANSLATIONFROMTHECHINESETEXT,ISSOLELYFORGUIDANCE食品伙伴网/FOODMATENETSN0668一1997FOREWORDTHISSTANDARDWASDRAFTEDINACCORDANCEWITHTHEREQUIREMENTSOFGB/T11一1993DIRECTIVESFORTHEWORKOFSTANDARDIZATIONUNIT1DRAFTINGANDPRESENTATIONOFSTANDARDSPART1GENERALRULESFORDRAFTINGSTANDARDSANDSN/TOOOL1995GENERALRULESFORDRAFTINGTHESTANDARDMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFPESTICIDE,VETERINARYDRUGRESIDUESANDBIOTOXINSINCOMMODITIESFOREXPORTTHISSTANDARDADOPTSTHERELEVANTMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINTHEMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFRESIDUESINANIMALANDAQUATICFOODS0990EDAPUBLICATIONOFMINISTRYOFPUBLICHEALTHOFJAPANASTHEMETHODOFDETERMINATIONWHICHISTECHNICALLYEQUIVALENT怕也ATOFTHEORIGINALBUTWITHSLIGHTMODIFICATIONAFTERGOINGTHROUGHVERIFICATIONTHESTANDARDWASDRAFTEDACCORDINGTOTHEEDITORIALREQ山REMENTSFORTHESTIPULATEDFORMATINADDITIONTHEMETHODSOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATIONAREAL50SPECIFIEDINTHISSTANDARDANNEXAOFTHISSTANCLARDISANORMATIVEANNEXANNEXBOFTHISSTANDARDISANNFORMATIVEANNEXTHISSTANDARDWASPROPOSEDBYANDISUNDERTHECHARGEOFTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASDRAFTEDBYTHEZHEJIANGIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONBUREAUOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASMAINLYDRAFTEDBYFEIFEIJINGAOWENJIETHISSTANDARDISAPROFESSIONALSTANDARDPROMULGATEDFORTHEFIRSTTIMENOTETHISENGLISHVERSION,ATRANSLATIONFROMTHECHINESETEXTISSOLELYFORGUIDANCEPROFESSIONALSTANDARDOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAFORIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLITINRESIDUESSN0668一1997INMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTCYLINDERPLATEMETHOD1SCOPETHISSTANDARDSPECIFIESTHEMETHODSOFSAMPLING,SAMPLEPREPARATIONANDDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESBYCYLINDERPLATEMETHODINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTTHISSTANDARDISAPPLICABLETOTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINDUCKMEATFOREXPORT2SAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION21INSPECTIONLOTTHEQUANTITYOFANINSPECTIONLOTSHOULDNOTBEMORETHAN2500PACKAGESTHECHARACTERISTICSOFTHECARGOWITHINTHESAMEINSPECTIONLOT,SUCHASPACKING,MARK,ORIGIN,SPECIFICSTIONANDGRADE,SHOULDBETHESAME22QUANTITYOFSAMPLETAKENNUMBEROFPACKAGESINEACHINSPECTIONLOTMINIMUMNUMBEROFPACKAGESTOBETAKEN12512610051012501025150015501100017100125002023METHODOFSAMPLETAKENANUMBEROFPACKAGESSPECIFIEDIN22ARETAKENATRANDOMANDOPENEDONEBYONEFROMEACHATLEAST500GORONEBAGSHALLBETAKENASPRIMARYSAMPLETHETOTALWEIGHTOFALLPRIMARYSAMPLESSHOULDNOTBELESSTHAN2KG,WHICHISTHENPLACEDINACLEANCONTAINER,SEALED,LABELEDANDSENTTOTHELABORATORYINTIME24PREPARATIONOFTESTSAMPLEAPARTOFREPRESENTATIVESAMPLESHALLBETAKENFROMTHEMIXEDPRIMARYSAMPLE,THEEDIBLEPORTIONSAREHOMOGENIZEDBYGRINDINGINAMEATGRINDERTHEHOMOGENIZEDSAMPLEISTHOROUGHLYMIXEDANDREDUCEDTOATLEAST500GBYQUARTERINGASTHETESTSAMPLETHETESTSAMPLEISPLACEDINACLEANCONTAINER,WHICHISTHENSEALEDANDLABELED