【word】 离子色谱用于洛铂中乳酸定值的方法研究

1、离子色谱用于洛铂中乳酸定值的方法研究56化学分析计量2009年,第l8卷,第3期离子色谱用于洛铂中乳酸定值的方法研究赵振东吴璐阳谢艳丽冯玉红(1.热带生物资源教育部重点实验室,海南大学分析测试中心,海口570228;2.益鑫美咨询投资有限公司,海口570125)摘要研究了离子色谱用于洛铂中乳酸定值的方法.采用ionpacas9一hc阴离子分析柱,抑制型电导检测器,进样体积为25l,na2co,一nahco3为等度淋洗液,通过正交设计试验,确定了优化的色谱条件.乳酸的检出限为0.079m#l,测量结果的相对标准偏差为0.67%(n=10),方法线性范围为5.080.0mg/l,样品平均加标回收率

2、为99.27%一100.54%.利用正交试验的稳定性检查和回收试验证明了该分析方法的可靠性.此法具有操作简单,快速,灵敏度高,成本低的特点.关键词离子色谱洛铂乳酸洛铂(1obaplatin,d一19466)化学名为1,2一二氨甲基.环丁烷哥l酸合铂,是一种铂(1i)铬合物的非对映异构混合物,也是一种新型的抗肿瘤药物,主要用于治疗乳腺癌,小细胞肺癌及慢性粒细胞白血病.洛铂中1,2.二氨甲基一环丁烷为稳定配基,乳酸为离去基团,其抗肿瘤活性源于dna一药物加合物的形成,主要是gg和ag的链内交联.洛铂能影响cmyc基因的表达,而cmyc的表达与肿瘤的发生,凋亡和细胞增殖有关.同时,它能克服一些临床前

3、肿瘤模型对顺铂的抗性.工业上,洛铂合成主要以1,2一二氰基环丁烷为原料,通过还原,缩合,环合3步反应得到.由于在环合反应中,乳酸作为原料与缩合产物结合生成洛铂,因此可以通过检测乳酸含量来确定环合反应的转化率j.目前,分析乳酸的方法主要是气相色谱衍生化法,此法不但费时,操作复杂,成本高,而且准确度低.离子色谱一直是分析阴阳离子的有效手段.笔者应用正交设计试验,通过改变柱温,淋洗液中n%co浓度,淋洗液流速及检测池温度,选取了最佳的乳酸分离条件并对实物洛铂进行了分析,得到了较理想的结果.此方法具有分析时间短,操作简单,准确度高,成本低的特点.1实验部分1.1主要仪器与试剂离子色谱仪:ics一150

4、0型,配阴离子分析柱(ionpacas9一hc型,250mmx4lnm)和抑制器(asrsultral型,4mm),美国dionex公司;乳酸:100%,美国sigma公司,准确配制浓度为1000mg/l乳酸标准溶液,实验中所用标准溶液均由此逐级稀释而成;洛铂:由客户提供;na2co.,nahco:分析纯,广州化学试剂厂;实验室用水均为超纯水,电阻率为18.2mq?cm:淋洗液的配制:准确配制na:co一nahco,混合溶液3份,其中nahco浓度均为1.8mmol/l,na2co3浓度分别为1.5,2.2,3.5mmol/l,用0.45m微膜过滤,超声波脱气10rain后用氮气保护.2结果与

5、讨论2.1分析条件的优化利用正交设计表安排试验,研究柱温,淋洗液naco浓度,流速和检测池温度对试验结果的影响,从而确定了优化的分析条件.准确配制20m#l的乳酸标准溶液,每种条件下重复进样3次,进样体积为25,电导检测,采用色谱峰面积进行积分分析.正交设计和测试结果分析见表1.根据表1的方差分析表明,柱温从30cc变化到40,淋洗液na2co,由1.5mmol/l变化到3.5mmol/l,淋洗液流速由0.8ml/min变化到1.0ml/min,检测池温度由30c变化到4oci=时,峰面积变化显着.从获得最大峰面积考虑,试验中得到优化分析条件为:柱温30,淋洗液中naco,浓度1.5mmol/

