生物技术总结样本

1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。生物技术总结第一部分一、 外殖体消毒( 1)将需要的材料用水洗干净( 2)表面灭菌用70%酒精浸 30-60s 左右( 3)灭菌剂处理0.1%升汞 10 分钟、 或在 10%漂白粉上清液中浸泡 10-15 分钟( 4)用无菌水冲洗 3-5 次左右二、 论述植物生长调节物质在组织培养中的作用? 并列举常见的种类。(1) 生长素类 : 主要被用于诱导愈伤组织形成 , 促进细胞脱分化 ; 促进细胞伸长 ; 诱导根的分化 , 促进生根。( 2)IAA( 吲哚 乙酸 ) ; NAA(萘乙酸 ); IBA(吲哚丁酸 ); 2,4D(2,4 二氯

2、苯氧乙酸 ) 。(3) 细胞分裂素类 : 诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。促进细胞分裂与扩大。抑制根的分化。抑制衰老, 减少 叶绿素分解 , 有保鲜效果。包括6BA(6苄基腺嘌呤 ) 、 Kt (激动素 ) 、 Zt (玉米素 ) 等。三、 脱毒苗怎么鉴别 : 提取脱毒苗的组织液进行病毒检测,没有检测到带毒的植株可判定为脱毒苗。四、 原生质体融合的方法（ 1） 自发融合（ 2） 化学融合 a.NaNO3法 b. 高 pH-高钙法 c. 聚乙二醇诱导法 d. 多聚化合物法（ 3） 电场诱导法 ( 细胞电融合 )（ 4） 激光诱导法（ 5） 基于微流控芯片的细胞融合技术（ 6） 高通量细胞融合芯片（

3、 7） 其它细胞融合技术方法五、 脱分化 :已经分化的植物器官、组织或细胞 ,当受到创伤或进行离体 ( 也资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。受到创伤 ) 培养时 , 已停止分裂的细胞 , 又重新恢复分裂 , 细胞改变原有的分化状态 , 失去原有结构和功能 , 成为具有未分化特性的细胞。六、 再分化 : 已经脱分化的细胞在一定条件下 , 又可经过愈伤组织或胚状体 , 再分化出根和芽 , 形成完整植株 , 这一过程叫作再分化。七、 继代培养 : 愈伤组织培养一段时间后必须转移到新鲜培养基上以保持培养物的正长生长 , 更换一次培养基称为一次继代培养。八、细胞全能性 : 指

4、细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。九、 热处理脱毒 : 主要是利用病毒受热的不稳定性而失去其活性达到脱病毒目的。十、 MS 培养基组成和配制的注意事项 组成 大量元素 : NH 4NO3、 KNO3、 CaCl 2 ?2H2O、 MgSO4?7H2O、 KH2PO4、微量元素 : KI 、H3BO3、MnSO4?4H2O、ZnSO4?7H2O、Na2MoO4?2H2O 、?2H2OCuSO4有机成分:?5H2O、 CoCl2 ?6H2O 铁盐 : FeSO4?7H2O、 A( 肌醇 )、 B( 烟酸 )、 盐酸吡哆醇Na2-EDTA(维生素B6)、盐酸硫胺素 ( 维生素 B1

5、) 、 甘氨酸、水、 琼脂。 注意事项 :1 配制大量元素母液时 ,要按照使用时高 10 倍的数值称取 , CaCl2?2HO要单独配制2 微量元素母液按浓缩100 倍的数值称取 ,铁盐作为一组要单独配制3 铁盐配制时要将FeSO4?7H2O和 Na2-EDTA?2H2O分别溶解 ,溶解时一定要加热 ,配置完后要调 pH 至 5.5 。4 有机物母液要求浓缩50 倍,除蔗糖按 3%单独临时称量5 母液最好在 24保存 ,不宜保存时间过长 ,特别是有积类6 配制母液和营养培养基时,所用蒸馏水或离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的 ( 分析纯 )7 称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专

