寄生虫病实验二

1、实验三 蠕虫学粪便检查法 （三）一、内容1. 虫卵计数法2. 测微技术3. 幼虫分离法二、参考资料1. 虫卵计数法：测定家畜每克粪便的虫卵数（E.P.G ）本法主要用于生前判断某种消化道寄生虫的感染强度和某种药物的驱虫效果。 例如， 在 治疗前 1 克粪便含有 1000 个虫卵，治疗后则减少到 100 个，那说明该药对某种寄生虫有一 定的驱虫效果。 当然这仅仅使一个大约的推断， 因为粪便中的虫卵数目是随着寄生虫本身的 年龄、 雌虫的数目、 是否其他寄生虫同时寄生以及家畜的年龄、体质、 营养和气候条件的影 响等等因素的不同而有一定的差异。（1）斯陶尔氏法（ Stoll s method ）用自行

2、标记有 56 毫升、 60 毫升两个刻度的小三角烧瓶或大试管，先注入 56 毫升 1/10N 氢氧化钠溶液 （即 0.4%氢氧化钠水溶液） ，再加入待检粪便至 60毫升处（即加入 4 克粪便）， 再加 10 个直径 3 毫米的小玻璃珠，盖上橡皮塞，振荡使粪便完全破碎混匀，然后很快用吸 管吸取0.15毫升粪汁（内含粪便 0.01 克）,滴于载玻片上，盖上 20X 40毫米的长盖玻片， 在显微镜下计数虫卵， 在计数时要顺序自盖玻片的一端数至另一端， 每个视野不重复液也不 漏掉，将所得的虫卵数乘以 100，即为 1 克粪便中含有的虫卵数。为了获得正确的结果，须 在每天的不同时间里检查三次， 连续检查

3、三天，然后取其平均数， 这样可以减少误差。 本法 适用于大部分蠕虫卵的计数。（ 2）麦克马斯特氏法（ MeMaster s method ）此法需要特制的麦氏计数器 （可以自制， 计数室由二片载玻片制成， 将其一片切去一条， 使之较另一片窄一些，在较窄的玻片上刻以1cm2的方格二个，而后选取厚度1.5mm的玻片切去小条垫于二玻片间， 用玻璃黏合剂粘合， 这样两玻片间每个方格的容量为 0.15cm3 ，即（0.15ml ）。方法：取粪便 2 克放入小三角烧瓶或其它玻璃容器内， 加入饱和盐水 58 毫升， 加入小玻 璃珠 20 个，充分振荡，使成均匀粪液，用吸管吸取粪汁注入麦氏计数室里，置显微镜上

4、， 静置1 - 2分钟，然后在镜下计数 1cm2方格内的虫卵总数，求出两个刻度室中虫卵数的平均 数，乘以200即为每克粪便中的虫卵数（每个方格中实际含原粪量是0.15 X 2/60 = 0.005克,故系数为 200） .本法只适用于可被饱和盐水浮起的各种虫卵。2. 测微技术各种寄生虫成虫 ,幼虫和虫卵 ,常有恒定的大小 ,较大的虫体可以直接用尺测定 , 而虫卵 和幼虫的测量需用测微器。测微器有目镜测微尺和镜台测微尺组成 ,目镜测微尺微一块圆形玻片 ,其上刻有 50刻度, 使用时将显微镜头取下 ,将目镜测微尺放于镜筒的内隔位上 ,再将目镜头装上 ,通过此镜即可 在视野内见到清晰的刻度 ,但此刻

5、度没有绝对的长度意义。 所以,要用镜台测微尺来换算其长 度,镜台测微尺是一种特制载玻片,其中央有标准刻度 （每格等于 0.01 毫米即 10微米）. 使用时将其放入显微镜载物台上 , 调节显微镜视野使清楚地看到镜台测微尺上的刻度 ,移动镜台 测微尺 , 使其与目镜测微尺的一条刻度重叠, 然后在别处寻找目镜测微尺多少格相当于镜台测微尺多少格 , 就可算出目镜测微尺每个的长度。例:用10倍目镜,10倍接物镜,镜筒布抽出的情况下 ,目镜测微尺的 7格相当于镜台测微尺的10格（即10微米X 10=100微米）即可算出目镜测微尺每格长度为100微米/7=14.3微米。测量具体虫卵时 , 可将镜台测微尺移

