在肿瘤学研究中的应用PPT课件

1、Medline Publications citing Flow cytometry” 0 1000 2000 3000 4000 5000 1960年 1965年 1970年 1975年 1980年 1985年 1990年 1995年 2000年 Year Publications The use of flow in research has boomed since the mid-1980s 应用范围 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 肿瘤病理的FCM分析 肿瘤分子生物标志物的FCM分析 细胞增殖和凋亡的FCM分析 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 理论依据 G0期 不参与增殖周期循环的一

2、群细胞， 即为静止期细胞，其细胞DNA含 量为较恒定的2C值 （一）细胞周期 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 理论依据 G1期 细胞具有增殖活性，参与细胞周 期循环的一群细胞G1期细胞值与 G0 期细胞DNA值相同，均为二 倍体DNA含量 （一）细胞周期 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 理论依据 S期 细胞DNA含量值逐渐增加，从 2C 值4C值直到细胞DNA倍增结束 （一）细胞周期 G2/ M期 在M期分裂为两个子细胞之 前，G2和M期细胞的DNA 含量均为恒定的4C值，即 为四倍体细胞群 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 理论依据 （一）细胞周期 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 理论依据 （

3、二）荧光染料与细胞DNA的关系 荧光染料可与细胞DNA特异性结合， 并有一定的量效关系 1 DNA含量的多少与荧光染料的结合成正比 2 荧光强度与DNA吸收荧光分子多少成正比 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 理论依据 （二）荧光染料与细胞DNA的关系 3 荧光脉冲与组方图的通道值成正比 因此 ，FCM DNA定量分析一个细胞群时，可将 二倍DNA含量分布组方图分为三部分，即G0/G1， S，G2 / M。 G0/G1和G2 / M细胞峰DNA的分布均成 正态分布。S期可以认为是一个加宽的正态分布 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 G1 S phase G2 M G1 12 1 DNA conte

4、nt The Cell Cycle G0/1 G2/M S 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA含量的计算方法 1 FCM定量分析一个细胞群，其 DNA含量值是以 DNA指数(DNA index :DI)表示其相对DNA含量 的 实验样品细胞G0/1峰的均道值 DI=- 正常细胞G0/1峰的均道值 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA含量的计算方法 2 一个正常的二倍体细胞峰，其G0/G1期细胞DNA 含量为2C，DI值为1.0，G2 / M期细胞DNA含量 为4C，DI值为2.0 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA含量的计算方法 例如 如果一个未知DNA含量的细胞群G0/G1期细胞峰

5、的 均道值在60道，正常二倍体标准细胞G0/G1峰均道 值也在60道，那么，这个未知DNA含量的细胞群 DI=1.0。如果一个未知DNA含量的细胞群G0/Gl峰 均道值在90道，DI=1.50 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA倍体的判定标准 DNA倍体的判定是根据所测细胞群DNA含量分布 组方图G0/G1峰的DNA相对含量值，即DNA指数值 进行判定的，从理论上讲，二倍体的DI值应为1.0， 四倍体的DI值应为2.0 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA倍体的判定标准 以二倍体参考标准细胞G0/G1期细胞DNA含量定为 2C值, DI=1.0，基于标准二倍体细胞的CV值在5%， 判定标

6、准即： DNA二倍体2C士2CV值 DNA异倍体2C士2CV值 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA倍体的判定标准 即DI1.0士0.1(0.91.10) 为二倍体 DI1.0士0.15(0.851.15) 为近二倍体 DI=2.0士2CV(1.902.10 ) 为四倍体 DI 2.10 多倍体 其余DI值均为非整倍体 在计算DNA异倍体时，把近二倍体，多倍体，四倍 体，非整倍体划为异倍体(Heteroploidy)的范畴 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 自FCM被引入肿瘤研究以来, 已经对各类型新鲜 肿瘤组织和石蜡包埋肿瘤组织进行DNA倍体的定量分 析, 为

7、研究肿瘤DNA含量的分布状态, 提供了非常直观 的参考信息 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 DNA组方图常见的类型以单一DNA干系多见, 说 明肿瘤的发生多以单一细胞克隆发生而来。我们对 3050例恶性肿瘤DNA倍体分析结果显示, 单一DNA干 系的组方图占80-90% 左右, 双干系或多干系的DNA 组方图较少见 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图

8、类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体的组方图类型 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 DNA含量检测结果报告 报告中至少应包含以下信息: (1)DNA倍体,包括所有群体的DI (2)主要G1峰的CV (3)S期比例 (4)必要的简单评价：如细胞数的不足、碎片较多、 CV太高等 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 肾细胞癌 前列腺癌 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用

9、 膀胱癌 FCM与膀胱癌的诊断 FCM在膀胱癌术后随访的作用 FCM在判定膀胱癌的恶性程度中的作用 FCM在预测膀胱癌的复发和预后中的作用 FCM在指导膀胱癌的治疗中的作用 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其癌细胞 的分裂增殖能力异常活跃，细胞的DNA含量多有不同 程度的增高 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 标本来源 经膀胱镜或尿管冲洗膀胱脱所获标本含细胞数较 多，可提供良好的FCM检测标本，但需受器械 检 查之苦，尤其在随访中需多次留取标本，病人往 往难于

