此论文已发表于《食品与药品》第4期

1、此论文已发表于食品与药品年第期测定厄贝沙坦片有关物质梁艳芬，许，黎，李（广东药学院药科学院，广东广州 ）摘 要：目的建立测定厄贝沙坦片有关物质含量的方法。方法采用色谱柱（ 4.6 ， ），以乙腈溶液（，用三乙胺调至）为流动相，流速，柱温，检测波长；用外标法计算有关物质的含量，以峰面积归一化法计算其他杂质的含量。结果主成分与有关物质的分离度大于，有关物质的质量浓度与峰面积在范围内线性良好（） ；平均回收率为（），为。结论方法简便、快速、准确可靠，适用于厄贝沙坦片有关物质检查。关键字： 厄贝沙坦；有关物质；含量测定；高效液相色谱法（列出个关键词）中图分类号 ：文献标识码 ：文章编号 ：（）:(,

2、Guangdong, Guangzhou ,.China)(4.6,).(,),; .;.().(),.,.: ; ;厄贝沙坦（）是一种长效的血管紧张素（）受体拮抗剂，能抑制转化为，特异性地拮抗血管紧张素型受体（） ，通过选择性地阻断与受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用 ，临床上主要用于高血压的治疗，具有口服有效，降压作用持久，药物不良反应小等特点 。目前，国家试行标准 和美国药典等 采用峰面积归一化法计算杂质含量。另有文献报道 采用主成分自身稀释对照法，误差均较外标法大。此外，经预实验发现已有标准的色谱条件下，磷酸盐易堵塞色谱柱，导致拖尾峰及保留时间重现性差。因此，我们参考

3、厄贝沙坦含量测定的报道 ，优化色谱条件并采用外标法建立了测定厄贝沙坦片中有关物质的高效液相色谱法（） ，同时测定了强酸、强碱、氧化、高温、高湿、光照条件下降解产生的杂质含量。结果表明建立的色谱分析方法能准确测定厄贝沙坦片中有关物质的含量，能更好地指导厄贝沙坦制剂的质量控制。材料仪器高效液相色谱仪（型泵、-20A 型紫外检测器、液相色谱数据工作站，日本岛津公司）；柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器公司） ； 色谱柱（ 4.6 250 mm， ，美国安捷伦）；电子分析天平、 天平（上海精密科学仪器公司） ；超声波清洗器（昆山市超声仪器公司）；-3C精密酸度计（上海雷磁仪器厂） ； 超纯水仪（北京飞翔塞思仪

4、器公司）。药品与试剂厄贝沙坦对照品（美国药典对照品，批号： ）；厄贝沙坦有关物质对照品（美国药典对照品，批号： ，纯度大于）；厄贝沙坦原料（浙江普洛家园药业公司，批号：）；厄贝沙坦片（广东药学院药物制剂教研室制备，规格： ，批号：，）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国 . . 公司）；三乙胺（分析纯，广州化学试剂厂） ；盐酸（分析纯，广州化学试剂厂）；磷酸二氢钾（分析纯，天津市大茂化学试剂厂） ；蒸馏水（屈臣氏集团）。方法与结果溶液的制备2.1.1 有关物质对照品溶液制备 取有关物质约 ，精密称定，置入 量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，制成 有关物质贮备液；精密量取贮备液 ，置入 量瓶，稀释至刻度，制成

5、 有关物质贮备液；精密量取贮备液 ，置入 量瓶，加甲醇稀释至刻度，制成 的有关物质对照品溶液。2.1.2 厄贝沙坦对照品贮备液制备 取厄贝沙坦对照品约 ，精密称定，置入 量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，制成 厄贝沙坦对照品贮备液。.3供试品溶液制备取厄贝沙坦片片，研细，精密称取粉末适量（约相当于厄贝沙坦 ），置入 量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀，制成 的供试品贮备液；精密量取贮备液 ，置入 量瓶，稀释至刻度，制成 的厄贝沙坦供试品溶液。.4系统适应性溶液制备精密量取厄贝沙坦对照品贮备液和 有关物质贮备液 ，置入量瓶，加甲醇稀释制成厄贝沙坦与有关物质均为的混合溶液，作为系统适应性溶液。色谱条