6、l,nahco浓度1.8mmol/l,淋洗液流速0.8ml/min,检测池温度40.但是由于检测池温度相对于其它因素,影响甚小,而且温度过高也会减少其使用寿命,因此结合实际情况,最终优化条件为:柱温30,淋洗液中naco浓度1.5mmol/l,nahco浓度1.8mmol/l,流速0.8ml/min,检测池温度30.收稿日期:200902-23赵振东,等:离子色谱用于洛铂中乳酸定值的方法研究57表1正交试验设计和数据分析结果序na2c03/流检测池峰删?min号柱lnl.min一温l23总计mmd?l一1301.50.8300.92280.92240.92352.7鹋72302.2o.9350

7、.78260.7829o.783o2.34853303.51.0加o.70740.70790.707o2.12234351.50.9加0.82440.82390.82482.473l5352.21.o3o0.72970.729l0.72942.18826353.50.835o.77770.77750.77792.333l7401.51.0350.76030.76080.75982.28098402.2o.s柏o.86680.86650.86622.59959403.50.930o.68390.68410.68382.0518k17.23957.52277.70l37.0087r2/.sr砭&a

8、mp;47.13626.87346.9625l6.5927n14166.93226.5昕26.59147.1949l0.80440.83590.85570.7787n7772n79290.7637n7736o.77020.72300.7324n7994r0.03410.11280.1233o.02580.9n05840.o740n0034san00000.00342如18.000020.0000胍0.o0290.02920.03700.00l7椰0.0000椰0.0002fi7.4265l73.4401219.71499926)05.2.20)3.彻d1.2,20)5.84892.2检出限在最

9、佳实验条件下,用标准溶液与空白交替测量,计算3倍空白值的标准偏差(/,q-_20)相对应的浓度即为检出限,本方法的检出限为0.079me/t,.2.3方法的线性范围与相关系数配制浓度为5.0,15.0,25.0,40.0,50.0,80.0mg/,的6个标准溶液,在优化色谱条件下,每个浓度重复进样2次,对峰面积y与溶液浓度进行线性回归得线性方程为y=0.0529x一0.1016,乳酸浓度在5.080.0mg/l之间具有良好的线性,相关系数为0.9998.2.4精密度试验配制质量浓度为10mg/l的乳酸标准溶液,在优化条件下,平行进样10次,测定结果为10.02,10.03,10.01,10.0

10、1,10.o2,10.02,10.o1,10.02,1o.02,10.o1mg/i,其均值为10.02mg/i,相对标准偏差为0.67%,可见方法的精密度完全达到分析要求.2.5校正曲线的稳定性为了解测定结果的准确性,必须考查校正曲线的稳定性.这需要建立校正曲线并计算校正曲线及其斜率与截距的标准偏差.为检验校正曲线的稳定性,配制质量浓度分别为5.0,15.0,25.0,40.0,60.0rag/r,的5个标准溶液,在上述优化条件下,得到5条校正曲线.各校正曲线的线性回归方程,相关系数及截距与斜率的相对标准偏差列于表2.由表2可知,各校正曲线的截距和斜率没有显着变化,表明校正曲线是稳定的.表2各

11、校正曲线的线性回归方程及其参数相关系线性回归方程数平方截距标准偏差斜率标准偏差),=0.0522x一0.08690.9998,=0.0522x一0.08630.9998y=0.052lx一0.08600.99985.48lo-54.16l04y=0.052lx一0.08600.9998,=0.0522x一0.08640.99982.6回收试验配制两个标准溶液(a和b)进行加标回收试验,每个样品重复进样3次,分析结果列于表3.由表3可见,该分析方法用于乳酸定值是可靠的.表3加标回收试验【,l=3)标准本底值/加标量/测得量/回收溶液mg?l一lng?lling?ll%a1o.oo5.0014.8

12、999.27b30.005.0o35.191o0.542.7样品测定准确称取样品洛铂(29o.00.2)mg,溶于50ml容量瓶中,轻轻振荡至完全溶解.定容后,用0.45ixm针头过滤器过滤.在优化色谱条件下,测得洛铂中乳酸含量为0.24%,符合内控标准.乳酸标准品及样品洛铂离子色谱图见图1,图2.5.06.07.08.09.0t/mm图1乳酸标准品离子色谱图4.05.06.07.08.09.0t/min图2样品洛铂离子色谱图3结语实验中要注意以下两点:(1)配制淋洗液时,速度要快,尽可能少暴露在空气中.(2)分析过程中,58化学分析计量2009年,第18卷,第3期淋洗液用氮气保护,以免空气中