10、接受，所以，唯新鲜尿标本才是真正的非 侵入性检查方法 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 标本来源 应用尿液作FCM检测诊断膀胱癌是否可获得满意结 果尚有争议 White等曾报告86例膀脱肿瘤患者的尿液和膀脱冲 洗液作FCM检测，94% 的尿液标本和97%的膀脱冲 洗液 得到了满意的图形 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 标本来源 Pritchete等亦采 用新鲜尿与膀脱冲洗液标本， 发现 两者在图形显示及肿瘤检出率方面无明显差异 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤

11、中的应用 膀胱癌 标本来源 本研究室曾对l01例膀脱肿瘤患者作FCM检测，其中 78例取300-500ml新鲜尿液，23例取膀胱镜冲洗液， 结 果 发 现 肿瘤检 出率分别 为 84.61 %和86.95%， 两组 数 据 经 统计学处理无明显差异 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 标本来源 所以我们认为， 新鲜尿标本适用于做FCM标本，对 标本细胞数少，图形不满意者，可取膀脱冲洗液 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 膀胱冲洗液的收集方法 经膀脱镜或尿导管向膀脱内加压注入生理盐水 100-200

12、ml， 反 复抽吸3-4次，收集的冲洗液应 立即放入4冰箱内冷藏，存放时间不应超过24 小时。若标本中含红细胞，可采用加蒸馏水的 低渗方法去除 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 膀胱冲洗液的收集方法 将收集到的尿液或膀脱冲洗液离心后，PBS缓 冲液冲洗2次，用细尼龙网过滤以去除标本中杂 质或 细胞团块，离心弃上清液后用70%酒精固 定，放 10 冰箱贮存，最长贮存时间可达 6 个月 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌 FCM与膀胱癌的诊断 FCM在膀胱癌术后随访的作用 FCM在判定膀胱癌的恶性程度

13、中的作用 FCM在预测膀胱癌的复发和预后中的作用 FCM在指导膀胱癌的治疗中的作用 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌（FCM对膀胱癌的诊断） FCM DNA倍体分析诊断膀胱癌的标准： 出现与正常二倍体峰明显分离的 异倍体或近二倍体波型 高倍体细胞比值15%伴明显四 倍体细胞组成的波型 G0/l波型变异系数9% 凡出现上述标准之一者为FCM肿瘤阳性 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在泌尿系肿瘤中的应用 膀胱癌（FCM对膀胱癌的诊断） FCM DNA倍体分析诊断膀胱癌的标准： 可疑：无明显异倍体细胞群，超二倍体 细胞群大于10

14、15%之间 阴性：二倍体分布，超二倍体细胞2.10 多倍体 其余DI值均为非整倍体 在计算DNA异倍体时，把近二倍体，多倍体，四倍 体，非整倍体划为异倍体(Heteroploidy)的范畴 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌（有助于判定子宫颈癌预后） Jakobsen对DNA倍体与宫颈癌预后的关系作了研 究。结果提示， DI 值与生存期显著相关。 DI 大于 1.5 治疗易失败，DI小于1.5存活率高 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌（有助于判定子宫颈癌预后） 吴爱茹等研究结果指出，在DI

15、 1.5 的 60例 中，仅8例死于癌； 而DI 1.5 的 18 例中则有5例 死于癌，两组有显著性差异 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌（有助于判定子宫颈癌预后） FCM测定宫颈癌DNA含量显示，在 I 期子宫 颈癌患者中，肿瘤细胞DNA含量与其复发率，生 存率密切相关。 但临床分期、 肿瘤大小、病理分 类、 淋巴转移与肿瘤细胞的DNA 含量无明显相关 性 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌（有助于判定子宫颈癌预后） Davis等对 56 例宫颈癌病人的 FCM 研究资 料显示，异倍体

16、与预后无关。DI大于或小于1.5时 治疗失败率均等 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌（有助于判定子宫颈癌预后） 由于FCM测定标本来源不同，新鲜活检标本 与存档石蜡块不同，仪器基础参数不同，光源不同 等因素，所得研究资料不太一致，尚待进一步研究 证实 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌 （二）子宫内膜癌 （三）滋养叶细胞肿瘤 （四）卵巢肿瘤 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌 子宫内膜癌FCM DNA倍体分析 子宫内膜癌DNA倍体与临

17、床分期 子宫内膜癌DNA倍体与组织分级 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌的（DNA倍体分析） Atkin 和Hastin等用FCM分析57例宫内膜癌病 人，38例(73%)是二倍体， 14例(27%)是非整倍体， DI值在1.65-2.34。 8例转移癌中5例 (63%)是非整 倍体，其中2例伴有腹水，在腹水中的肿瘤细胞DI 值和原发癌相一致。据此，他们认为，大多数宫体 腺癌为DNA二倍体 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌的（DNA倍体分析） Moberger 对 37 例存活8