6、用一药匙资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。8 加热琼脂时 ,制备培养基的过程中 ,不能离开。十一、原生质体怎么获取 :采用机械法或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞十二、常见的培养基 : MS 培养基、 White 培养基、 B5 培养基、 N6 培养基十三、物理灭菌方法 :干热灭菌法 ( 火焰灼烧、烘箱热空气灭菌 ) 、湿热灭菌法 ( 巴氏消毒法、煮沸消毒法、间歇灭菌法 )加压灭菌法 ( 高压蒸汽灭菌法 )低温抑菌法 ( 冷冻法 )十四、单倍体 ( 花粉或花药 ) 培养在育种学方面的作用缩短育种周期 提高目标基因型的选择效率 排除杂种优势对后代选择的干扰遗传研究的良好的实

7、验材料体系突变体的筛选消除致死基因选育新型选育新型自交系 遗传转化的受体材料 克服远缘杂交后代不育第二部分一、 限制性内切酶 : 在生物体内有一类酶 , 它们能将外来的 DNA切断 , 即能够限制异源 DNA的侵入并使之失去活力 , 但对自己的 DNA却无损害作用 , 这样能够保护细胞原有的遗传信息。 由于这种切割作用是在 DNA分子内部进行的 , 故名限制性内切酶 ( 简称限制酶 ) 。二 、 基因工程载体结构特征具有外源基因重组插入的多克隆位点具有能够在宿主细胞中进行复制的有关元件载体一般具有可用于阳性克隆鉴定或者重组子筛选所需要的选择标记载体一般对受体细胞不具有毒性,同时对坏境不存在显著

8、的影响三、 质粒 : 存在于宿主细胞染色体之外的一种裸露的双链 DNA分子或者 RNA分子。四、 质粒的 DNA不亲和性 :书 151-152 页 ( 考选择填空或判断 )五、 质粒载体构建的基本原则:1. 质粒载体具有能够自我复制的元件资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。2. 质粒载体上具有允许外源基因插入的多克隆位点3. 质粒载体上具有可供筛选的抗生素标记4. 构建的质粒载体应该足够小六、 cos 位点 :野生型入噬菌体 DNA的两侧具有 2 个黏性末端 ( 由 12 个核苷酸组成 ) 。七、 Cosmid 载体与入噬菌体载体和质粒载体相比具有哪些特点?1.Cos

9、mid 载体具有入噬菌体的 cos 位点 , cos 位点进行相互连接一会能够像入噬菌体一样 , 高效转导大肠杆菌。 Cosmid 载体进入大肠杆菌细胞以后 , 由于其装载有外源片段的载体上具有两个 cos 位点 , 因此能够实现自身的环化过程。 2.Cosmid 载体上没有入噬菌体生长的全部必要基因 , 不能够产生溶菌和溶源周期 , 因此 Cosmid 载体不能够产生子代噬菌体颗粒。可是 , Cosmid 载体能够经过添加头尾蛋白完成包装过程。3.Cosmid 载体具有质粒载体的自我复制起点ori 以及抗生素的标记基因 ,因此Cosmid 载体转化大肠杆菌以后 ,完全能够像质粒一样在大肠杆菌

10、中进行繁殖。4.Cosmid 载体往往比较小 , 能够插入较大的外源基因片段。大多数 Cosmid 载体的长度小于 10kb, 按照入噬菌体的包装能力 , 入噬菌体的最大承载外源片段能力为 ( 105%*48kb) -Cosmid 载体的长度。由此能够计算出 Cosmid 载体能够克隆外源片段长度为 15-45kb 。由于 Cosmid 载体具有大片段克隆能力 , 因此Cosmid载体往往用于基因组文库的构建 , 而入噬菌体载体往往用于 cDNA文库的构建。六、 利用 Cosmid 载体构建基因组文库的基本过程1.载体的制备2.基因组片段的酶切消化3.片段的分级4.基因组片段与载体的连接5.遗

11、传转化九、 基因克隆 :在已经知道待克隆基因的氨基酸或者核苷酸序列的基础上分离基因全长七、 克隆基因的步骤的基本过程:基因组文库的构建、阳性克隆的筛选、阳性克隆的插入片段测序和功能资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。基因的鉴定八、 酵母双杂交的基本原理:真核细胞的转录激活作用是由功能相对独立的DNA结合结构域和转录活化结构域共同完成。九、 植物遗传转化分类 :1. 按照遗传特性分类 : 瞬时表示转化和稳定遗传转化2. 按照载体特性分类 : 生物载体介导的遗传转化 : a. 病毒载体介导的遗传转化b.农杆菌质粒载体介导的遗传转化非生物载体介导的遗传转化: a. 化学方法