6、去 , 只需用目镜测微尺即可。 如某虫卵的长度以目镜测微 尺量得 6 格, 则其具体长度应为 14.3 X 6=85.8 微米。但必须指出 , 以上算得目镜测微尺的换 算长度 , 只适用于一定的显微镜 , 一定的目镜 , 一定的接物镜体条件下 , 如更换其中任一因素 , 其相对长度必须重新测算。3幼虫培养与分离法（1 ）幼虫培养法 圆形目的线虫种类很多， 其虫卵在形态和大小上都非常相似， 镜检时很难区别， 生前诊断时 为了区别这些线虫的种类，常将含虫卵的粪便加以培养，待其中虫卵发育位第三期幼虫时， 再行检查，根据第三期幼虫的形态进行鉴别，达到诊断的目的。最简单的方法是将待检的新鲜粪便塑成半球形

7、， 放在平皿中， 并加少许水， 如粪便已很 稀，就不必加水，放在25 30 C温箱中（夏天在室温内）培养，根据具体情况，每天加少量水， 使粪便保持一定的湿度，经 710 天，多数虫卵即可发育成第三期幼虫，并集中在皿盖上的水滴中， 将幼虫吸出置载玻片上， 放显微镜下检查。 或将培养的幼虫连同粪便一起用 漏斗幼虫分离法 （贝尔曼法）分离， 取试管底下的沉淀物进行镜检，观察有无活动的幼虫存 在。在搜集培养物进行幼虫分离的同时， 还必须注意平皿壁周围的清理。 因为有的第三期幼 虫活动性很强， 常常会离开粪便跑到潮湿的平皿壁上， 因此除了注意检查平皿内的粪便以外， 还须用水仔细冲洗平皿壁， 将所得的液体

8、和粪便一起倒入贝尔曼装置内， 或单独用离心机分 离后镜检。如果幼虫培养的目的不是为了诊断， 而是为了科学研究， 研究某种蠕虫或幼虫的生物学 特性，那就必须事先将同种的虫卵或幼虫搜集在一起， 放在平皿内， 平皿内预先放好培养基， 在25-30 C温箱中进行培养，培养基可以用清水或生理盐水，但最好的培养基是无菌的粪便 或粪汁， 尤以粪汁为好， 因为粪汁培养虫卵或幼虫， 可以直接将培养的虫卵或幼虫的平皿放 在显微镜下，观察其发育情况。粪便或粪汁无菌的方法是在100 C下煮沸消毒2小时，然后用棉花过滤，再接种虫卵或幼虫，这样再观察过程中就比较清晰，容易鉴别。（ 2 ） 幼虫分离法有些蠕虫如网尾科线虫

9、, 其虫卵在新排出的粪便中已是幼虫 ; 类圆属线虫的卵随粪便 排出后 , 在外界温度较高时 , 经 5-12 小时后 , 即孵出幼虫 ;大部分圆形线虫卵因形态构造基本 相似 , 必须培养至第三期幼虫再作鉴别 , 均可采用幼虫分离法检查。 贝尔曼氏法 （ Baermanns technique）, 亦称漏斗幼虫分离法取被检新鲜粪便 15-20 克, 置于直径 10-15 厘米的衬以金属筛的漏斗上 （ 可将金属筛布 剪成圆片 , 放于漏斗中 ）, 漏斗下接一短橡皮管 , 管下再接一小试管 , 放入漏斗中铜筛上的粪 便不必捣碎，加入40C温水浸没粪球为止，此时应注意加入温水后，橡皮管内不应有气泡阻

10、塞, 如有气泡阻塞须排出 , 以免阻碍幼虫下沉 . 静置 1-3 小时 , 大部分幼虫游走于水中 , 并沉 入试管底部 ， 拔取小试管 ， 取沉渣 ， 在显微镜下检查 ， 观察是否有运动活泼的幼虫 .本法不仅用于牛羊等反刍动物的肺线虫幼虫的检查 ， 它还应用于动物尸体剖解检查某 器官和组织中的幼虫 ， 对饲料中或土壤中的线虫幼虫液都可以用本法分离到。 平皿法 （ 法衣德氏幼虫分离法 ）取供检粪球3-10颗,放入盛有少量温水（约40 C ）的平皿或表面玻璃上，约经5-10分钟 后， 除去粪球 ， 把平皿或表面玻璃直接置于显微镜载物台上或用吸管吸取液体滴于载玻片上，用低倍显微镜检查 . 看液体中有无运动活泼的幼虫 .本法简单易行 ， 效果亦佳 ， 它主要用于绵羊、 山羊和鹿的粪便检查 ， 因这些动物粪便呈球, 使幼虫星, 较为干燥 ,不易破碎 ,幼虫常常集中在粪球表面 , 并且很易游出到温水中去。