18、年以上和34例生存期 低于2年的宫体癌进行 DNA分析，发现2年内死亡的 病例中，82%是非整倍体 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌（DNA倍体分析） 预示：非整倍体病人预后差， 生存期短， 中 等分化和分化良好的肿瘤非整倍体者死亡率高于同 级别的DNA二倍体病人 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌 子宫内膜癌FCM DNA倍体分析 子宫内膜癌DNA倍体与临床分期 子宫内膜癌DNA倍体与组织分级 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内

19、膜癌（DNA倍体与临床分期） Iversen 认为期 和 期宫体癌中，非整倍 体的频率没有显著差异。39个I期病人中8个(12%) 是非整倍体，而10例 期患者中， 5个是非整 倍体，这些差异并不大 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌 子宫内膜癌FCM DNA倍体分析 子宫内膜癌DNA倍体与临床分期 子宫内膜癌DNA倍体与组织分级 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌（DNA倍体与组织分级） Iversen报道30例中，级分化腺癌至级分 化的腺癌，其DI值从1.1增加到1.47-1.6

20、9，差异是 显著的。 而级和级，级和级之间的差异则 不太显著 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌（DNA倍体与组织分级） 据报道，约1/3的子宫内膜癌具有非整倍体。 与卵巢癌、 宫 颈 癌 相 比 发生 非 整倍体率要低， 转 移 癌 的 非 整倍 体 发生率高于无转移病例。 而 非整倍体患者的死亡率明显高于二倍体 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌（DNA倍体与组织分级） 提示： DNA 含 量 值 可做为子宫内膜癌的一项 重要指标。 这项检查将在子宫内膜癌的预后方面更 有意义 实

21、体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （二）子宫内膜癌（DNA倍体与组织分级） 提示： DNA 含 量 值 可做为子宫内膜癌的一项 重要指标。 这项检查将在子宫内膜癌的预后方面更 有意义 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （一）宫颈癌 （二）子宫内膜癌 （三）滋养叶细胞肿瘤 （四）卵巢肿瘤 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤 绒癌和侵蚀性葡萄胎（恶葡）在我国和东南亚 一些国家发病率较高。葡萄胎是一种良性病变，文 献报道恶变率为10%-20% 实体肿瘤DNA倍体的

22、FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤 绒癌来自葡萄胎者占50% ，而恶葡则100%由 葡萄胎恶变而来。依据目前的治疗水平，绒癌的死 亡率高达20%-30% 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤 在葡萄胎中检出高危病人，及早诊断治疗，则 有可能使绒癌和恶葡的治疗时间缩短，减少化疗的 次数和副反应，同时可有效提高患者的生存率和生 存时间 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤 监测葡萄胎 DNA倍体与预后 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM D

23、NA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 以往对葡萄胎的监测从几个方面考虑：患者年 龄、子宫增大程度、水泡粒的大小以及病理诊断滋 养细胞增生程度等，还要根据同位素检测血中绒毛 膜促性腺激素（HCG)综合诊断。 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 目前，对于高危葡萄胎患者缺乏统一的划分标 准，所以对于预防性化疗多不支持。如果有方法能 对高危葡萄胎患者及时检出，及时治疗，则具有十 分重要的意义 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶

24、细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 庄桂霞等对64 例葡萄胎(恶性及未恶变者各32 例)用FCM测定DNA含量，结果如下表： 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 由表中可以看出未恶变与恶变者非整倍体率分 别为34.4%和59.4%，差异有显著意义。若以DNA 非整倍体作为一项指标来判断葡萄胎恶变，符合率 为 59.4%。 赵彩彦等检测 12 例葡萄胎，其中3例 非整倍体中2例恶变，符合率为66.

25、7% 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 在上组病人中， 恶变者 32 例只有2例病理为 滋养细胞重度增生。 因此从滋养细胞增生程度来考 虑有无恶变可能并不完全可靠 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 由此认为，DNA非整倍体预示葡萄胎的恶变 倾向，DNA定量分析可以作为其恶变的一项监测指 标 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 有作者用FCM分

26、析成功38例临床样本，其中绒 癌14例、恶葡12例、良葡12例。所有样品DNA直 方图均为单蜂分布 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体监测葡萄胎） 由表显示，绒癌和恶葡的异倍体发生率无显 著差异(P0.05)，二者均明显高于良葡 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤 监测葡萄胎 DNA倍体与预后 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检

27、测在妇科肿瘤中的应用 （三）滋养叶细胞肿瘤（DNA倍体与预后） 14例绒癌中12例异倍体，平均生存期16% 低危组：二倍体，同时SPF9% 中危组：其余 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤（非整倍体在交界性肿瘤的诊断价值 卵巢交界性肿瘤的组织学标准难以统一，近年 来学者们重点探讨了细胞DNA含量的诊断方法 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤（非整倍体在交界性肿瘤的诊断价值 大量研究资料表明，多数恶性肿瘤都有异常的 DNA含量，DNA非整倍体则是恶性肿瘤的一个标志。 卵巢的大多数良性肿瘤D

