动物细胞融合与单克隆抗体第二课时

1、一、动物细胞融合,1.概念,动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞,2、原理,细胞膜的流动性,2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体,诱导方法,物理方法,化学法,生物法,灭活的病毒,电激等,聚乙二醇（PEG,3.融合过程,诱导融合的方法？灭活病毒,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG,物理、化学方法 灭活的病毒,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,

2、4.意义,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能,5.应用,最重要的用途是 制备单克隆抗体,1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体,二、单克隆抗体的制备,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,单克隆抗体的制备,单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一,特异性强的抗体,利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞

3、融合获得杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,设计方案,单克隆抗体的制备过程,整个制备过程为何要经过两次筛选,第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长,第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂

4、交瘤细胞,三、单克隆抗体的应用,1）作为诊断试剂最广泛应用 准确、高效、简易、快速,如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等,2）运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤,“生物导弹” 单抗导向，药物为弹头,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,例1,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没

5、经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ） 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C. 操作步骤基本相同 D. 都能形成杂种细胞,D,3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ ） A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（ ） APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心,B,5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基

6、筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A. B. C. D,C,6.“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物,D,A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题,A细胞,B细胞,C细胞,D细胞,1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为 细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的 性质,通过 方式产生大量细胞,我们称之为 过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称,杂交瘤,连续分裂,有丝分裂,单克隆,单克隆抗体,练一练,2)D细胞中产生的抗体其化学本质是 ,合成该物质的场所是 ,它是由 控制合成的,合成过程包括 和 两个重要步骤,球蛋白,核糖体,基因,转录,翻译,3)D细胞中产生的抗体具有 作用,与血清抗体相比其优越之处在于 强 高,免疫,特异性,灵敏度,4)若A为人细