25STORAGEOFTESTSAMPLEAPPROVEDBYTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTIMPLEMENTEDFROMJAN1,1998ANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAONAUG15,19978食品伙伴网/FOODMATENETPROFESSIONALSTANDARDOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAFORIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESSN06681997INMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD1SCOPETHISSTANDARDSPECILIESTHEMETHODS01SAMPLINGSAMPLEPREPARATIONANDDETERMINATION01COLISTINRESIDUESBYCYLINDERPLATEMETHODINMEATSANDMEATPRODUCTSLOREXPORTTHISSTANDARDISAPPLICABLETOTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINDUCKMEATFOREXPORT2SAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION21INSPECTIONLOTTHEQUANTITY01ANINSPECTIONLOTSHOULDNOTBEMORETHAN2500PACKAGESTHECHARACTERISTICSOFTHECARGOWITHINTHESAMEINSPECTIONLOT,SUCHASPACKING,MARK,ORIGIN,SPECIFICATIONANDGRADESHOUDBETHESAME22QUANTITY01SAMPLETAKENNUMBEROFPACKAGESINEACHINSPECTIONLOTMINIMUMNUMBEROFPACKAGESTOBETAKEN12526100101250251500501100010012500NUM气JV巾NULL223METHOD01SAMPETAKENANUMBER01PACKAGESSPECIFIEDIN22ARETAKENATRANDOMANDOPENEDONEBYONEFROMEACHATEAST500GORONEBAGSHA11BETAKENASPRIMARYSAMPLETHETOTALWEIGHT01A11PRIMARYSAMPESSHOUDNOTBELESSTHAN2KG,WHICHISTHENPLACEDINACLEANCONTAINER,SEALED,LABELEDANDSENTTOTHELABORATORYINTIME24PREPARATION01TESTSAMPLEAPART01REPRESENTATIVESAMPLESHA11BETAKENIROMTHEMIXEDPRIMARYSAMPLETHEEDIBLEPORTIONSAREHOMOGENIZEDBYGRINDINGINAMEATGRINDERTHEHOMOGENIZEDSAMPEISTHOROUGHYMIXEDANDREDUCEDTOATEAST500GBYQUARTERINGASTHETESTSAMPETHETESTSAMPEISPLACEDINACLEANCONTAINERWHICHISTHENSEAEDANDABEED25STORAGE01TESTSAMPEAPPROVEDBYTHESTATEADMINISTRATLONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTLONORTHEPEOPLESREPUBLICORCHLNAONAUG151997IMPLEMENTEDFROMJAN11998SN0668一1997THETESTSAMPLESHOULDBESTOREDBELOW一18CNOTE,INTHECOURSEOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION,PRECAUTIONSMOSTBETAKENTOAVOIDCONTAMINATIONORANYFACTORSWHICHMAYCAUSETHECHANGEOFRESIDUECONTENT3METHODOFDETERMINATION11PRINCIPLETHECOLISTINRESIDUESINTHETESTSAMPLEAREEXTRACTEDWITHPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONAFTERHOMOGENIZING,ANDCENTRIFUGING,CYLINDERPLATEMETHODISUSEDTODETERMINETHECOLISTININTHESUPERNATANT,WHICHISMADEREACTEDWITHBORDETELLABRONCHISEPTICWITHFORMATIONOFINHIBITIONZONEQUANTITATIONISMADEBYMEASURINGTHESIZEOFINHIBITIONZONE,USINGSTANDARDCURVEMETHOD12REAGENTSANDMATERIALSUNLESSOTHERWISESPECIFIEDALLREAGENTSUSEDSHOULDBEANALYTICALLYPURE,WATERISDISTILLEDWATER121COLISTINSODIUMMETHANESULFONATESTANDARDSTANDARDOFKNOWNPOTENCY1YGISEQUALTO0613MGOFCOLISTIN322BUFFERSOLUTIONIPH60土01DISSOLVE8O0GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDAUTOCLAVEAT121CFOR15MIN323BUFFERSOLUTIONIPH60士01DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDADD020OOFPOTASSIUMFERRICYANIDETOTHEMIXTURE,STIRTODISSOLVE124TESTSTRAINBORDETELLABRONCHISEPTIC,ATCC4617PROVIDEDBYTHEAMERICANTYPECULTURECOLLECTION325COLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTIONACCURATELYWEIGHACCURATETO01MGAPROPERQUANTITYOFCOLISTINSODIUMMETHANESULFONATESTANDARDANDDISSOLVEINBUFFERSOLUTIONITOPREPAREASTANDARDSTOCKSOLUTIONOF1000PGCOLISTIN/MLINCONCENTRATIONSTOREINAREFRIGERATORAT4C，WHICHCANBEUSEDWITHIN8DAYS126COLISTINSTANDARDWORKINGSOLUTIONPIPETASERIESOFCOLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTION,ANDDILUTESEPARATELYWITHBUFFERSOLUTIONITOPREPAREASERIESOFSTANDARDWORKINGSOLUTIONSOF001250025,005,01,02PG/MLINCONCENTRATIONS,WHICHSHOULDBEUSEDONTHESAMEDAYOFPREPARATION327MEDIUMISEEALINANNEXA328MEDIUMNSEEA2INANNEXA329MEDIUMMSEEA3INANNEXA33APPARATUSANDEQUIPMENT331CULTUREDISH90MMID,GLASSORPLASTICDISHESWITHSMOOTHANDFLATBOTTOMANDWITHCLAYCOVER332OXFORDCUPSTAINLESSSTEELCYLINDERS,80士。1MMOD,60士01MMID,HEIGHT10。土01MM333VERNIERCALIPERMEASURINGRANGE0200MM,PRECISION002MMORMETERFORMEASURINGTHEINHIBITIONZONE334MEATGRINDERELECTRIC335HOMOGENIZERNOTLESSTHAN10000R/MIN336CENTRIFUGENOTLESSTHAN4000R/MIN337INCUBATOR36士1C,THESHELFMUSTBEKEPTHORIZONTALI18AUTOCLAVE食品伙伴网/FOODMATENETSN06681997THE胆STSAMPLESHOULDBESTOREDBELOW18CNOTE,INTHECQUR陋。F回RNPLINGANDSAMPLEPREPARATIONPECAUTIONSRNO哨BETAKENTOAVODCONTAMINATIONORANYFACTORSWHICHMAYCAUSETHECHANGEOFRESIDUECONTENT3METHODOFDETERMLNATION3甸PRINCIPLETHECOLISTINRESIDUESINTHETESTSAMPLEAREEXTRACTEDWITHPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONAFTERHOMOGENZING,ANDCENTRIFUGING,CYLINDERPLATEMETHODISUSEDTODETERMINETHECOLISTININTHESUPERNATANT,WHICHSMADEREACTEDWITHB旷DETELLAHRONCHSEPTICWITHFORMATONOFINHIBITIONZONEQUANTITATIONISMADEBYMEASURNGTHESZEOFINHIBITIONZONE,USINGSTANDARDCURVEMETHOD32REAGENTSANDMATERIALSUNLESSOTHERWISESPECIFIEDAUREAGENTSUSEDSHOULDBEANALYTICALLYPURE,WATERISDSTILLEDWATER321COLISTIN四DIUMMETHANESULFONATES阻NDARDSTANDARDOFKNOWNP。但NCY1GISEQUALTOO613G。FCOLISTIN322BUFFERSOUTIONIPH60土O1DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDAUTOCLAVEAT121CFOR15MIN323BUFFERSOLUTION1PH60士O1DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDADDO2OFPOTASSIUMFERRICYANIDETOTHEMIXTURE,STIRTODISSOLVE324TESTSTRAINBARDETELLABRANCHISEPTICATCC4617PROVIDEDBYTHEAMERICANTYPECULTURECOLLECTION325COLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTIONACCURATELYWEIGHACCURATETOO1MGAPROPERQUANTITYOFCOLSTNSODIUMMETHANESU1FONATESTANDARDANDDISSOLVEINBUFFERSOLUTON1TOPREPAREASTANDARDSTOCKSOLUTIONOF1000GCOLISTIN/MLINCONCENTRATIONSTOREINAREFRIGERATORAT4C,WHICHCANBEUSEDWITHIN8DAYS326COLISTINSTANDARDWORKINGSOLUTIONPIPETASERIESOFCOLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTION,ANDDILUTESEPARATELYWITHBUFFERSOLUTION1TOPREPAREASERIESOFSTANDARDWORKINGSOLUTIONSOFQ0125O025O050102G/MLINCONCENTRATIONS,WHICHSHOULDBEUSEDONTHESAMEDAYOFPREPARATION327MEDIUMISEEALINANNEXA328MEDIUMSEEA2INANNEXA329MEDIUMMSEEA3INANNEXA33APPARATUSANDEQUIPMENT331CULTUREDISH90MMIDGLASSORPLASTICDISHESWITHSMOOTHANDFLATBOTLOMANDWITHCLAYCOVER332OXFORDCUPSTAINLESSSTEELCYLINDERS80士。1MMOD60土01LMMIDJHEIGHTOO0土01MM333VERNIERCALIPERMEASURINGRANGEO200MM,PRECSON00