28、NA含量都是二倍体， 若出 现非整倍体，虽组织学还无恶性特征，但已具备潜 在恶性变 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤（非整倍体在交界性肿瘤的诊断价值 Friedlader (1984) 分析44例卵巢交界性肿瘤的 DNA含量，结果42例 (95%) 为二倍体肿瘤，仅2例 为非整倍体肿瘤，对后者进行复查，均已发现肿瘤 侵犯腹膜及网膜的种植瘤结，其中1例患者术后7个 月死亡。42例DNA二倍体的交界瘤，经随访313 年，均未复发或致死 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤（非整倍体在交界性肿

29、瘤的诊断价值 交界瘤DNA含量呈非整倍体具有恶性肿瘤特征 及浸润性生长的特性，故可视为对病理诊断的一个 补充，有利于及时制定正确的防治措施 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤（FCM分析与临床应用前景） Friedlander等对卵巢交界瘤的研究，发现DNA 异倍体的交界瘤预后差。其中l例在初诊后7个月内死 于肿瘤播散。认为交界瘤出现DNA异倍体，已具有 恶性肿瘤的特性 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤（FCM分析与临床应用前景） 对于病理学上难以区分良恶性的卵巢交界性肿 瘤，FCM

30、可提示其潜在恶变趋势，有助于对肿瘤的 生物学行为作出判断，并有助于患者的治疗及预后 预测 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM DNA倍体检测在妇科肿瘤中的应用 （三）卵巢肿瘤 卵巢癌的DNA倍体和SPF均为客观的重要预后 参数，使我们在已有的临床病理基础上，对卵巢癌 的恶性度及预后进行更有意义的评价，从而有助于 监测病情，制定更合理的治疗方案，直到化疗并评 价化疗效果，从而提高卵巢恶性肿瘤的诊疗水平 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 FCM已广泛用于脑肿瘤DNA含量的定量研 究及其肿瘤标志物的检测，并发现某些肿瘤生物 学标志物与预后有关 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析

31、 FCM在脑肿瘤中的应用 有作者对神经母细胞瘤石蜡包埋组织细胞 DNA含量进行FCM分析, 提示随着临床分期的增 高，异倍体出现率有增多的趋向，期异倍体高 于、期，异倍体肿瘤组S、 G2/M期百分比明 显高于二倍体组，随着临床分期的增高，异倍体 出现率明显增加 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 作者对60例星形细胞瘤DNA含量和S期细胞 进行分析： 二倍体和近二倍体肿瘤24例 ，DI = 1.10 0.08， S%=( 16.43.6)%， 非整倍体肿瘤36例，DI=1.450.28， S%=(21.73.7)% 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 二

32、倍体和近二倍体肿瘤DI值S期，细胞与非 整 倍体肿瘤相比， 统计学上有非常显著差异， 其组织学分级与DNA含量和S期时相分布有明显 相关性，随分级的增高，DI值和S期细胞亦增高 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 在有随访结果的46例的肿瘤中，DNA指数分 别为DI1.30和DI1.30 两组。DI 1.30的24例， 平均生存期为36.2 11.2月，两组生存期有显著 差异，22例生存期长的病人，S期细胞百分比为 16.43.7%，24例生存期短的病人，S期细胞百分 比为18.2士4.6% 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 提示： 肿瘤细胞DNA含量

33、和S%与恶性程度、组织学 分级有密切关系，随着组织学分级的增高，DI值和 标志着肿瘤增殖活性的S期细胞亦增高 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 有人对46例脑星形细胞瘤癌基因rasp21蛋臼 产物表达和 DNA 含量进行流式定量分析，试图揭 示二者之间的关系及其对预后的意义 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 结果表明，脑星形细胞瘤的DI值和P21FI值及 DNA异倍体的出现率分别随组织学分级的升高而 升高。 P21阳性率和异倍体出现率分别为50%和71.74%。 DNA异倍体肿瘤P21阳性表达率明显高于DNA二倍 体肿瘤的P21阳性表达率(分别为19

34、.1%和20.9%) 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 FCM在脑肿瘤中的应用 肿瘤细胞分化程度与P21表达密切相关。 分化 I级、级、级、级星形 细胞瘤， P21阳性表达率分别为 13.04%、17.4%、56.52%、 63.04%提示随组织学分级的增高，P21阳性表达 率也增高，随访资料亦提示DI值高和P21表达阳性 患者愈后差，生存期短 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （一）何杰金氏淋巴瘤 （二）非何杰金氏淋巴瘤 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （一）何杰金氏淋巴瘤 Brdkamp等以多参数FCM分析方法对137