6、件与系统适应性实验色谱柱为（ 4.6 250 mm， ）；流动相为乙腈溶液（，用三乙胺调至），2 / 8流速为；柱温为 30 ；检测波长为；进样量为。：厄贝沙坦；：有关物质图系统适应性实验色谱图专属性实验取厄贝沙坦片细粉适量，共份，分别置入 量瓶，分别加入 ， 和 各 ，避光破坏 。份样品分别加入适量流动相溶解，酸、碱破坏的溶液调节至中性，用流动相定容，作为破坏实验的样品溶液。另取原料药和处方配比的辅料适量，同法进行原料药破坏实验和辅料空白破坏实验。 精密量取上述溶液各 ，分别进样。厄贝沙坦在酸、 碱条件下均有降解产物产生， 降解产物与主峰均能达到基线分离，分离度。由图可见，杂质为有关物质，在

7、酸、碱破坏条件下降解产生，杂质为碱破坏的降解产物。另从阴性实验可知， 空白辅料在此条件下无干扰。 结果表明：本法专属性良好。3 / 8：厄贝沙坦；：有关物质；：酸碱中和后出现的未知色谱峰；：未知杂质：空白；：有关物质图谱；：酸破坏样品图谱； ：碱破坏样品图谱； ：氧化破坏样品图谱图样品破坏实验色谱图线性实验精密量取有关物质贮备液（ ）适量，加甲醇稀释制成， ， 系列浓度溶液，精密量取 ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程： （），表明峰面积与浓度在 范围内呈良好的线性关系。加样回收率精密量取供试品贮备液份， 置入 量瓶，取份加甲醇，直接稀释制成空白溶液。另外

8、份分别精密加入有关物质贮备液（ ）， 各份，加甲醇稀释至刻度，制成分别含有关物质 ， 的供试品溶液。取上述供试品溶液 ，分别测定，按外标法以峰面积计算回收率，结果见表。表回收率实验结果 （）样品加入量测得量 回收率平均回收率4 / 8精密度精密量取供试品贮备液 ，置入 量瓶，加入有关物质贮备液 （ ），加甲醇稀释制成 的供试品溶液（含 有关物质）。按上述方法平行配制份溶液，分别进样测定，结果以峰面积计算，为 ；连续进样 ，以峰面积计算，为 ，表明本法精密度良好。检测限和定量限取线性实验项下溶液逐级稀释，依法测定，时测得检测限为，时测得定量限为 。另外，平行配制份定量限浓度的溶液，进样测定，峰面

9、积的为 ，保留时间的为 。含量测定与有关物质检查取批样品，按 .1.3 项方法配制成的厄贝沙坦供试品溶液；另配制的厄贝沙坦对照品溶液；按项方法配制 的有关物质对照品溶液。精密量取上述溶液各 ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（见图） 。按外标法以峰面积计算主成分含量与有关物质含量。 如有其他杂质峰， 按峰面积归一化法计算其他未知杂质的含量。结果表明，批样品中厄贝沙坦的含量分别为， ， 。有关物质含量的详细结果见表。表杂质定量结果批号杂质数有关物质含量总杂质含量5 / 8：厄贝沙坦；：有关物质图含量测定与杂质检查稳定性考察影响因素实验取批样品，经高温（ ）、高湿（相对湿度 ）、光照（照度 ）处理，

