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1、1,受体菌,2,3,受体菌,1、定义: 外源DNA导入的细胞,是重组体扩增的场所。 2、要求: 易于接纳外源DNA 无特异的内源性核酸内切酶 载体复制、扩增不受阻 与载体有互补性,一般基因工程受体菌都是限制修饰系统缺陷的变异株,4,基因工程受体菌,一般基因工程受体菌都是限制修饰系统缺陷的变异株。 感受态细胞的原理 受体菌的基因型和表型,5,感受态细胞的原理,通常情况下,外源基因无法进入细菌细胞内; 当用电击法,或CaCl2,或RuCl等方法处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源基因进入的感受态细胞。 感受态细胞的活性较低,处理需温柔,6,受体菌的基因型和表型,1)基因型用3个斜体字母表
2、示,若不同的基因变异导致相同的结果,后面加上一个大写字母:dam, recA (2) 表现型用3个正体字母表示,第一个字母大写:Amp+ (3) :含有该基因 【或表现有抗性,活性】 (4) :基因变异【或表现敏感或失活】 (5) :基因(或区段)缺失 (6) Ts: 温度敏感 (7) : :插入,符号的说明,7,基因型变化的功能,停止密码回复 重组机能缺失 对插入DNA具有直接作用因子的缺失 抗药性的变异 宿主蛋白酶缺失 有利于选择转化体的基因 有利于点突变的基因 菌株筛选基因,8,停止密码回复,9,重组机能缺失,10,对插入DNA具有直接作用因子的缺失,11,抗药性的变异,12,宿主蛋白酶缺失,13,有利于选择转化体的基因,14,有利于点突变的基因,15,菌株筛选基因,16,DH5克隆菌株,17,BL21 (DE3)表达菌株,18,其他常用菌株,TOP 10: 繁殖快,适于基因克隆 E
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