35、例 Hodgkins 淋巴瘤的 DNA 异倍体进行了研究，137 个病例中有67例(49%)可见DNA异倍体。DNA指数 0.69-1.89不等，其中24例为亚二倍体。在多数病例 中异倍体细胞核的数目超过RS细胞和Hodgkin细胞 在肿瘤中所占的比例 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （一）何杰金氏淋巴瘤 提示： Hodgkins淋巴瘤中的恶性细胞并不仅仅限于传 统上所认为的RS/H细胞 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （一）何杰金氏淋巴瘤 作者进一步以ICM方法和FCM方法对比研究发 现Hodgkins淋巴瘤中DNA

36、异倍体细胞在形态学上多 为RS/H细胞或中等大小的具有淋巴细胞形态的细胞 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （一）何杰金氏淋巴瘤 细胞分选发现，DNA含量4-8倍于正常DNA含 量的细胞核多类似于典型的RS细胞核，而近二倍 体或近三倍体细胞核所相应的细胞在组织学切片上 尚难以确认为其是肿瘤细胞 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （一）何杰金氏淋巴瘤 （二）非何杰金氏淋巴瘤 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 从80年代后期以来，NHL细胞DNA含量FCM分 析的研究

37、很多。早期多以石蜡包埋或新鲜切除的肿 瘤组织进行分析，近年来使用针吸活检材料，亦取 得了较满意的效果 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 NHL细胞FCM DNA异倍体的检出率19%到76% 不等，多数学者认为与分型及预后无关，但亦有学 者认为与治疗反应有一定关系。而SPF则是NHL FCM DNA分析中最有意义的参数，SPF的高低与肿 瘤分型、病人存活时间的长短密切相关 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 1987年Wain等对106例NHL的免疫表型和DNA 含量进行了对比研

38、究，结果表明，B细胞NHL DNA 异倍体与表型无关，但其DNA异倍体率较T细胞NHL 高。T细胞NHL和B细胞NHL的SPF无差异 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 Young对111例NHL的分析显示，异倍体的出现 率与病人年龄、肿瘤分期及存活时间无关。 56例二 倍体 NHL的SPF值低于10%者预后较好 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 Christensson等通过对234例未经治疗的NHL病 人的活检材料进行FCM DNA 分析发现： 高度恶性NHL的 SPF明显

39、高于低度组。组织学 分化程度高、 SPF 低 (5.6%) 的病人获得完全缓解 (CR) 的机率较SPF高者高 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 在低度恶性NHL组中，DNA异倍体者对治疗反 应差、CR时间短，但S期值与治疗反应无关。SPF 与淋巴细胞型和滤泡中心细胞型NHL病人的存活有 关，但与淋巴母细胞型者无关 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 左连富等分析了32例NHL的DNA含量，发现 NHL的DNA非整倍体率为53.2%，显著低于其他恶 性实体肿瘤，非整倍体的出现率

40、随NHL的恶性度的 增高而增加。NHL细胞SPF随NHL的恶性度的增高 而增高 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 吴焕明分析了FCM DNA检测在判断NHL预后方 面的意义，发现47%NHL病例可见 DNA异倍体。其 中，中高度恶性者异倍体出现率分别为51.9%和 76.8%，明显高于低度恶性的17.6%，SPF随肿瘤恶 性程度的增高而增高，DNA 倍 体 状态与存活率无 关，但SPF与存活率密切相关 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 Macartney 对 83 例滤泡性

41、NHL 进行了 FCM DNA分析，发现 DNA 异倍体罕见，且与存活时间和 向高度恶性转化无关。肿瘤SPF增高者病人存活时 间缩短而且肿瘤在复发时向更恶性转化的危险增加。 多 因素分析结果表明SPF 5% 是滤泡性NHL决定存 活时间最重要的因素之一 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 值得注意的是NHL FCM DNA 含量异质性问题， Cowan等对197例高、中度恶性NHL DNA含量和其 预后意义及与临床病理的关系分析发现，16%肿瘤 内不同部位细胞的DNA倍体存在明显差异，肿瘤内 PI的变异在5%左右 实体肿瘤DNA倍体的F

42、CM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 Young等在48例DNA异倍体NHL中，也发现有 3例为多异倍体类型。因此，在进行NHL的FCM DNA含量分析时，应考虑取材的广泛性和代表性， 以期使FCM检测结果能充分反应NHL细胞DNA含量 的全貌 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 Joensun等以FCM方法研究了37例NHL的生物进展 情况，所 有 病 例 均 在 诊 断 后 5 个月到 15 个月 重 复 活 检，在 随访过程中，11例低度恶性肿瘤中 有 4 例(36%) 转化为中度恶性，16 例中

43、度恶性者有 4 例转化为高度恶性(25%)，上述 8例发生转化的淋 巴瘤中有5例在复发后18个月内死亡 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 不管是最初诊断，还 是 首 次 或末次重复活检， SPF均与预后密切相关，若重复活检SPF值比首次 SPF值高6%或以上，则预后差 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析 恶性淋巴瘤 FCM DNA 倍体分析 （二）非何杰金氏淋巴瘤 该研究表明在恶性淋巴瘤的发展过程中，不但 低度恶性淋巴瘤可转化为较高度恶性者，而且需高 度恶性者可转化为更恶性的形式，SPF在监视NHL 的生物学行为方面具有应用价值， 可提供