10、分别于 和 取样，按 .1.3 项方法，分别配制成 的厄贝沙坦供试品溶液， 精密量取上述溶液各 ，分别注入液相色谱仪， 记录色谱图。 按外标法以峰面积计算有关物质含量，如有其他杂质峰，按峰面积归一化法计算总杂质含量。表影响因素实验杂质测定结果批号杂质不同处理条件、不同考察时间样品中杂质含量高温高湿光照有关物质总杂质有关物质总杂质有关物质总杂质加速实验取批样品，按市售包装，在温度 2 、相对湿度 的条件下放置个月。第，个月分别取样次， 按.1.3 项方法，配制成的厄贝沙坦供试品溶液， 精密量取上述溶液各，分别注入液相色谱仪， 记录色谱图。 按外标法以峰面积计算有关物6 / 8质含量，如有其他杂质

11、峰, 按峰面积归一化法计算总杂质含量。表加速实验杂质测定结果批号加速实验不同时间杂质含量个月个月个月个月个月杂质总杂质杂质总杂质杂质总杂质讨论流动相选择参考国家药品标准 及已有报道 ，厄贝沙坦含量测定多采用乙腈磷酸缓冲液与乙腈磷酸二氢钾缓冲液作为流动相。 经预实验发现： 乙腈磷酸二氢钾缓冲液体系能同时适用于 与 粒径的色谱柱；而乙腈磷酸缓冲液体系仅在使用 粒径色谱柱时，主峰和有关物质的色谱峰才能达到基线分离；此外， 流动相中含有磷酸盐，实验发现在使用粒径 色谱柱时， 色谱柱更容易发生堵塞， 导致被测物保留时间的重现性差及峰型不佳，不利于药品长期实验的进行。综合以上意见， 选择了粒径 的色谱柱，

12、 乙腈磷酸二氢钾缓冲液为流动相。 在此色谱条件下， 主峰与杂质峰能达到基线分离、峰型良好、重现性佳，同时延长了柱子的使用寿命。波长选择制备相同浓度的厄贝沙坦溶液与有关物质溶液，进行紫外扫描， 厄贝沙坦在 处有较强吸收，与 处分别有肩峰，但处属末端吸收，噪声大，不予采用。处厄贝沙坦与有关物质的色谱峰强度均较大，辅料无干扰，因此选择为本品的检测波长。杂质限量厄贝沙坦样品在强酸、 强碱、高温、高湿等破坏条件下均发生一定程度的降解。碱性条件下，约 处出现一个含量较高的杂质峰，结合已知杂质对照品的色谱图，可知该杂质为厄贝沙坦的主要降解产物有关物质 。参考美国药典 中厄贝沙坦的杂质限量要求，有关物质不得

13、，其余单个杂质不得 ，杂质总7 / 8量不得。杂质检查结果显示：有关物质的含量分别为， ， ，杂质总量分别为 ， ， ，批样品均符合标准。稳定性研究本品经影响因素实验和个月加速实验考察后，颜色、气味、外形等均符合要求，有关物质与总杂质均未发生显著变化（）。其中，光照条件下无明显降解产物生成，高温和高湿条件下有关物质与总杂质含量均有增加。提示本品对温度和湿度较敏感，应在阴凉处密封保存，防止水分和高温导致降解。参考文献张睿瑞 , 刘文涛 , 霍艳双 , 等 .法测定人血浆中厄贝沙坦的浓度.中南药学 , , (): ., , , .:(). , , (): .熊思敏 . 厄贝沙坦缓释片的研制. 广州 : 广东药学院 , .艾又生 , 徐楚鸿 , 陈华庭 , 等 .法测定血清中厄贝沙坦的含量. 中国药房 , , (): .国家食品药品监督管理局 . 国家药品标准 (). . : . : .孙启泉 , 刘燕 , 施介华 , 等 . 法测定厄贝沙坦的含量及有关物质. 浙江化工 , , (): .江东波 , 马晓鹂 , 蔡伟明 , 等 .法测定厄贝沙坦缓释胶囊中主药及有关物质的含量. 中国药房 , , (): .惠芳 , 宋敏 , 杭太俊 . 厄贝沙坦氢氯噻嗪片的含量测定和有关物质研究. 中国新药杂志 , , (): .益磊 , 施志顺 ,周志美 , 等 . 法测定厄贝沙坦胶囊中厄贝沙