LoadingBuffer蛋白印记教程文件

1、L o a d i ng Buf f er 蛋白印记精品文档5SDS-PAGE Loading Buffer 的配制（ 10 ml） （本方案摘自蛋白质技术手册汪家政、范明） 组分： Tris-HCl pH6.8 （60 mM ）； SDS （2%）；溴酚兰（ 0.1%）；甘油 （25%）；-巯基乙醇（ 14.4 mM）配制过程：1. 量取 1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油 5 ml；10%的 SDS溶液 2 ml；1%的溴酚兰 1 ml；2. 加入去离子水定容至 10 ml；3. 分装；4. 在 4可保存数周， -20可保存数月之久。你还可以参考下面这个配方

2、：2SDS 凝胶加样缓冲液 组分（摘自分子克隆第三版）Tris-HCl pH6.8（100 mM）； SDS （4%）；溴酚兰（ 0.2%）；甘油 （20%）；-巯基乙醇或二硫苏糖醇（ 200 mM ） 不含硫代试剂的加样 Buffer 可在室温保存。-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加 入。我想配点儿 5X 的 loading buffer, 分子克隆上写着 10%SDS ，我的配制思路是 （200ml ） 25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及 1g溴酚蓝配制到 100mL ，然后再 加 100ml 甘油，但是问题是 20gSDS 要溶解到那么小体积的水中实在是困 难，我把 S

3、DS 溶解（其实大部分是不溶的）放到 65 度烘箱里，放大概几个小 时， SDS 倒是溶了，但是变得非常黏稠，摇都摇不动的那种，跟果冻似的， 请问这样配法是不是正确，如果不正确应该怎样配，请配过的大虾教教我，最 好有详细配制流程。5X 的 loading buffer 已经配制成功，虽然 SDS 很难溶，但还是溶了。因 为 5X 的上样量可以大一些，做 western 的时候比较有用， 2X 的我有配好的， 呵呵 我想说以下几点：1.SDS-PAGE loading buffer 一般配成 2X 的，5X loading buffer 确实过于粘 稠，且 SDS 在低温下难溶于水，这就导致你配

4、的 buffer 摇“都摇不动 ”了2. 不知你为何要配那么多 loading buffer （况且是 5X 的），这些东西都是用量 很少的，建议你少配些，比如 10 ml？收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档3. 以下就以 2X loading buffer （配制 10 ml ）为例说明配制步骤首先配制 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） ，10%SDS 溶液。然后称取 0.02 g 溴酚蓝于小烧杯里，依次加入 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） 1ml，10%SDS 溶液 4ml ，甘油 2ml，去离子水 2ml，2-巯基乙醇 1ml。混匀， 分装成小份，

5、 -20 度保存。用时溶解，与样品 1:1 混合上样。需要说明的是， 2- 巯基乙醇是还原剂，也可用前加入，以防失效。5SDS-PAGE Loading Buffer TAKARA select组分浓度：? 250mM Tris-HCl （PH6.8） ;? 10% （W/V ） SDS；? 0.5% （W/V ） BPB；? 50% （V/V ）甘油；? 5% （V/V） 巯基乙醇（ 2-ME）配制量：? 5ml配制方法 ：1. 量取试剂（ 1M Tris-HCl （PH6.8） 1.25ml ；SDS 0.5g；BPB 25mg；甘 油 2.5ml ），置于 10ml 塑料离心管中。2.

6、加去离子水溶解后定容至 5ml 。3. 小份分装后室温保存。4. 使用前加入 2-ME（ 50ul/1ml ）5. 加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室温保存一个月左右。5XSDS 上样缓冲液0.5 mol/L Tris HCl （ pH6.8 ） 2.5ml 缓冲二硫叔糖醇（ DTT ， MW154.5 ） 0.39g 维持蛋白稳定SDS 0.5g 形成 SDS-PRO 复合物，使 pro 带负电溴酚蓝 0.025g 示踪指示剂收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档甘油 2.5ml 增加样品比重，利于加样（胶中甘油可减少 电渗我用的是 10ml:0.5mol/L T

7、ris-HCl(pH6.8) 1.0 ml 甘油 1.0ml20%SDS(w/v) 1.0ml-巯基乙醇 0.5ml0.1% 溴酚蓝( w/v ) 0.25ml 双蒸水 6.25mldog002 (2014-7-07 17:56:00)My 2XSDS sample bffer 配方是：2.4 ml 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)4 ml 10% SDS2ml 甘油0.5ml 0.5% 溴酚蓝0.1 ml 双蒸水-mercaptoethanol必须在水浴之前新鲜加入， 终浓度是 10%5X Sample buffer (loading buffer):10% w/v SDS10 mM Dithiothrei