44、一些单靠 组织学研究所不能获取的信息 十、流式细胞术在软组织肿瘤的应用 单细胞悬液制备方法 1. 新鲜组织 新鲜肉瘤组织分别以机械方法和酶消化方法进行细胞分散， 检 测 发 现 机 械 法 制 备 的 样 品 检 测 C V ( C o e f f i c i e t of Variation)值较酶学法低，但获取细胞的数量和活性均不及 酶学法。 在各种消化酶中，胃蛋白酶、膜酶和透明质酸酶均无分散作 用，只有胶原酶或胶原酶和透明质酸酶合用可取得良好 的分散效果。 胶原酶的使用浓度为5mg/ml，若将其提高至10mg/ml， 获取细胞数量亦随之增高，但细胞活性下降，CV值增大。 2.石蜡包埋组织

45、： 多数工作采用Hediey的方法，但由于肉瘤本身的特点，以石 蜡包埋肉瘤组织进行FCM DNA检测，常出现较多的人工假 象及错误，限制了其临床应用。 研究发现，与新鲜组织明显不同，胶原酶对石蜡包埋肉瘤组 织消化作用甚差，而膜酶和脯蛋白酶提取均优于胃蛋白酶， 可使悬液中肿瘤细胞数增多，DNA检测结果与新鲜组织更接 近。 使用上述优化方法对50例软组织肉瘤进行了石蜡包埋组织与 新鲜组织对比FCM研究，发现石蜡包埋组织DNA检测结果的 错误率仍高于新鲜组织。 几种常见软组织肿瘤FCM DNA分析 横纹肌肉瘤： 对 70 例石蜡包埋横纹肌肉瘤进行 FCM DNA检测，发现其 中23例显示DNA 二倍

46、体、32例异倍体、8 例多倍体、7例四 倍体。与其他肿瘤明显不同，异倍体横纹肌肉瘤预后最好， 四倍体居中，二倍体及多倍体者预后最差。 多因素分析结果表明，DNA倍体是与TNM分期和发生部位 及组织学分级同样重要的独立预 后判断因素。细胞增 殖状态 对横纹肌肉瘤的预后也有影响，S期细胞比率高于15%的32 例中，仅10例长期存活， 而低于15% 的29例中有20例长期 存活。 2. 纤维组织来源肿瘤： 结节性筋膜炎、纤维瘤病和纤维肉瘤均系纤维组织的瘤样病 变或肿瘤。 对9例结节性筋膜炎、20例纤维瘤病和19例纤维肉瘤的石蜡 包埋组织进行FCM DNA倍体及增殖指数(Proliferation I

47、ndex,PI)分析结果表明，全部结节性筋膜炎和纤维瘤病均呈 DNA二倍体，而19例纤维肉瘤中有5例出现DNA异倍体。纤 维肉瘤的PI(28.1%)明显高于结节性筋膜炎(15.8%)和纤维瘤 病(16.8-17.8%)(P0.005)。 作者认为，PI增高和异倍体的出现是纤维组织来源的肿瘤生 物学行为恶性的重要标志。 3. 腱鞘及滑膜来源的肿瘤: 对具有局部侵袭特征的 7例弥漫型腱鞘巨细胞瘤和呈良性表现的11 例 局限型腱鞘巨细胞瘤及7例色素性绒毛结节性滑膜炎FCM DNA 分析 发现，7 例弥漫型臆黯巨细胞瘤中有3 例呈DNA 异倍体，4 例呈二倍 体，而所有局限型 腱 鞘巨细胞 瘤 和色素

48、 性 绒 毛结节性滑膜炎均为 DNA二倍体。 弥漫型腱鞘巨细胞瘤的PI值显著高于局限型腱鞘巨细胞瘤和色素性绒 毛结节性滑膜炎，后二者PI无差异。可见高的PI反映了弥漫型腱鞘巨 细胞瘤的快速失控的生长特性及其侵袭性的生物学特性。 Zaiupski 等研究发现作为腱鞘滑膜来源的恶性肿瘤，滑膜肉瘤中有 33%表现为DNA异倍体。 胃肠道平滑肌来源的肿瘤： 胃肠道平滑肌来源的肿瘤临床比较少见， 良恶性质区分比较 困难。Shinlamoto 等对 43 例胃平滑肌肿瘤DNA含量进行 了FCM检测，结果发现，21 例平滑肌瘤和 9/10 低度恶性 的平滑肌肉瘤均为DNA 二倍体，而高度恶性的12例平滑肌

49、肉瘤中有10例为 DNA异倍体。全部平滑肌瘤和 8/11的 二 倍体 平 滑肌肉 瘤未见复发和转移， 相反，10例DNA异倍 体平滑肌肉瘤中有8例死亡。 表明DNA倍体与组织学特征和病人预 后密切相关。 SLImki等的 研究则表明胃平滑肌肉瘤总的DNA倍体情 况与 临床病 理特征无关，但异倍体与预后和分级相关。 国内 蔡建辉等对胃肠道平滑肌系统肿瘤进行了系统研究， 发 现良性平滑肌肿瘤细胞均为DNA二倍体，潜在恶性者 33% 病例出现DNA异倍体，而平滑肌肉瘤均为DNA异倍体。癌基 因产物ras p21 及抗癌基因p53的表达在平滑肉瘤明显增高。 DNA倍体及PI与病人预后密切相关。 5.