12、 : 聚乙二醇介导脂质体法b.物理方法 :电穿孔法、显微注射法基因 枪法超声波法等十、 植物转化载体必须具备的条件1. 能够将目的基因成功导入受体植物细胞中 ;2. 具有能够被受体植物细胞的复制和转录系统所识别的有效 DNA序列 , 以保证导入的外源基因能在手提植物细胞中正常复制和表示。十一、 Ti质粒 :为植物根癌土壤杆菌菌株中存在的质粒,其特定部位与植物核内 DNA组合来表示信息 ,使植物细胞肿瘤化。十二、 Ti 质粒机构示意图包括 : T-DNA区、 毒性区 ( Vir 区) 、 复制区和质粒接合转移位点。十三、 中间载体 : 将去除了 onc 基因的 T-DNA片段克隆到多拷贝的大肠杆

13、菌的质粒中资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。构建成卸甲载体。十四、 中间载体需要具有的特征1.具有一个或几个细菌选择标记2.含有植物选择标记3. 含有多克隆位点 4. 具有 bom位点十五、 常见的抗生素卡那霉素链霉素 氯霉素潮霉素壮观霉素等十六、 植物遗传转化 : 其由成为植物转基因或植物基因工程 , 七研究的关键是利用充足 DNA、 细胞组织培养或种质系统,转化等技术 ,将外源基因导入植物细胞或组织,使之定向重组遗传物质,改良植物性状 ,培育优质高产作物新品种。十七、 植物基因工程的过程 : 农杆菌是从土壤中分离出来的革兰氏阴性细菌 , 其根癌农杆菌能将自身 T

14、umor-inducing(Ti) 质粒的一段 DNA(T-DNA)转移到植物细胞中 , 从而使植物损伤部位形成冠瘿瘤。 T-DNA的转化是在 Ti 质粒上 Vir 区一系列 Vir 基因的作用下产生的。 T- DNA是质粒上一段 10-30 kb 的序列 , 编码5 个与致瘤有关的生长素和细胞分裂素合成酶基因。其左右边界各有一段高度保守的 25 bp 的同向重叠序列与 T-DNA的转化有关。 其中右边界是 VirD2 的共价结合序列及 VirD1/VirD2 内切的靶序列 , VirD2 与右边界的共价结合及邻近右边界的过度驱动序列导致了单链 T-DNA由右边界剪切并转移的极性 , 而 Vi

15、rD2 与左边界的结合可能导致了载体骨架序列的转移。农杆菌侵染时,在单糖转运蛋白ChvE的配合下 ,双元组分系统的VirA 作为感受信号的天线分子受到植物伤口产生的酚类物质和糖类的诱导而自动磷酸化,而且随后使双元组分系统的另一组分VirG磷酸化为活性状态,进而经过vir-box激活其它Vir基因的表示 ,最后由VirD1/VirD2剪切的单链VirD2-T-DNA 复合体由VirB和VirD4蛋白组装成的TypeIVSecretionSystem(T4SS)运送到宿主细胞,另外的几资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。个 Vir 蛋白 VirE2 、 VirE3 、 V

16、irF 、 VirD5 也同时经过这个通道运送到宿主细胞质中。 VirD2-T-DNA 复合体在进入宿主细胞质中不久,VirE2就结合上去 , 经过 VirD2 核定位信号的引导并在几个宿主蛋白和农杆菌因子的协助下向细胞核转运 , 最后结合在 T-DNA上的蛋白被降解 , 而 T-DNA经过一种尚不清楚的机制整合到宿主基因组中。 由于 T-DNA转化不具有序列特异性 , 因此可用任何感兴趣的基因能代替内源的 T-DNA基因进行转化。十八、 基因枪 : 又称为生物弹法、 微粒枪法或微粒轰击法 , 是依赖高速的金属微粒将外源基因导入活细胞的一种转化技术。十九、 电激法 : 利用高压电脉冲作用 , 在原生质体膜上”电激穿孔” , 细胞膜上会出现短暂可逆性开放小孔,为外源物质提