瑞博EDU试剂盒C10341-3使用说明

1、产品简介试剂盒应用EdU直接测定细胞内DNA的变化。EdU（5-Ethynyl -2- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU与T非常相似，而EdU染料只有BrdU抗体的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解

2、、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。试剂盒内容试剂浓度In vitroIn vivoC10310C10327C10313C10321C10322C10314EdU溶液(试剂A)1000X20L100L200L-EdU溶剂(试剂A)粉末-2 mg10 mg50 mgApollo反应缓冲液(试剂B)20X500 L2.5 mL5 mL500 L500 L500 LApollo催化剂溶液(试剂C)100X100 L500 L1 mL100 L100 L100 LApollo荧光染料溶液(试剂D)300X30L150L300L30L

3、30L30LApollo缓冲添加剂(试剂E)粉末100 mg500 mg1 g100 mg100 mg100 mgHoechst 33342 (试剂F)100X150L750L1.5 mL150L150L150L运输与保存室温运输，4C储存，勿冻存，荧光试剂请避光保存，可稳定储存一年。使用前须知贴壁细胞宜采用荧光检测方式，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测，亦可进行爬片检测，。悬浮细胞可用涂片方式荧光检测，亦可采用流式细胞仪分析，但流式细胞仪需要具备相应荧光通道(表4)。实验准备 PBS (pH 7.27.6)渗透剂(含0.5% Triton X-100的PBS)甘氨酸溶液(2

4、mg/mL)（去离子水配置）细胞固定液(即含4%多聚甲醛的PBS) 96/24/12/6孔培养板注意：请使用一次性手套，废液请妥善处理。实验参考表1EdU培养基及染色反应液的使用量参考96孔板*48孔板24孔板12孔板6孔板5 cm小皿EdU培养基100 l150 l200 l300 l500 l2 mL染色反应液100 l150 l200 l300 l500 l2 mL注：1）*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2）悬浮细胞EdU用量请按培养体积而定。表2EdU孵育时间取决于细胞生长速度3T3HelaHEK293*细胞系人胚胎细胞酵母细胞人成纤维细胞

5、人宫颈癌细胞人胚肾细胞系人神经细胞细胞周期30min3h18h21h25h5d孵育时间5min20min2h2h2h1d注：1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5；2）*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化，但大多数细胞系可采用2h孵育时间。表3Apollo染色反应液的配置（现用现配）配制顺序Apollo染色反应液500L*1 mL5 mL10 mL1去离子水469 L938 L4.69 mL9.38 mL2Apollo反应缓冲液(试剂B)25 L50 L250 L500 L3Apollo催化剂溶液(试剂C)5 L10 L50 L1

6、00 L4Apollo荧光染料溶液(试剂D)1.5 L3 L15 L30 L5Apollo缓冲添加剂(试剂E)5 mg9 mg44 mg88 mg注：1）*表示通常配制的Apollo反应液的体积；2）按顺序配制适量1X Apollo染色反应液，以免破坏正常的反应体系(现用现配，30分钟用完)；3）试剂E为白色粉末，较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需更换。粉末较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过20%。表4配套染料的相关波长信息产品编号荧光染料ExcitationEmissionSimilar toC00031Apollo567550nm565nmCy3C00041Apollo643653nm667nmCy5C00033Hoechst 3334235