50、血管来源的肿瘤： Fukunaga等以FCM 方法对51例血管来源的软组织肿瘤石蜡 包埋组织进行了分析，发现所有 20例毛细血管瘤、2 例梭形 细胞血管内皮瘤和2 例血管周细胞瘤均为DNA二倍体。20 例血管肉瘤中13例为二倍体，7 例为异倍体。5 例恶性血管 周皮瘤中，3例为二倍体，2例为异倍体。 尽管所有良性和中度恶性的肿瘤呈现DNA二倍体，但血管肉 瘤和恶性血管周皮瘤的组 织学类型、 DNA 倍体和临 床预后 并无明显相关关系，因此 FCM DNA 检测在预测血管来源 的恶性肿瘤的生物学行为方面的价值有限。 Eto等的研究结果亦表明67%的血管肉瘤和14%的血管周皮 瘤显示DNA异倍体，

51、而所有的良性血管肿瘤均为DNA二倍体。 随访结果表明，临床呈良性经过的血管肿瘤细胞DNA为二倍 体而多数预后差的肿瘤为异倍体。但FCM DNA倍体分析对 血管肉瘤和恶性血管周皮瘤的预后判断没有价值。 6. kaposi肉瘤： Kaposi 肉瘤一般可分为非洲地方性、经 典性和与艾滋病相 关性三大类，其来源尚有争议。kap -osi肉瘤的性质也不清 楚。 Biseeglia 等对96个病人的143例活检进行组织学和 FCM 研究结果表明， 5.8% kaposi 肉 瘤显示DNA 异倍体 (DI 1.41.6)，DNA异倍体在晚期病变较多见。 Kaposi 肉瘤 平均 S+G2 百分率为16.8

52、%，S+G2 百分率在 kaposi 肉瘤 早期斑块病变时较低，结节期则变化较大。 提示细胞增殖状 态在kaposi肉瘤的不同阶段可发生变化。 然而，据目前的 FCM检测结果并不能解决kapo -si肉瘤究 竟是增生还是肿瘤的问题。 7. 子宫肉瘤： Peters等对FCM DNA分析在子宫平滑肌肉瘤和潜在恶性的平滑肌肿 瘤应用价值进行了探讨，FCM分析的33例平滑肌肉瘤中，14例为二倍 体，19例为异倍体。两组病人的临床特征无明显区别。异倍体肿瘤更 易于出现细胞异型性。核分裂数与SPF密切相关。二倍体肿瘤的总生存 时间较异倍体肿瘤长，但无瘤生存时间则与后者无异。在最终复发的 病例中，二倍体肿

53、瘤从复发到死亡的时间明显延长。 作者认为，就区分一个子宫平滑肌肿瘤的良恶性而言，DNA倍体分析 和细胞增殖率的测量均无明显意义，但DNA倍体分析可预测肿瘤进展 时的预后，而增殖率是判断总生存时间的最好指标。 除子宫平滑肌来源肿瘤外，子宫内膜间质肿瘤也较常见。Hitchcock 等对22例子宫间内膜间质肉瘤进行了FCM DNA分析，并研究了其与 外科分期、病理分级、核分裂指数及复发的关系。22例肿瘤中只有2例 为DNA异倍体，均为晚期病人。细胞增殖状态与血管浸润、病理分级、 核分裂指数或外科分级均无明显关联。 但el-Naggar等通过对25例子宫质肿瘤的FCM分析则认为，FCM PI 是判定早

54、期子宫间质肿瘤的侵袭特征的客观的附加指征。 Malmstrom等通过对37例子宫肉瘤的FCM分析，51%为DNA异倍体， 其SPF比二倍体肿瘤高三倍，异倍体肿瘤比例与SPF值在晚期，分化低 的肿瘤中明显增高，SPF和MI高者预后差，多参数分析表明，SPF是 决定子宫肉瘤预后的重要因素。 8. 其他： Ewings肉瘤、上皮样肉瘤和乳腺叶状肉瘤的FCM结果表明， Ewings肉瘤多为DNA二倍体，而上皮样肉瘤和乳腺叶状肉 瘤均有较多的病例呈现DNA异倍体(7/11和24/60)，但DNA 倍体与肿瘤生物学行为、临床表现及病人预后无明显关系。 小结与展望 众所周知，软组织肿瘤虽然临床上不甚多见，但

