《陈玉明开题报告》PPT课件.ppt

1、有机磷对雄性淡水鱼生殖毒性的研究,报告人：陈玉明 专业：细胞生物学 研究方向：生殖细胞 导师：胡家会,聊城大学2008级硕士研究生开题报告,主要内容,一、选题背景 二、选题的目的和意义 三、研究现状和发展趋势 四、课题主要研究内容 五、技术路线 六、可行性分析 七、创新点 八、预期研究成果 九、学位论文工作计划安排,一、选题背景,1、农药对环境的污染的问题越来越受到人们的关注 2、有机磷农药在农药的生产和使用中占主导地位 3、有机磷可通过多种方式对生物（包括人类）产生生殖毒性作用 4、生物检测在环境监测中的作用越来受到人们的重视 5、用精子细胞检测环境毒物是生物检测的一种新方法,二、选题的目的

2、和意义,1、选题目的 本课题通过急性和慢性毒性实验，从组织水平、细胞水平和亚细胞水平反映有机磷对雄性淡水硬骨鱼生殖毒理效应，并对其作用机制进行探讨 。,二、选题的目的和意义,2、选题的意义 2.1、可为淡水鱼养殖和资源保护提供参考； 2.2、可为相关法律法规的制定提供提供科学依据； 2.3、可为男性不孕症的预防和治疗提供依据； 2.4、可为环境污染物的检测和环境保护提供依据； 2.5、有助于生物检测检测技术的完善和应用；,三、研究现状和发展趋势,1、研究现状 国内外具有研究，是环境毒理研究的热点 1.1、国外：开始的较早，研究的层次较深、水平较高，但受试物以除草剂和灭草剂为主。 1.2、国内：

3、起步较晚，研究的人较少，研究的范围较狭窄，层次相对较低，受试物多是单一类型，并以杀虫剂类为主。,三、研究现状和发展趋势,2、发展趋势 2.1、由受试物单一类型的毒性研究向多种类型联合毒性作用发展 2.2、由单一层次向从多层次、多角度方面的研究发展 整体，组织，细胞，亚细胞，分子水平； 神经毒性，内分泌毒性，生殖毒性； 酶干扰剂，氧化作用，细胞溶剂；,四、课题主要研究内容,1、材料与方法： 以玫瑰无须鲃、泥鳅等淡水鱼实验材料，以敌敌畏阿维菌素等有机磷农药为受试物，应用计算机辅助分析（CASA）、分光光度法、石蜡切片、超薄切片等技术方法进行研究。,四、课题主要研究内容,2、有机磷对淡水鱼精子活力的

4、毒理作用 在显微镜下观察精子运动，并用计算机辅助分析系统(CASA)摄影，进行数据分析，计算出运动率、速度，并记录运动时间；最后用统计软件比较分析，探讨有机磷对精子活力的影响及作用机理。 3、有机磷对淡水鱼雄性生殖系统形态和结构的毒理作用 测定精巢/体重 比值 显微观察 亚显微观察,四、课题主要研究内容,4、有机磷对淡水鱼雄性生殖系统氧化损伤 测定精细胞中超氧化物歧化酶(S0D)、硫代巴比妥酸值1 （TBARS）： 实验溶液对精液处理后，离心，除去上清液得到精子细胞，采用物理或化学方法使精子细胞充分破坏，再离心获得上清液，用分光光度计进行测定。,五、技术路线,1、有机磷对雄性生殖系统形态结构影

5、响,饲养鱼,解剖,取精巢,称重,计算精巢/体重比值,固定,逐级脱水,透明,浸蜡,切片,染色,镜检,脱水,双固定,包埋,染色,切片,组织水平,细胞水平,亚细胞水平,说明：,五、技术路线,2、有机磷对精子运动的影响2-4,取精液,制精子悬液,药物处理,饲养鱼,显微观察,运动率,运动时间,运动速度,显微观察,五、技术路线,3、有机磷对淡水鱼精子的氧化损伤,离心,饲养鱼,取精液,药物处理,细胞破裂,离心,用分光光度计测定,超氧化物歧化酶(S0D),硫代巴比妥酸值（TBARS）,五、技术路线,4、染色体核型分析5,饲养鱼,PHA处理,秋水仙碱处理,解剖,取肾脏和精巢,制细胞悬液,离心,水洗,离心,低渗处

6、理,离心,固定,滴片,染色,观察,六、可行性分析,1、生命科学学院有石蜡切片机、正置荧光显微镜（CASA）、倒置荧光显微镜（CASA）、分光光度计、离心机等设备，完全能满足实验的需要 2、电镜观察在青岛大学医学院完成 3、本试验有一定的研究基础和较成熟的实验技术 4、有相关研究文献可供参考 5、指导教师和同学们帮助，一定能完成。,七、创新点,1、生物实验的新材料 玫瑰无须鲃是近几年才使用的一种生物学研究的新材料，国内外研究较少，由于它的优点被广泛应用于生殖、发育及毒理学等方面。 以泥鳅作为实验材料在生物学领域更是少见，但是它的营养价值和经济价值，以及其特有的生物学特性正越来越受到人们的重视。

7、有机磷农药种类很多，多达160余种，而当前的研究却不是很多。 2、玫瑰无须鲃染色体核型分析还未见到有人研究 3、精子生物学在毒理学方面的应用时间不长 4、农药联合毒性的研究较少,八、预期研究成果,筛选2-3种有机磷农药影响玫瑰无须鲃鱼和泥鳅精子活力的最低浓度， 并测定精巢/体重比的变化情况，从显微、亚显微水平揭示有机磷农药对鱼精子的毒性作用 探索玫瑰鱼染色体核型分析方法，进一步揭示玫瑰鱼的遗传信息。 从生化角度研究环境有机磷对精子细胞的氧化损伤，并对有机磷生殖毒性的作用机制进行探讨。 发表研究性论文2-3篇。,九、学位论文工作计划安排,参考文献,1 Bingsheng Zhoua,b, Wen

8、hua Liu et al. Exposure of spermatozoa to duroquinone may impair reproduction of the common carp (Cyprinus carpio) through oxidative stress, Aquatic Toxicology 77 (2006) 136-142 2胡家会,张士崔,张永忠等.水胺硫磷对玫瑰无须鲃精子的体外毒性作用.高技术通讯.2005,15:104-107 3 Mokhtar I. Yousef , Kamel I. Kamel et al. An in vitro study on reproductive toxicity of aluminium chloride on rabbit sperm: The protective role of some antioxidants. Toxicology 239 (2007) 213223 4Mokhtar I.Yousef , Kamel I. Kamel et al. An in vitro study on reproductive toxicity of aluminium chloride on rabbit sperm: Th