13、二氧化碳溶于水后产生碳酸根,干扰乳酸的保留时间.离子色谱分析方法用于乳酸含量的测定,分析只需8min,具有分析速度快,结果准确,可靠,成本低的特点,具有良好的应用前景.参考文献1mckeagemj.lobaplatin:anewantitumourplatinumdrugj.expertopiniononinvestigationaldrugs,2001,10(1):119128.2刘秀峰.洛铂的临床研究进展j.临床肿瘤学杂志,2006,11(7):549552.3gietemaja,veldhuishj,guchelaarhj,eta1.phaseiiandphannacokineticst

14、udyoflobaplatininpatientswitllrelapsedoval-iancancerj.brjcancer,1995(71):13021307.4stemburgcn,demulderp,fossas,eta1.lobaplatininadvancedurethelialtracttumoursj.annoncol,1997(8):695696.5hisq.aantineoplasticdruglobaplatinj.worldclinicaldrugs,20o5,26(5):3l6.6冯秀珍.洛铂的合成j.中国现代应用药学杂志,2006,23(6):465466.dete

15、rnaonoflacticacidinlobaplatinbyionchrotograp=hyzhaozhendong,wuluyang2,xieyanli,fengyuhong.(1.keylaboratoryoftropicbiologicalresourcessponsoredbytheministryofeducation,analyticalandtestingcenter,halnanuniversity,haikou570228,china;2.yixinmeiconsulting&investingco.,ltd,haikou570125,china)abstracta

16、methodforprecisequantitationoflacticacidinlobaplatinbyionchromatographywithsuppressionconductivitydetectionwasdeveloped.theseparationoflacticacidwetsconductedonanionpacas9一hcanionexchangeco|unlnwithna2co3一nahco3solutiona8isocraticeluent.,i1leinjectionvolumewas25.anorthogonaldesignedexperimentwascarr

17、iedouttoevaluatetheeffects0ftheexperimentfactors.thedetectionlimitwas0.079mg/l.andtllerelativestandarddeviationofdeterminationresultwas0.67%(n=lo).nlelinearrangeofcalibrationcurvewas5.080.0mg/l.averagerecoveryofstandardadditionwas99.27%一100.54%.nlismemodhasbeenprovedmorereliableandmoresimplewithlowe

18、rcost.highsensitivityinshorttime.keywordsionchromatography,lobaplatin,lacticacid中国将加强人感染甲型h1n1流感检验检疫国家质检总局4月25日发布紧急公告,要求来自甲型h1n1流感流行地区的人员,如有流感样症状的,人境时应主动向检验检疫机构口头申报.据世界卫生组织通报,近期美国,墨西哥出现甲型h1n1流感(a/h1n1)疫情.公告称,过去两周去过流行地区的人员,入境后出现流感样症状的,要及时与当地检验检疫机构联系.公告要求,前往甲型h1n1流感流行地区的人员,可以向检验检疫机构及其国际旅行卫生保健中心了解该地区的疫

19、情;旅行中或旅行后出现流感相关症状者,应立即就医,并在入境时向检验检疫机构申报.口岸检验检疫机构要加强对上述地区入境人员的体温检测,医学巡查等工作,对主动申报或现场查验发现有流感症状的人员要仔细排查,对受染人或受染嫌疑人采取公共卫生观察,隔离,送指定医院诊治等检疫措施.(高)中科院”光谱椭偏成像系统”研制成功在中国科学院重大科研装备研制项目的资助下,力学所国家微重力实验室靳刚课题组成功研制出”光谱椭偏成像系统”及其实用化样机.该研究是利用高灵敏的光学椭偏测量术,同时结合光谱性能及数字成像技术,具有对复杂二维分布的纳米层构薄膜样品的快速光谱成像定量测量能力.光谱椭偏成像系统的特点在于信息量大,可同时测量大面积样品上各微区的连续光谱椭偏