55、其种类繁多， 组织结构复杂，同一来源的肿瘤良恶性质有时很难区分，分 化程度较低的肿瘤常难以确定其来源，某些良性的瘤样病变 往往易被误诊为恶性肉瘤。因此，有时单靠病理形态学方法 难以作出准确诊断。 FCM DNA检测作为定量检测肿瘤细胞DNA 含量与细胞增殖 状态的方法，同样可应用于软组织肿瘤。业已证明，肉瘤细 胞的FCM DNA含量和细胞遗传学染色体倍体具有良好的一 致性。 据近年来软组织肿瘤的FCM DNA研究工作的情况综合分析， 可见ECM DNA检测在软组织肿瘤研究领域，也具有相当重 要的应用价值，DNA含量和细胞增殖状态的FCM分析有助于 平滑肌、纤维组织、滑膜腱鞘及血管来源的肿瘤良恶

56、性质的 确定，并可作为肌源性肿瘤生物学行为和预后判断的重要依 据。另外，以细胞增殖状态做为软组织肉瘤术前化疗的依据， 可指导临床治疗。 从目前的研究结果看，除肌源性肿瘤外，其余的软组织肿瘤 的FCM DNA检测结果尚不能像多数上皮性恶性肿瘤那样作 为判断预后的依据。 软组织肿瘤的FCM DNA分析在下列诸方面亦有待进一步探 讨与完善： 1.针对软组织肿瘤种类繁多，组织结构与生化特征各不相同的情况，应 进一步开展制样方法、尤其是单细胞悬液制备方法的研究，开发针对 某一特定肿瘤的制样方法。 2.克服、消除由于自溶、组织固定、染色等对FCM DNA检测结果的影 响。 3.增加每一肿瘤检测的样品数，在

57、可能的情况下应从肿瘤的不同部位多 点取材分析，以期增强检测结果的代表性，发现肿瘤内的不同细胞干 系，克服由于肿瘤异质性(Heterogeneity)所造成的片面分析结果。 4.增加病例数量和随访时间，统一分析条件与标准，增强和扩大实验室 间的合作。 十一、骨肿瘤FCM DNA倍体分析 骨肉瘤 Bauer 等以 FCM 方法分析了原发性骨肿瘤细胞(高度恶性骨 肉瘤，骨旁骨肉瘤和在组织学上易与骨肉瘤混淆的骨良性肿 瘤) 的 DNA 含量及其在该类肿瘤诊断和鉴别诊断方面的意 义。 在作者分析的166例骨肿瘤中， 149例诊断明确，17例 诊断困难， 存在异议。诊断明确组之全部良性肿瘤和骨旁骨 肉瘤均

58、为 DNA 二倍体，而102例骨肉瘤中有97例为DNA 超 二倍体。 Alho对46例骨及软骨肿瘤进行FCM DNA分析，其中良性 24例、低度恶性11例、高度恶性11例，异倍体检出率分别 为29%、54%、82%，良性肿瘤SPF均14%，高度恶性者9/11病例14%。因此， 认为异倍体出现及高增殖活性是骨肿瘤恶性的特征。 Look等通过对临床诊断时未发现有肿瘤转移的26例骨肉瘤 进行FCM DNA检测，发现 25/26 病例均可检出超二倍体干 系，但其中 15例可见近二倍体干系与之同时存在。经 三年 随访，具有近二倍体干系的 15 例中仅2例发生肺转移，而无 近二 倍体干系 仅有 超二倍体干

59、系的骨 肉瘤70%(7/10)发生 肺转移。因此认为，近二倍体干系的存在与骨肉瘤临床经过 良好有关。 应明等对 18 例骨肉瘤及其他骨肿瘤的研究结果则表明，该组骨肉瘤 病例均为 DNA 异倍体，且有 4例出现DNA双干系。 认为异常 DNA 含量是肿瘤恶性的标志， 而DNA双干系的出现则是肿瘤高度恶性的特 征。 最近，Van Ovan 报道一病例初诊时经病理学及FCM分析为典型骨旁 骨肉瘤，但切除后8个月 , 部分肿瘤显示高度恶性特征，FCM DNA分 析也发现DNA异倍体。原发瘤切除后1年肺转移。进一步肯定了FCM DNA检测在骨肉瘤生物学行为判断方面的应用价值。 Mankin认为，通过一些

60、技术上的改进，FCM在评估骨肉瘤 病人预后和评价治疗效果方面具有一定价值。 Ewings肉瘤 Ewing氏肉瘤是儿童期最常见的骨肿瘤之一，恶性程度高，5年生存率 只有40%。 临床上须与横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤及淋巴肉 瘤鉴别。FCM分析表明，多数横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤为 DNA异倍体而Ewing氏肉瘤则多为二倍体。 Kowal-Vern等以FCM和ICM方法探讨了Ewing氏肉瘤和骨外 Ewing 氏肉瘤DNA含量、 形态学特征、 发生部位和生存时间的关系， FCM 检测的18例中， 12例为二倍体、 1例为异倍体、4例为四倍体， 另l 例不成功，ICM也得出了相似的结果，